桑叶化学成分研究

赵金梅 孟凡林 王楠 张贵会

摘 要：目的：针对桑叶95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位的化学成分进行研究。方法：利用硅胶柱色谱、ODS柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和制备HPLC等色谱技术对化学成分进行分离；利用质谱、核磁共振波谱等鉴定技术，结合文献数据，鉴定化合物结构。结果：从桑叶95%乙醇提取物分离得到10个化合物，分别为紫云英苷（1）、槲皮素-3-O-洋槐糖苷（2）、山奈酚（3）、槲皮素-3-O-β-D木糖苷（4）、山奈酚-3-O-芸香糖苷（5）、山柰酚7-O-β-D-葡萄糖苷（6）、熊果酸（7）、矢车菊素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷（8）、香橙素（9）、没食子酸（10）。结论：鉴定出的化合物1、2、4、5、6为首次从该植物中分离得到。

关键词：桑叶；化学成分；结构鉴定

Chemical Constituents from the Leaves of Morus nigra L.

ZHAO Jinmei1， MENG Fanlin2， WANG Nan2， ZHANG Guihui2*

（1.Horqin Left Wing Middle Banner Menda Central School Tongliao City， Tongliao 029100， China; 2.Zhalute Banner Market Inspection and Testing Center， Tongliao 029100， China）

Abstract Objective： To study the chemical constituents of the ethyl acetate fraction from the ethanol extract of the leaves of Morus nigra L. Method： The chemical constituents were isolated by means of silica gel column chromatography， reverse phase ODS chromatography， Sephadex LH-20 gel column chromatography and prepared high performance liquid chromatography; the structures of the compounds were identified by means of mass spectrometry， nuclear magnetic resonance spectroscopy and lit-erature data. Result： Ten compounds were isolated from the ethanol extract of the leaves of Morus nigra L.， and identified as astragalin（1）， quercetin-3-O-robinobioside（2）， kaempferol（3）， quercetin-3-o-β-D-xylopyranoside（4）， kaempferol-3-o-rutoside（5）， kaempferol-7-o-β-D-glucopyranoside（6）， ursolicacid（7）， cyanidin-3-o-β-D-galactopyranoside（8）， aromadendrin（9）， gallic acid（10）. Conclusion： Compounds 1， 2， 4， 5， 6 are isolated from the plan for the first time.

Keywords： leaves of Morus nigra L.; chemical constituents; structural identification

隨着生活水平的提升，人们的保健意识越来越强，西药由于自身的理论局限性，很难从整体上满足人们快节奏的生活需求。而中医药中存在着大量高效低毒的先导化合物，对其化学成分进行研究具有重要的意义。桑叶属于药食同源类物质，味苦、甘、性寒、归肺、肝经[1-2]，具有疏风清热、凉血明目、清肺润燥的功效[3-4]。本课题组前期对桑叶中的主要活性物质黄酮、生物碱、多糖的提取工艺、含量测定、结构鉴定等进行了较为系统的研究，发现其中一些化合物具有较强的生物活性[5-7]。本实验对桑叶乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位进行系统的化学成分研究，分离鉴定出10个化合物，分别为紫云英苷（1）、槲皮素-3-O-洋槐糖苷（2）、山奈酚（3）、槲皮素-3-O-β-D-木糖苷（4）、山奈酚-3-O-芸香糖苷（5）、山柰酚7-O-β-D-葡萄糖苷（6）、熊果酸（7）、矢车菊素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷（8）、香橙素（9）、没食子酸（10）。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备

Thermo TSQ Quantum三重四极杆液质联用仪（美国赛默飞世尔有限公司）；2767 waters制备液相色谱（美国waters公司）；e2695高效液相色谱仪（沃特世科技有限公司）；C-605中压柱色谱系统（瑞士步琪有限公司）；RE-5299旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；MS105DU电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；AV 800超导脉冲傅立叶变换核磁共振波谱仪（德国Bruker公司）；DEF-6020真空干燥箱（上海鸿都电子科技有限公司）；超纯水机（成都超纯科技有限公司）。

