聚合酶链反应（PCR）分析仪测量结果的不确定度评定

【摘要】以聚合酶链反应（PCR）分析仪测量结果为研究对象，论述了聚合酶链反应（PCR）分析仪测量结果不确定度的评定方法与过程。

【关键词】聚合酶链反应；测量结果；不确定度

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.06.007

Evaluation of Uncertainty in Measurement Results of Polymerase Chain Reaction （PCR） Analyzer

ZENG Bingmei

（Hainan Kerui Measurement Technology Service Co.， Ltd.， Haikou 570206， China）

Abstract： Taking the measurement results of polymerase Chain reaction （PCR） analyzer as the research object， this paper discusses the evaluation method and process of uncertainty of measurement results of polymerase Chain reaction （PCR） analyzer.

Key words： polymerase chain reaction； measurement results； uncertainty

聚合酶链式反应又称为PCR，是分子生物学技术之一。PCR已成为分子生物学研究必不可少的一部分。PCR技术不仅可用于基础研究，还适用于日常的临床诊断、法医学调查和农业生物技术研究。

PCR仪是一种能够为PCR反应自动完成温度循环和孵育的仪器，能够在短时间内将单个DNA分子扩增数百万倍。其扩增过程包括3个连续步骤：1）变性，对双链DNA模板进行加热，使其解离；2）退火，被称为引物的短DNA分子与目标DNA的侧翼区域结合；3）延伸，DNA聚合酶沿着模板链将引物3’端进行延伸。将这些步骤重复（循环）25～35次，即可按指数方式获得精确的目标DNA拷贝。

1.1校准依据

JJF 1527—2015《聚合酶链反应分析仪校准规范》。

1.2标准器

PCR仪温度验证系统，EGFR基因突变标准物质。

1.3被测对象

荧光定量PCR仪。

1.4测量方法

1.4.1温度示值误差、温度均匀性校准

将PCR仪（96孔）及温度校准装置各部件连接完好，在温度传感器表面上涂抹适量的导热油，将温度传感器置于PCR仪（96孔）的加热模块设定孔中。设定温度控制程序见表1。启动温度校准装置，记录整个数据采集过程并保存。

1.4.2升降温速率校准

设定PCR仪的温度控制程序，见表2。启动温度校准装置，记录整个数据采集过程并保存。

1.4.3定量PCR仪样本示值误差、样本线性的校准

采购相应的PCR反应体系96孔校准板，离心后将校准板置于PCR仪（96孔）的加热模块设定孔中，设定温度控制程序，见表3。设定PCR仪的数据分析参数，计算其线性回归系数r。

2.1温度示值误差校准结果的不确定度评定

2.1.1测量模型

2.1.6扩展不确定度

取k=2，PCR仪温度示值误差的扩展不确定度U = kuci，结果见表6。

【參考文献】

[1]聚合酶链反应分析仪校准规范：JJF 1527—2015[S].

[2]测量不确定度评定与表示：JJF 1059.1—2012[S].

[3]张立国，张琚.实时定量PCR技术的介绍[J].生物技术，2003（2）：39-40.

[4]黄留玉.PCR最新技术原理、方法及应用[M].北京：化学工业出版社，2005：131-139.

[5]蒋春燕，王泰健，王琴，等.实时荧光定量PCR技术[J].动物医学进展，2005（12）：97-101.

[6]贾月梅.转基因植物检测技术的发展[J].世界农业，2007（6）：54-56.

【作者简介】

曾冰梅，女，1989年出生，工程师，研究方向为温度、压力计量。

（编辑：李加鹏）