UPLC-MS/MS 法分析小儿感冒颗粒中白薇投料情况

李 沁，严璐佳，黄晓姗，陈在敏

（福建省食品药品质量检验研究院，福建 福州 350000）

小儿感冒颗粒由白薇、菊花等10 味中药组成，是治疗小儿风热感冒的常用中成药，用于急性上呼吸道感染、流感病毒感染等［1-5］，目前关于该制剂质量的研究大多集中在采用气相或液相色谱法控制广藿香、薄荷、板蓝根、大青叶、菊花、连翘等药味［6-15］，鲜有涉及白薇，并且尚无其专属性成分测定的报道。课题组前期对全国范围内小儿感冒颗粒的生产企业进行调研，发现一部分企业提供的白薇与2020 年版《中国药典》 规定的性状特征不一致［16］，经鉴定为萝藦科鹅绒藤属植物老瓜头CynanchumkomaroviiAl.Iljinski 的干燥根和根茎，也是目前市场上白薇最常见、最易混淆的伪品，但其全株有毒，相关成分主要是挥发油、生物碱，对动物心、肾、肺部都有不同程度的毒性作用［17-19］，故以其替代投料时将会严重影响小儿感冒颗粒临床有效性，并给患儿带来极大的安全隐患。

前期报道，穆向荣等［20］在女金丸中发现了疑似老瓜头掺伪白薇的现象，并采用HPLC-QE-Orbitrap-MS 高分辨质谱确认其特征性成分为6-芥子酰基蔗糖。本实验在此基础上建立UPLC-MS/MS 法检查小儿感冒颗粒中白薇投料情况，一方面以对羟基苯乙酮检查是否白薇投料正确，另一方面以6-芥子酰基蔗糖检查是否使用混淆品老瓜头投料，从而为该制剂质量控制提供参考。

1 材料

1.1 仪器 AB Sciex 5500 超高效液相色谱仪串联三重四极杆质谱联用仪（美国AB Sciex 公司）； XPR105 电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）； Milli-QA 超纯水机（美国默克密理博公司）； Elmasonic S150 超声波清洗器（德国艾玛公司）。

1.2 试剂与药物 对羟基苯乙酮（批号111897-201602，纯度99.9%）、6-芥子酰基蔗糖（批号112074-202201） 对照品及白薇（白薇，批号121518-202105； 蔓生白薇，批号121755-202101） 对照药材均购于中国食品药品检定研究院。老瓜头由生产企业寄送，经福建省食品药品质量检验研究院金鸣主任药师鉴定为萝藦科鹅绒藤属植物老瓜头CynanchumkomaroviiAl.Iljinski 的干燥根和根茎。缺白薇阴性样品由太极集团重庆桐君阁药厂有限公司提供，标准制剂、老瓜头阳性样品均由实验室自制，统一按小儿感冒颗粒处方、工艺模拟制备。小儿感冒颗粒来自31 家药品生产企业或经营企业，共91 批，均源于2022 年度国家药品抽检行动，覆盖全国除港澳台地区以外的31 个省（自治区、直辖市），历时5 个月，具有代表性，基本可反映该制剂本年度质量情况。乙腈、乙酸铵为色谱纯； 其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液制备

2.1.1 对照品溶液 精密称取对羟基苯乙酮、6-芥子酰基蔗糖对照品适量，甲醇溶解稀释，制成每1 mL 分别含两者19.90、22.16 μg/mL 的母液，分别精密吸取0.5、5 mL，置于100 mL 量瓶中，甲醇稀释至刻度，即得。

2.1.2 供试品溶液 取本品适量，研细，取约0.5 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入50 mL 甲醇，密塞，称定质量，超声（功率250 W，频率40 kHz） 处理30 min，放冷，甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.3 药材溶液 取药材（白薇、蔓生白薇、老瓜头）粉末0.5 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入20 mL 甲醇，超声（功率250 W，频率40 kHz） 处理30 min，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL，置于100 mL 量瓶中，甲醇稀释至刻度，即得。

2.1.4 阴性样品、阳性样品、标准制剂溶液 取缺白薇阴性样品、老瓜头阳性样品、标准制剂适量，按“2.1.2”项下方法制备，即得。

2.2 UPLC-MS/MS 分析条件

2.2.1 色谱 Waters BEH C18色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）； 流动相乙腈（A） -1 mmol/L 乙酸铵（B），梯度洗脱（0 ～9 min，6% ～18.5% A）； 体积流量0.3 mL/min；柱温30 ℃； 进样量1 μL。

2.2.2 质谱 电喷雾离子源； 负离子扫描； 多反应监测模式； 电离电压（IS） -4 500 V； 气帘气（CUR） 35.0 psi（1 psi＝6.895 kPa）； 碰撞气（CAD） 7 psi； 辅助加热气（GS1） 55.0 psi； 干燥气 （GS2） 60.0 psi； 离子化温度600 ℃，其他参数见表1。

表1 各成分质谱参数

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性试验 取对照品、药材、缺白薇阴性样品、老瓜头阳性样品、标准制剂溶液适量，在“2.2” 项条件下进样测定，结果见图1。由此可知，对羟基苯乙酮作为白薇专属性成分，同时在药材（白薇、蔓生白薇）、标准制剂溶液中检出，可用于检查制剂是否为正品投料； 6-芥子酰基蔗糖作为老瓜头专属性成分，同时在药材（老瓜头）、老瓜头阳性样品溶液中检出，可用于检查制剂是否为该伪品替代投料。