1.2 材料与试剂

葡聚糖凝胶填料SephadexLH-20瑞典pharmacia公司；反相ODS色谱美国waters公司；制备型液相色谱柱（300 mm×21 mm，10 μm），美国Waters公司；液相色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），美国Waters公司；柱色谱硅胶80～100目、薄层层析用聚酰胺，青岛海洋化工有限公司；甲醇、乙腈色谱纯；其他化学试剂均为市售分析纯，。

桑叶于2021年8月采集，采自新疆维吾尔族自治区和田地区，经扎鲁特旗市场检验检测中心孟凡林中药师鉴定为Morus nigra L.。桑叶粉碎过100目筛备用。

1.3 实验方法

取过100目筛的桑叶粉末3.2 kg，用95%乙醇渗漉提取，渗漉得到的药液经60 ℃水浴真空旋转蒸发仪浓缩，直至无醇味后得浸膏450.98 g，加入热水溶解混悬，用乙酸乙酯剧烈振摇萃取4次，每次用量为1.5 L。合并萃取液旋转蒸发至近干，减压浓缩得到乙酸乙酯浸膏122.36 g。取部分浸膏用甲醇溶解后加入硅胶搅拌均匀，进行干法上样。

用甲醇-乙酸乙酯（80∶20→50∶50→

20 ∶80，体积比）梯度洗脱，经TLC薄层HPLC检测后合并相似组分，得到5个活性段（Fi.1～Fi.5）。其中，Fi.2经C18中压色谱柱，用30%～40%甲醇梯度洗脱，得到Fi.2-1和Fi.2-2组分；Fi.2-1和Fi.2-2经高压制备色谱，以30%～40%甲醇水梯度洗脱，得到化合物1（6.2 mg）和化合物8（8.9 mg）。Fi.4经C18中压柱色谱，用20%～30%甲醇梯度洗脱，得到化合物4（16.7 mg）。Fi.1反复多次上样于Sephadex LH-20凝胶柱色谱，以甲醇洗脱、纯化，得到化合物2（10.4 mg）。Fi.3经C18中压色谱柱，用10%～30%甲醇梯度洗脱，得到Fi.3-1和Fi.3-2组分，Fi.3-1重结晶得到化合物3（9.8 mg）；将Fi.3-2经高压制备色谱，分别用10%～30%的甲醇梯度洗脱，得到化合物5（6.3 mg）。Fi.5经C18中压色谱柱，用20%～40%甲醇梯度洗脱，得到Fi.5-1和Fi.5-2组分，Fi.5-2经Sephadex LH-20柱色谱，以甲醇洗脱，经高压制备色谱得化合物7（18.5 mg）。Fi.5-1进行硅胶柱色谱分离，以乙酸乙酯-甲醇（80∶20→50∶50→20 ∶80）梯度洗脱，得到

3个组分Fi.5-1-1～Fi.5-1-3，Fi.5-1-1进行硅胶柱色谱分离，以乙酸乙酯-甲醇（60∶40）洗脱，得化合物10（25.7 mg）；Fi.5-1-2经Sephadex LH-20柱色谱，以甲醇洗脱，得到化合物6（24.5 mg）；Fi.5-1-3经Sephadex LH-20柱色谱，以甲醇水洗脱，经高压制备色谱得化合物9（8.8 mg）。

2 结果与分析

化合物1为淡黄色粉末，C21H20O11，电喷雾电离质谱m/z：447.44[M-H]-；1H-NMR（DMSO-d6，

800 MHz）δ：8.04.（2H，d，J=8.9 Hz，H-2′，-6′），6.87（2H，d，J=8.9 Hz，H-3′，-5′），12.66

（1H，s，5-OH），6.08（1H，d，J=2.2 Hz，H-6），

6.50（1H，d，J=2.2 Hz，H-8），5.59（1H，d，J=7.8 Hz，Glc-H-1），3.10～3.55（6H，m，Glc-H）；13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：177.55（C-4），161.88（C-5），164.12（C-7），160.25（C-4′），156.87（C-8a），156.52（C-2），133.08（C-3），130.84（C-2′，6′），121.03（C-1′），115.47（C-3′，5′），104.64（C-4a），101.35（C-1″），98.08（C-6），94.33（C-8），77.92（C-3″），76.39（C-5″），73.29（C-2″），69.68（C-4″），60.28（C-6″）。该数据与文献[8]中的化合物进行比对，发现结构基本一致。故鉴定为紫云英苷。

