精神分裂症病人外周血长链非编码RNA核富集转录本1表达与临床症状相关性分析

史梁，常全文，朱玮国，李娜，李丽娟，赵腾飞，李永

作者单位：1菏泽市第三人民医院（菏泽市精神卫生中心）精神科，山东 菏泽274009；2河北医科大学第一医院精神卫生中心，河北 石家庄050000

精神分裂症（schizophrenia，sch）是一种严重的精神障碍性疾病，常发生于青年或壮年时期，病情反复，具有较高的复发率及致残率，常需要终身治疗，目前对sch确切的发生机制尚不清楚，研究认为神经发育障碍是其病理机制之一［1-2］。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）在参与调节神经发育、神经可塑性等中枢神经系统疾病中发挥重要作用［3］。长链非编码RNA核富集转录本1（lncRNA NEAT1）是lncRNA之一，研究显示lncRNA NEAT1可通过调控靶基因表达，参与阿尔茨海默病、帕金森病等中枢神经系统疾病的病理生理过程［4-5］。Katsel等［6］研究显示，lncRNA NEAT1在sch病人多个皮质区低表达，其机制可能与NEAT1参与调节少突胶质细胞功能有关。目前lncRNA NEAT1在sch临床中的研究较少，本研究探讨sch病人外周血lncRNA NEAT1表达及与精神症状和认知功能的相关性，为sch的病理机制提供理论基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2019年6月至2022年3月菏泽市第三人民医院及河北医科大学第一医院精神科收治的sch病人73例作为观察对象（sch组），其中男41例，女32例，年龄范围23～58岁，年龄（46.60±10.30）岁。纳入标准：①符合国际疾病分类第10版（ICD-10）中诊断标准［7］；②病人均为首次发病且未使用抗精神类疾病药物；③病人或其监护人知情同意。排除标准：①患有强迫症、抑郁症、人格障碍等其他精神疾病；②脑外伤、脑血管疾病、精神疾病或严重躯体疾病；③有自杀或自残倾向；④乙醇或药物成瘾者；⑤妊娠期或哺乳期妇女。另选取同期在这两家医院体检人员（无精神病障碍史及无精神疾病家族史）68例作为对照组，其中男38例，女30例，年龄范围24～60岁，年龄（45.10±9.70）岁。本研究经菏泽市第三人民医院及河北医科大学第一医院医学伦理委员会批准（批号201952604）。

1.2 研究方法

1.2.1 lncRNA NEAT1水平检测 采集病人空腹静脉血5 mL，采用密度梯度离心法分离外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），Trizol试剂（MT0011，百奥莱博）提取PBMC中总RNA，取1μg RNA按照TaqMan mocrroRNA反转录试剂盒（MT0006，百奥莱博）说明反转录为互补DNA，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）法检测lncRNA NEAT1表达，按照TaqMan探针荧光定量PCR试剂盒（WK063，百奥莱博）说明书在PCR仪（ABI7900，Applied Biosystems）上进行扩增，总反应体系25 μL，共40个循环，lncRNA NEAT1及内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）的引物购自上海生工生物工程有限公司，其中lncRNA NEAT1正向引物序列5'-GGCAGGTCTAGTTTGGGCAT-3'，反向引物序列5'-CCTCATCCCTCCCAGTACCA-3'；GAPDH正向引物序列5'-CCAGGTGGTCTCCTCTGA-3'，反向引物序列5'-GCTGTAGCCAAATCGTTGT-3'。反应结束后，以GAPDH为内参，采用2-ΔΔCt法计算lncRNA NEAT1表达水平。

1.2.2 精神症状与认知功能评估 采用阳性与阴性症状量表（positive and negative symptom scale，PANSS）对病人精神状态进行评估，PANSS包含阳性症状、阴性症状和一般精神病理3个分量表，评分越高，症状越重。采用蒙特利尔认知评估量表（montreal cognitive assessment，MoCA）对病人认知功能进行评分，共包含7个评分项目，MoCA≥26分表示认知功能正常，MoCA＜26分表示认知功能障碍。

1.3 统计学方法 采用SPSS 22.0进行统计学分析，计量资料符合正态分布用表示，两组间比较采用t检验；计数资料采用例表示，组间比较采用χ2检验；Spearman法分析sch病人外周血lncRNA NEAT1表达与PANSS评分、MoCA评分的相关性，采用受试者操作特征（ROC）曲线分析外周血lncRNA NEAT1水平对sch的诊断价值。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 sch组与对照组性别、年龄、身体质量指数（BMI）、受教育年限及居住地等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 精神分裂症（sch）73例与体检人员（无精神病障碍史及无精神疾病家族史）68例一般资料比较

2.2 sch病人外周血lncRNA NEAT1表达水平及诊断价值 对照组、sch组病人外周血lncRNA NEAT1表达水平分别为1.05±0.21、0.73±0.15，两组比较差异有统计学意义（t=10.47，P＜0.001），lncRNA NEAT1诊断sch的ROC曲线下面积为0.82，截断值为0.89，灵敏度为79.45%，特异度为73.93%，见图1。

