FKN、MIP-1α、MCP-1在糖尿病视网膜病变患者中的表达及其与眼底图像特征、临床分期的相关性研究*

王 康 孔晓路 河南省郑州市第二人民医院眼科 450000

随着分子生物学研究的不断深入,已发现血清因子Fractalkine(FKN)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)、人巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在糖尿病的进展中起主要作用[1]。血清FKN是20世纪末发现的,参与白细胞吞噬和淋巴细胞迁移,具有趋化黏附作用。研究表明,其与心血管疾病的发展有一定的关系[2]。MIP-1α是一种趋化因子,可通过影响下游巨噬和单核细胞的富集,参与组织细胞的炎症损伤。MIP-1α的表达也可增加中性粒细胞的浸润,促进白细胞介素(IL)-6或IL-8的释放,并通过炎症因子增加上皮细胞的凋亡[3]。MCP-1属趋化因子家族β家族成员,MCP-1分子结构在细胞中表达时的糖基化程度及其产生的分子量不同。MCP-1具有明显的趋化单核细胞作用,可作用于淋巴细胞和嗜碱性粒细胞[4]。本研究通过检测DR患者FKN、MIP-1α、MCP-1水平,同时分析该三项血清因子与眼底图像特征、临床分期的相关性,旨在探讨该三项血清因子在DR患者病情进展中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2021年1月—2022年1月在我院接受治疗的110例DR患者作为研究组,其中男61例,女49例,年龄50～75岁,平均年龄(57.19±5.18)岁。纳入标准:(1)年龄≥18岁;(2)符合2型糖尿病的诊断标准[5];(3)无其他严重并发症;(4)均知情同意参与本研究。排除标准:(1)合并急性并发症、免疫、血液系统疾病;(2)不了解本研究方法和过程;(3)合并心脑血管疾病等器质性病变;(4)近期出现全身炎症。选取同期的健康体检者60例作为对照组,其中男32例,女28例,年龄48～76岁,平均年龄(58.24±5.22)岁。两组一般资料比较无统计学差异(P>0.05),具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 检测方法:所有研究对象均禁食8h,晨起抽取空腹静脉血,采样量5ml,血样于离心机上离心10min,转速3 000r/min,取上清液,在-30℃条件下保存待检,采用免疫发光法检测MIP-1水平,采用ELISA法检测MCP-1α、FKN水平,按试剂盒说明书操作。

1.2.2 眼底图像检查:对所有患者进行视力、裂隙灯、眼压和散瞳检查,然后使用上海涵飞医疗器械有限公司提供的欧姆龙(佳能)CR-2 PLUS AFT兔散瞳数字眼底照相机进行检查,并按美国早期治疗DR研究组推荐的散瞳30度7方位法:1方位:以视盘为中心;2方位:以黄斑为中心;3方位:黄斑颞侧;4～7方位:通过视盘中心的垂线和视盘上方和下方的水平线相切的方式进行拍照和拼图。

1.3 DR的临床分期 按1987年中华医学会眼科学会通过的1985年第三届全国眼底病学组讨论建议的6级分期[6]。

1.4 观察指标 (1)观察两组及不同临床分期患者血清FKN、MIP-1α、MCP-1水平差异,采用Pearson相关分析法分析DR患者血清FKN、MIP-1α、MCP-1水平与临床分期的相关性。(2)观察DRIV期患者的眼底图像特征,主要观察视网膜后极部及周边微血管的变化及病变类型、范围、形态。

1.5 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件进行数据分析。计数资料用例表示,计量资料用均数±标准差表示。两组血清FKN、MIP-1α、MCP-1水平的比较采用独立样本t检验,不同临床分期患者血清FKN、MIP-1α、MCP-1水平的比较采用单因素方差分析,采用Pearson相关分析法分析DR患者血清FKN、MIP-1α、MCP-1水平与临床分期的相关性。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清FKN、MIP-1α、MCP-1水平比较 研究组血清FKN、MIP-1α、MCP-1水平均高于对照组(P<0.05),见表1。

表1 两组血清FKN、MIP-1α、MCP-1水平比较

2.2 不同临床分期患者的血清FKN、MIP-1α、MCP-1水平比较 根据临床分期标准,Ⅰ期40例,Ⅱ期24例,Ⅲ期34例,Ⅳ期12例,不同临床分期患者血清FKN、MIP-1α、MCP-1水平比较存在统计学差异(P<0.05),见表2。