化合物2为黄色粉末（甲醇），C27H30O16，电喷雾电离质谱m/z：611.52[M+H]+； 1H-NMR（CD3OD，800 MHz）δ：7.87（1H，s，H-2′），7.49（1H，d，J=7.8 Hz，H-6′），6.88（1H，d，J=7.7 Hz，H-5′），6.28（1H，brs，H-8），6.39（1H，brs，H-6），5.15（1H，d，J=7.8 Hz，H-1″），4.22（1H，brs，H-1′′′），3.81（1H，m，H-2″），3.82（1H，m，H-4″），3.84（1H，m，H-6″b），3.55（1H，m，H-5″），3.66（1H，m，H-2′′′），3.75（1H，m，H-3″），3.52（1H，m，H-5′′′），3.54（1H，m，H-3′′′），3.45（1H，m，H-6″a），3.26（1H，m，H-4′′′），1.25（3H，d，J=6.0 Hz，H-6′′′）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：158.8（C-2），135.9（C-3），179.6（C-4），163.3（C-5），100.5（C-6），167.1（C-7），95.2（C-8），158.9（C-9），106.3（C-10），122.4（C-1′），118.8（C-2′），145.8（C-3′），150.2（C-4′），116.5（C-5′），123.4（C-6′），105.6（C-1″），74.5（C-2″），75.3（C-3″），70.9（C-4″），75.4（C-5″），67.7（C-6″），102.1（C-1′′′），72.3（C-2′′′），72.5（C-3′′′），73.6（C-4′′′），69.9（C-5′′′），18.8（C-6′′′）。以上數据与文献报道一致[9]，故鉴定为槲皮素-3-O-洋槐糖苷。

化合物3为淡黄色粉末，C15H10O6喷雾电离质谱m/z：287.52[M+H]+；1H-NMR（DMSO-d6，

800 MHz）δ：12.54（1H，s，5-OH），10.87（1H，s，7-OH），10.66（1H，s，3′-OH），9.45（1H，s，3-OH），8.00（2H，d，J=8.7 Hz，H-2′，6′），6.95（2H，d，J=8.8，Hz，H-3′，5′），6.54（1H，d，J=8.7 Hz，H-8），6.20（1H，d，J=2.3 Hz，H-6）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：176.55（C-4），164.88（C-7），161.12（C-4′），159.25（C-9），156.65（C-5），147.52（C-2），136.08（C-3），130.84（C-2′，6′），122.03（C-1′），115.97（C-3′，5′），103.64（C-10），99.08（C-6），93.33（C-8）。以上数据与文献报道一致[10]，故鉴定为山奈酚。

化合物4为黄色粉末，C20H18O11喷雾电离质谱

m/z：435.52[M+H]+；1H-NMR（DMSO-d6，800 MHz）

δ：12.64（1H，s，5-OH），10.90（1H，s，7-OH），9.76（1H，s，4′-OH），9.35（1H，s，3′-OH），7.50（1H，d，J=2.7 Hz，H-2′），7.55（1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，H-6′），6.84（1H，d，J=8.4 Hz，H-5′），6.40（1H，d，J=2.3 Hz，H-8），6.15（1H，s，H-6），5.45（1H，d，J=7.8 Hz，H-1″）；13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ：177.85（C-4），164.78（C-7），161.12（C-5），156.75（C-2），156.87（C-9），149.52（C-4′），145.08（C-3′），133.84（C-3），121.93（C-6′），121.47（C-1′），116.64（C-5′），115.35（C-2′），104.08（C-10），102.33（C-1″），99.22（C-6），94.39（C-8），76.29（C-3″），74.68（C-2″），69.28（C-4″），66.58（C-5″）。以上数据与文献报道一致[11]，故鉴定为槲皮素-3-O-β-D-木糖苷。