图1 长链非编码RNA核富集转录本1（lncRNA NEAT1）对精神分裂症（sch）的诊断价值

2.3 sch病人PANSS量表评分及认知功能 sch病人PANSS量表总评分为（79.10±8.70）分，其中阳性症状、阴性症状、精神病理症状分别为（25.30±3.20）分、（23.10±3.50）分、（30.70±6.50）分；sch病人MoCA评分为（20.60±6.32）分，较对照组（28.10±1.60）分显著降低（t=9.50，P＜0.001）。

2.4 lncRNA NEAT1与sch病人临床症状相关性分析显示，lncRNA NEAT1与PANSS量表阴性症状评分和总分呈负相关（P＜0.05），lncRNA NEAT1与MoCA评分的执行能力、注意力、延迟记忆和总分呈负相关（P＜0.05），见表2。

表2 lncRNA NEAT1与sch病人临床症状相关性

3 讨论

sch常伴有感知、思维、情感、行为异常以及精神活动的不协调，还伴有明显的认知功能受损，严重影响病人正常生活［8］。目前对sch的诊断主要以精神症状作为判定，存在主观性，因此研究sch发病机制，寻找诊断标志物，对sch的诊疗具有重要意义［9］。

lncRNA多位于细胞核内，在脑组织中表达广泛，报道显示，sch病人脑组织与外周血中lncRNA异常表达，与sch病人的精神症状有关，如NONHSAT021545、NONHSAT041499在sch病人PBMC中表达水平升高，与sch的阴性症状、阳性症状评分有关［10］。lncRNA NEAT1是lncRNA之一，参与调节神经发生、脑发育、神经可塑性等许多神经特异性过程，在癫痫、多发性硬化症、帕金森病等疾病的发生发展中发挥重要作用［11-12］。研究显示，lncRNA NEAT1可靶向抑制微RNA-29b-3p的表达，抑制Toll样受体4/核因子κB信号通路，降低癫痫模型海马神经元的凋亡［13］。另有研究显示，lncRNA NEAT1在未治疗的sch病人外周血中表达水平显著降低，在经过治疗的sch病人外周血中表达水平显著升高，且与对照组差异无统计学意义［14］。本研究结果显示，lncRNA NEAT1在sch病人外周血中表达水平降低，与先前报道一致，提示lncRNA NEAT1可能与sch发病有关，ROC曲线分析显示，lncRNA NEAT1对sch有一定诊断价值，但lncRNA NEAT1在sch中的作用机制尚不清楚，lncRNA NEAT1诊断sch的实用性与有效性仍需更深入地研究。

lncRNA可通过对基因的选择性剪接，调节神经系统功能，lncRNA可通过调控细胞凋亡与自噬、氧化应激、炎症反应等过程影响脑神经功能，参与重度抑郁症、阿尔茨海默病等精神疾病的发展［15-16］。在sch中，lncRNA可调控与sch相关的基因表达、介导免疫炎症反应与影响大脑结构和神经突触可塑性［17-18］。研究显示，LncRNA-AC006129.1通过DNA甲基化介导的转录因子Capicua下调在精神分裂症中重新激活细胞因子信号转导抑制因子3表达，增强炎症反应［19］。lncRNA NEAT1可竞争性结合微RNA-339-5p并上调同源框A1表达，抑制缺氧缺血条件下神经元细胞凋亡，在保护脑损伤方面发挥一定作用［20］。此外，lncRNA NEAT1还可促进Toll样受体2通路激活，促进白细胞介素6、趋化因子CC基序配体2等炎性因子释放，参与免疫调节，促进炎症性疾病的发展［21］。以上研究表明lncRNA NEAT1对神经免疫炎症反应起着重要作用，且大量研究也表明，免疫炎症反应参与sch的发生发展，因此，本研究推测lncRNA NEAT1可能通过免疫炎症反应影响sch的临床症状。相关研究表明：免疫炎性反应与sch的阴性症状和认知功能密切相关［22］。本研究结果显示：lncRNA NEAT1与PANSS量表阴性症状评分和总分呈负相关，与MoCA评分的执行能力、注意力、延迟记忆和总分呈负相关，提示lncRNA NEAT1表达水平与sch病人的疾病严重程度与认知功能损伤相关，证实lncRNA NEAT1可能通过调节免疫炎性反应参与sch的发生发展。但本研究临床样本量较少，后期将扩大样本量进一步观察lncRNA NEAT1表达变化与临床症状之间的相关性。

综上所述，lncRNA NEAT1在sch病人外周血中表达水平降低，与sch病人精神症状和认知功能有关，可能参与sch的发生发展。由于研究临床资料少，lncRNA NEAT1与sch发生发展的具体作用机制尚未明确，需结合动物模型做进一步研究。