表2 不同临床分期患者的血清FKN、MIP-1α、MCP-1水平比较

2.3 DR患者血清FKN、MIP-1α、MCP-1水平与临床分期的相关性 Pearson相关分析结果显示,DR患者血清FKN、MIP-1α、MCP-1水平与临床分期均存在相关性(r=0.882、0.846、0.663,P均<0.001)。

2.4 Ⅳ期糖尿病视网膜病变患者的眼底图像特征 按美国早期治疗糖尿病视网膜病变研究组推荐的7方位法拍摄拼图。彩色照相诊断为Ⅳ期患者眼底改变为毛细血管扩张迂曲、珊瑚状新生血管及斑片状出血。

3 讨论

有研究认为,MIP-1α可促进胶原纤维蛋白的合成,加重上皮组织的增殖和纤维化[7]。另有研究人员认为MIP-1α在DR患者中的表达与DR的程度有关[8]。本研究对DR患者血清学指标的分析结果显示,研究组MIP-1α的表达显著高于对照组,且不同临床分期MIP-1α的表达存在统计学差异(P<0.05),随着临床分期的增加,其表达水平也随之升高,提示MIP-1α的高表达能影响DR的病情进展,可能是MIP-1α的表达可促进糖尿病患者微血管病变、炎症和氧化应激的发展[9]。通过参考不同的相关文献,认为其可能与MIP-1α水平的增加可增加巨噬细胞对视网膜基底细胞的吞噬作用,致视网膜基底细胞凋亡有关[10]。进一步相关性分析结果显示,MIP-1α与临床分期呈正相关,提示MIP-1α水平与DR的病情有关。MCP-1不仅作为趋化因子,还具有促凝剂的功能,由巨噬细胞通过自分泌方式分泌,然后诱导相同的细胞产生组织因子活性。MCP-1的表达表明,这些组织因子在调节DR中此类细胞的功能方面具有更大的作用。本研究为MCP-1与DR的研究,通过对比两组及不同临床分期患者的MCP-1的表达水平,得出结果:研究组血清MCP-1水平明显高于对照组(P<0.05),且与病情进展呈正相关。FKN也称为分形趋化因子。其表达可增加吞噬作用和淋巴细胞的活性,并使细胞相互黏附。因此,此物质可独立于整合素相互黏附,因此其作用时间短,经常致炎症反应,并对血管和组织造成损害。本文结果显示,研究组FKN水平明显高于对照组,且随病情的加重FKN水平也随之升高,与临床分期呈正相关(P<0.05)。分析其原因:相比健康人群,DR患者中低密度脂蛋白胆固醇的糖基化过程更快,产生的人氧化低密度脂蛋白可介导血清FKN的产生。

眼底彩色照相的水平轴设置为穿过视乳头下缘的双水平线,垂直轴设置为通过视乳头中心的垂直线;在水平轴上分别以黄斑和视乳头为中心拍摄一张照片;第三张照片是从水平轴颞侧延长线的鼻侧缘到黄斑中心拍摄的;由相互垂直的两轴形成的4～7圆形区域,即上下颞象限和上下鼻象限。所有圆的半径是从视乳头中心到黄斑中心的直线长度。临床使用眼底彩色照相作为DR的分期依据不仅简单,且可以节省成本,减轻患者的经济压力,具有良好的社会效益。在本研究中,采用了目前准确率较高的7方位彩色眼底照相法。在临床实践中,医生的年龄、学历、职称和经验存在较大差异。同一张图片的不同读片者也可能有不同的结果。同一名读片者在第一次读片和培训后读片的结果也不同。7方位眼底照相是诊断DR的重要方法,在判断疾病状况方面具有较高的可靠性。根据目前国内DR分类进行DR分期的可行性很高,尤其是在条件较差的基层医院和社区卫生机构。如果临床医生能正确掌握眼底照相的分级方法,并据此制定合理的治疗方案,将很大程度节省治疗成本,减少不必要的侵入性检查,为DR患者的全视网膜光凝治疗可提供可靠的依据[11-12]。

综上所述,DR患者血清FKN、MIP-1α、MCP-1与DR的临床分期密切相关,该三项指标在DR的损伤机制中具有协同作用,对DR患者的免疫机制和治疗具有一定的指导意义。同时7方位彩色眼底照相法可对糖尿病患者进行DR分期,临床可根据DR患者血清学指标和7方位彩色眼底图像特征判断其病情严重程度。