化合物5为白色粉末，C27H30O15，电喷雾电离质谱m/z：595.59[M+H]+；1H-NMR（CD3OD，800 MHz）δ：8.17（2H，d，J=9.0 Hz，H-2′/H-6′），6.79（2H，d，J=9.0 Hz，H-3′/H-5′），6.45（1H，d，J=2.4 Hz，H-8），6.23（1H，d，J=2.4 Hz，H-6），5.22（1H，d，J=7.2 Hz，H-1glc），4.50（1H，s，H-1rha）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：158.47（C-2），135.46（C-3），179.56（C-4），105.18（C-4a），163.22（C-5），100.11（C-6），166.25（C-7），95.21（C-8），159.63（C-8a），122.90（C-1′），132.55（C-2′/C-6′），116.34（C-3′/C-5′），161.47（C-4′），3-O-Glc，102.61（C-1glc），75.91（C-2glc），78.34（C-3glc），71.61（C-4glc），77.32（C-5glc），68.17（C-6glc），rha，102.16（C-1rha），72.22（C-2rha），72.54（C-3rha），74.50（C-4rha），69.89（C-5rha），18.10（C-6rha）。以上数据与文献报道一致[12]，故鉴定为山奈酚-3-O-芸香糖苷。

化合物6为黄色粉末，C21H20O11，电喷雾電离质谱m/z：595.59[M+H]+；1H-NMR（DMSO-d6，

800 MHz）δ：7.9（2H，d，J=8.3 Hz，H-2′，6′），6.96（2H，d，J=8.2 Hz，H-3′，5′），6.48（1H，brs，H-8），6.25（1H，brs，H-6），5.52（1H，d，J=7.5 Hz，H-1″）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：147.28（C-2），136.26（C-3），177.23（C-4），161.22（C-5），98.00（C-6），162.13（C-7），93.19（C-8），156.15（C-9），104.21（C-10），121.25（C-1′），131.41（C-2′，6′），115.13（C-3′，5′），160.33（C-4′），101.33（C-1″），74.24（C-2″），76.65（C-3″），70.24（C-4″），75.17（C-5″），62.15（C-6″）。以上数据与文献报道一致[13]，故鉴定为山柰酚7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物7为白色粉末，C30H48O3，电喷雾电离质谱m/z：457.68[M+H]+；1H-NMR（DMSO-d6，800 MHz）δ：11.81（1H，s，COOH），5.14（1H，t，J=3.7 Hz，H-12），3.55（1H，m，H-3），2.15（1H，d，J=11.3 Hz，H-18），1.15（3H，s，24-CH3），0.95（3H，s，26-CH3），0.91（3H，s，25-CH3），0.87（3H，s，23-CH3），0.88（3H，d，J=6.4 Hz，30-CH3），0.86（3H，s，27-CH3），0.68（3H，d，J=6.0 Hz，29-CH3）；13C-NMR（150 MHz，DMSO-d6）δ：38.19（C-1），27.14（C-2），77.23C-3），38.91（C-4），55.22（C-5），18.15（C-6），33.22（C-7），40.24（C-8），47.23（C-9），36.18（C-10），23.275（C-11），125.40（C-12），138.16（C-13），42.11（C-14），28.27（C-15），124.31（C-16），47.15（C-17），52.18（C-18），39.10（C-19），38.17（C-20），30.26（C-21），37.10（C-22），28.10（C-23），16.36（C-24），5.72（C-25），17.14（C-26），23.31（C-27），178.28（C-28），17.25（C-29），21.36（C-30）。以上数据与文献报道一致[14]，故鉴定为熊果酸。

化合物8为紫黑色粉末，C21H21O11，电喷雾电离质谱m/z：449.25[M]+；1H-NMR（CD3OD，800 MHz）

δ：8.95（1H，s，H-4），8.26（1H，dd，J=2.0，

8.0 Hz，H-6′），7.18（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），

6.83（1H，d，J=8.0 Hz，H-5′），6.84（1H，brs，H-8），6.67（1H，brs，H-6），5.26（1H，d，J=7.2 Hz，H-1″）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：64.60（C-2），145.18（C-3），137.22（C-4），159.12（C-5），102.22（C-6），170.15（C-7），94.58（C-8），157.82（C-9），113.25（C-10），121.23（C-1′），117.115（C-2′），147.24（C-3′），158.19（C-4′），115.32（C-5′），128.23（C-6′），104.90（C-Gal-1），72.23（C-Gal-2），74.26（C-Gal-3），70.23（C-Gal-4），77.22（C-Gal-5），62.78（C-Gal-6）。以上数据与文献报道一致[15]，鉴定为矢车菊素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷。

