甲状腺肿瘤患者生化免疫检验中应用化学发光免疫检验法技术的诊断价值

吴茂春 刘 敏

（赣州市会昌县人民医院，江西 会昌 342600）

甲状腺肿瘤发病率在世界范围内居第9位，在中国肿瘤人群中发病率居第7位[1]。来自中国的肿瘤数据显示，2015年全国范围内新发恶性肿瘤392.9万例，其中TC为20.1万例，年龄标准化发病率为10.44/10万，呈明显上升趋势[2]。在中国女性人群中，甲状腺肿瘤的发病率在15～19岁时快速上升，并在45～54岁年龄阶段达到高峰[3]。近年来，甲状腺肿瘤在世界范围内的发病率快速增长，其中恶性肿瘤中甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）占比最大和增长最快，女性甲状腺肿瘤发病率明显高于男性，且发病年龄存在年轻化趋势[4]。2018年，国家统计数据显示全年新发甲状腺癌（thyroid carcinoma，TC）为567 233例，约占新发癌症的3.1%[5]。甲状腺是人体内分泌器官之一，受多种因素影响，甲状腺功能出现异常的概率较高，可引起甲状腺炎、甲状腺功能亢进、甲状腺功能减退等[6]。当前临床上可通过血清学检测分析甲状腺功能相关标志物水平，据此判断检测者甲状腺功能状态[7]。化学发光免疫检验法技术近年来得到发展，在诸多疾病诊断中发挥着重要的作用。本研究旨在探究该技术应用于甲状腺功能生化检验中效果，拓展甲状腺功能检测方法。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2021年11月至2022年12月于我院就诊的甲状腺肿瘤患者94例为研究对象，所有患者均采用放射性免疫检验法技术检验、化学发光免疫检验法技术检验。患者分布情况，男患者11例，女患者83例，年龄23～61岁，平均年龄（38.69±2.78）岁。患病时间最长5年，最短6个月，平均患病时间（2.56±1.42）年。本研究经本院伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准 纳入标准：①所有患者自愿入组，对本研究知情同意。②年龄均在61岁以下。③临床资料均完整。排除标准：①语言表达不清，且患有精神类疾病的患者。②对本次研究依从性不高的患者。③同时参与其余研究的患者。④妊娠期、哺乳期女性。⑤患有心脑肾等重大器官性疾病的患者。⑥患有恶性肿瘤性疾病的患者。

1.3 方法 ①采血：所有患者取晨起空腹静脉血3 mL，采血后将血液标本放置在室温（18～25 ℃）下，后进行离心处理（离心半径7.95 cm，3 000 r/min，10 min），分离血清备检。②放射性免疫检验法技术检验：选用GC-1200型智能放免γ测量仪，利用伯乐提供的质控品在检测前进行质控，按照说明书进行血清标本测定。③化学发光免疫检验法技术检验：仪器选择免疫分析仪及配套化学发光试剂盒（深圳新产业生物医学工程股份有限公司，型号MAGLUMI-4000型），严格按照使用说明书完成检验，检验时间不低于4 h。

1.4 观察指标 观察放射性免疫检验法技术检验、化学发光免疫检验法技术检验甲状腺功能检查结果的差异，测定抗甲状腺过氧化物酶抗体（anti thyroid peroxidase antibody，TPOAB）、抗甲状腺球蛋白抗体（anti-thyroglobulin antibodies，TGAB）、甲状腺激素（thyroid hormone，TSH）、游离三碘甲状腺原氨酸（free triiodothyronine，FT3）、游离四碘甲状腺原氨酸（free tetraiodothyronine，FT4）水平，统计两种方式甲状腺功能异常检出率。以病理诊断结果为金标准分析两种检测方法的诊断效能。化学发光免疫检验法检测时甲状腺球蛋白正常范围为11.45～20.25 ng/mL；放射性免疫检验法检测时甲状腺球蛋白正常范围为0.73～84 ng/mL。诊断准确度=真阳性与真阴性例数之和/总例数×100%；敏感度=真阳性例数/真阳性与假阴性例数之和×100%；特异度=真阴性例数/真阴性与假阳性例数之和×100%。

1.5 统计学方法 选择SPSS 24.0软件为统计工具。符合正态分布的TPOAB、FT4、TSH等计量资料以表示、组间对比行t检验。甲状腺功能异常检出率、诊断准确度、灵敏度及特异度等计数资料以n（%）表示、组间对比行χ2检验；P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种测定方式甲状腺功能检查结果比较 放射性免疫检验法、化学发光免疫检验法两种方式比较TPOAB、TGAB水平，组间数据差异无统计学意义（P＞0.05）；化学发光免疫检验法TSH、FT3、FT4水平高于放射性免疫检验法，组间差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两种测定方式甲状腺功能检查结果比较（）

表1 两种测定方式甲状腺功能检查结果比较（）

2.2 两种方法异常检出率对比 化学发光免疫检验法甲状腺功能异常检出率98.94%（93/94），放射性免疫检验法甲状腺功能异常检出率91.49%（86/94），两种方式比较，化学发光免疫检验法更高，差异有统计学意义（χ2=5.718，P=0.017）。