图1 各成分UPLC-MS/MS 提取离子流图

2.3.2 线性关系考察 精密吸取“2.1.1” 项下母液适量，甲醇稀释成系列质量浓度，在“2.2” 项条件下进样测定。以对照品质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行回归，并分别以信噪比（S/N） ＝10、3 为定量限、检出限，结果见表2，可知各成分在各自范围内线性关系良好。

表2 各成分线性关系

2.3.3 精密度试验 取本品（生产企业AA，批号201213）适量，按“2.1.2” 项下方法制备供试品溶液，在“2.2”项条件下进样测定6 次，测得对羟基苯乙酮、6-芥子酰基蔗糖峰面积RSD 分别为1.04%、1.10%，表明仪器精密度良好。

2.3.4 稳定性试验 取同一份供试品溶液（生产企业AA，批号201213），室温下于0、5、10、15、20、25 h 在“2.2” 项条件下进样测定，测得对羟基苯乙酮、6-芥子酰基蔗糖峰面积RSD 分别为1.97%、1.98%，表明溶液在25 h内稳定性良好。

2.3.5 重复性试验 取本品（生产企业AA，批号201213）6 份，按“2.1.2” 项下方法制备供试品溶液，在“2.2” 项条件下进样测定，测得对羟基苯乙酮、6-芥子酰基蔗糖含量RSD 分别为1.52%、1.80%，表明该方法重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验 取各成分含量已知（对羟基苯乙酮5.98 μg/g、6-芥子酰基蔗糖55.18 μg/g） 的本品（生产企业AA，批号201213） 9 份，每份约0.25 g，精密称定，平均分成3 组，分别精密加入对羟基苯乙酮（1.99 μg/mL）对照品溶液0.8、1.0、1.2 mL 及6-芥子酰基蔗糖（22.16 μg/mL） 对照品溶液0.5、0.6、0.8 mL，按“2.1.2” 项下方法制备供试品溶液，在“2.2” 项条件下进样测定，计算回收率，结果见表3。

表3 各成分加样回收率试验结果（n＝9）

2.3.7 基质效应考察 精密吸取“2.1.1” 项下母液适量，分别用甲醇、缺白薇阴性样品溶液稀释成含对羟基苯乙酮0.019 9、0.398、1.99 μg/mL，6-芥子酰基蔗糖0.055 4、1.108、5.54 μg/mL 的溶液，在“2.2” 项条件下进样测定，计算基质效应。结果，不同质量浓度对羟基苯乙酮基质效应分别为104.1%、100.5%、99.0%，6-芥子酰基蔗糖分别为103.5%、100.3%、98.9%，表明其影响较小。

2.4 样品含量测定 取31 家生产企业91 批样品，按“2.1.2” 项下方法平行制备3 份供试品溶液，在“2.2” 项条件下进样测定，计算含量，结果见表4。由此可知，有32 批样品存在投料问题，总不合格率为35.2%，来自14 家生产企业，占总数的45.2%； 投料情况分为4 种，分别为未投料 （1 批，占比1.1%）、正品投料 （59 批，占比64.8%）、掺杂投料（10 批，占比11.0%）、全伪投料（21批，23.1%），表明老瓜头替代白薇投料是一种普遍现象，其原因可能是两者性状相近，极易混淆，部分生产企业药材鉴定水平较低，无法分辨而导致误买误用，另外老瓜头分布广泛，资源丰富，价格低廉，也不排除部分生产企业存在为节约成本以其代替白薇投料的可能。

表4 各成分含量测定结果（n＝3）

各成分含量分布见图2，可知对羟基苯乙酮含量分布较集中，表明正品投料时其差异较小，制剂质量稳定； 6-芥子酰基蔗糖含量差异较大，可能是由于老瓜头掺伪量不同，或6-芥子酰基蔗糖在老瓜头中含量差异较大所致。

图2 各成分含量分布

3 讨论

本实验考察了提取溶剂50% 甲醇、70% 甲醇、甲醇、70%乙醇、乙醇，提取方式超声、加热回流，以及提取时间20、30、40 min，发现最优提取条件为甲醇超声提取30 min。另外，流动相中加入适量乙酸铵可加强离子响应，并且其效果优于甲酸铵、甲酸、乙酸，但其浓度过大时会产生离子抑制效果，在1 mmol/L 时最佳。

对羟基苯乙酮作为白薇特征性成分，在广东、四川、山东公布的白薇配方颗粒的标准中均有收录； 6-芥子酰基蔗糖作为老瓜头特征性成分，在文献［20］ 中首次报道，研究表明该药材冒充白薇经原粉投料时，可通过液相色谱-紫外检测器在女金丸中检查出该成分。本实验发现，投料用的药材经提取后药味较多，成分复杂，仅使用紫外检测器时特征峰容易受到其他色谱峰的干扰，影响判定结果。

4 结论

为了避免检测出现假阳性，增加检查方法的专属性、准确性、灵敏性，提高特征性成分检查的适用性，本实验建立UPLC-MS/MS 方法检查小儿感冒颗粒中白薇投料情况，并且同时使用了白薇专属性成分、混淆品老瓜头标志性成分，该方法简便快速，准确灵敏，兼顾定性、定量分析，能科学准确地反映上述情况，并可为含白薇制剂的掺伪检查提供参考。