化合物9为黄色针晶，C15H12O6，电喷雾电离质谱m/z：311.40[M+Na]+；1H-NMR（CD3OD，

800 MHz）δ：7.46（2H，d，J=7.8 Hz，H-2′，6′），6.82（2H，d，J=7.8 Hz，H-3′，5′），6.52（1H，d，J=1.8 Hz，H-8），5.66（1H，d，J=1.8 Hz，H-6），4.95（1H，d，J=12.6 Hz，H-2），4.56（1H，d，J=126 Hz，H-3）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：84.25（C-2），72.10（C-3），203.16（C-4），152.17（C-5），93.15（C-6），170.14（C-7），101.15（C-8），159.28（C-9），99.57（C-10），115.3（C-1′），128.11（C-2′），109.58（C-3′），161.22（C-4′），109.64（C-5′），128.16（C-6′）。以上数据与文献报道对照基本一致[16]，故鉴定为香橙素。

化合物10为针状结晶，C7H6O5，电喷雾电离质谱m/z：171.10[M+H]+；1H-NMR（CD3OD，800 MHz）

δ：7.05（2H，s，H-2，H-6）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：120.54（C-1），108.25（C-2，6），

14.88（C-3，5），138.65（C-4），170.14（C-7）。以上數据与文献报道对照基本一致[17]，故鉴定为没食子酸。

3 结论

本实验从桑叶中分离得到10个化合物，其中黄酮类化合物8个，三萜类化合物1个，有机酸类化合物1个，其中化合物1、2、4、5和6为首次从该植物中分离得到。为了拓展人们对桑属植物物质基础的认识，有必要对其化学成分进行分离鉴定，从而为该属植物的开发与利用提供理论依据，为合成药物、新药研发、人类的健康不断提供活性的先导化合物。

参考文献

[1]WANG L， GONGT，CHEN R Y.Two new prenylfla-vonoids from Morus nigra L.[J].Chinese Chemical Letters，2009，20（12）：1469-1471.

[2]孙红，车庆明，孟繁敏.RP-HPLC法测定桑叶中N-甲基-1-脱氧野尻霉素[J].中草药，2007（6）：858-860.

[3]欧阳华学，黎源倩，肖全伟.HPLC法测定桑叶中1-脱氧野尻霉素[J].中草药，2007（5）：774-776.

[4]王磊.黑桑化学成分及生物活性研究[D].北京：中国协和医科大学，2008.

[5]张贵会.新疆桑叶黄酮类化合物提取分离及协同抗氧化活性研究[D].阿拉尔：塔里木大学，2016.

[6]郝蒙蒙.新疆桑叶中活性组分的提取及对α-葡萄糖苷酶抑制作用的研究[D].阿拉尔：塔里木大学，2018.

[7]李炳钦.新疆桑叶化学成分和生物活性研究[D].阿拉尔：塔里木大学，2019.

[8]刘雨.野棉花化学成分研究[D]恩施：湖北民族大学，2019.

[9]NAM T G，LEE S M，PARK J H，et al.Flavonoid analysis of buck wheat sprouts[J].Food Chem，2015，170：97-101.

[10]屈珅玥，魏小东，赛曼，等.大花红景天化学成分的研究[J].中成药，2020，42（12）：3199-3203.

[11]孙崇鲁，俞松林，李士敏，等.乌药叶化学成分的研究[J].中成药，2022，44（2）：464-469.

[12]KAZUMA K，TAKAHASHI T，SATO K，et al.Quinochalcones and flavonoids from fresh florets in different cultivars of Carthamus tinctorius L.[J].Biosci Biotechnol Biochem，2000，64（8）：1588-1599.

[13]LEE E J，MOON B H，PARK Y H，et al.Effects of hydroxy and methoxy substituents on NMR data in flavonols[J].Bull Korean Chem Soc，2008，29（2）：507-510.

[14]匡蕾，肖春荣，涂林锋，等.山香圆叶化学成分的研究[J].中药材，2019，42（11）：2570-2573.

[15]林启凰，张娜，陈仲巍，等.红桑叶化学成分研究[J].中药材，2020，43（6）：1364-1367.

[16]王治阳，唐素勤，叶同生.瓣蕊唐松草化学成分的分离鉴定[J].中药材，2019，42（9）：2066-2069.

[17]方勇.海南产大叶仙茅化学成分的研究[D].合肥：安徽医科大学，2019.