2.3 两种诊断方式诊断效能 与金标准对比，放射性免疫检验法检验精准度为75.53%，检验灵敏度为70.83%，检验特异度为78.57%；化学发光免疫检验精准度为94.68%，检验灵敏度为91.67%，检验特异度为97.62%。化学发光免疫检验法对于甲状腺肿瘤的诊断准确度、灵敏度及特异度均较放射性免疫检验法高（P＜0.05）。

3 讨论

甲状腺疾病是内分泌科临床常见病，临床发病率较高，女性多于男性，在发病初期的临床表现不明显，极易被忽视，一旦确诊，病情较重，严重影响患者正常生活与身体健康。因此，及早诊断与治疗对甲状腺疾病患者而言显得尤为重要。甲状腺作为分泌器官，在维持正常内分泌代谢功能、妊娠等方面发挥着积极的作用，当甲状腺功能出现异常时，会增加对个体的损害，还可能引起其他器官病变。甲状腺癌常见的症状是颈部有肿块，且肿块在颈部的生长速度比较快[8]。颈部包块会随着吞咽动作上下移动，颈部淋巴结也会肿大。部分患者会出现呼吸和吞咽比较困难或者持续喘息、声音沙哑等症状，或出现频繁咳嗽。也有部分患者没有明显症状，只有在常规检查时会检查出肿块或结节。在发病中期出现的症状是进食有哽噎感、吞咽不适、胸口憋闷不适，主要是肿瘤压迫所致。此外，还会发生肿瘤侵犯的改变，如声音沙哑，音调也发生改变。某些特殊的患者会出现手脚麻木和抽搐的症状。部分患者会出现甲状腺癌症综合征，症状表现在腹泻、消瘦、心悸、面部潮红等。在发病晚期的症状是颈部包块较硬，声嘶呛咳，甚至呼吸窘迫、出血等威胁生命的症状，且癌细胞会转移到身体其他器官，出现相应症状。甲状腺癌症是在生活常见的一种恶性肿瘤，但是恶性程度不高，治愈率比较高，患者的生存期相对其他恶性肿瘤较长。甲状腺癌在发病早期进行确诊，且早治疗是可以治愈的。甲状腺癌表现的形状是很不规律的，边界很模糊，结节的内部回声没有规律，不均匀，出现粗大或微型钙化的情况。甲状腺肿瘤发病原因[9]：①放射线照射颈部会引起甲状腺癌的发生，特别是儿童、婴儿对放射线尤为敏感。②碘的过量食用或缺乏，造成甲状腺功能紊乱，分泌过多的甲状腺素，从而引发甲状腺癌变。③甲状腺囊肿、腺瘤、良性肿瘤手术后，在做病理检查时发现了一种隐性肿瘤，可能与甲状腺癌有关，有待医学进一步证实。④受遗传基因的影响，患有甲状腺癌家族的发病率明显高于普通家族。该疾病为显性的染色体遗传疾病。⑤甲状腺癌的发生很有可能与致癌基因的激活、抑癌基因的失活、突变有关系，一般会引发甲状腺癌。

早期甲状腺肿瘤一般不会有明显的征兆，诊断较为困难。随着近年来大规模健康体检工作的开展，甲状腺结节可通过颈部超声检测。目前，CT、MRI、超声等诊断方法均能达到较好的诊断效果，而MRI、CT的诊断准确率较高，但由于成本较高且难以重复使用，因此不能被患者所接受[10]。近年的临床研究发现，生化免疫检验应用在甲状腺肿瘤诊断中有着较大优势，化学发光免疫检验法技术为其中一种有效方法，该方法可以借助化学发光剂，给予抗原和抗体标记，并通过磁场分离法开展准确分析与沉淀，从而明确诊断结果[11]。该方法可以有效弥补放射免疫测量方法的不足，在肿瘤标志物以及病毒等监测方面有着较高准确度。通过分析血清中TPOAB、TGAB、TSH、FT3、FT4等水平，可帮助临床医师判断患者的甲状腺功能。以往测定甲状腺功能采用放射性免疫技术，此种方法通过放射性核素标记抗体或抗原结合被测抗原或抗体形成抗原体复合物，测定抗原抗体复合物浓度，了解甲状腺功能受损情况。化学发光是以发光物质代替放射性核素，在反应体系中发光物质在碱性介质中氧化时释放大量自由能，产生激发态的中间体，该激发态的中间体由最低振动能级回到稳定的基态，各个振动能级时产生辐射，同时产生能量，多余的能量即为发射光子，从而产生发光现象。利用发光信号的测量仪器，分析接收光量子的产量，通过计算机系统转换成被测甲状腺物质的浓度单位。化学发光免疫检验法技术较之放射性免疫检验法技术检验灵敏度高、线性范围宽，无放射性污染，且能提高甲状腺功能异常的检出率。在自然环境下，化学发光原理进行检验，可灵敏检验出患者的病因。本研究发现，化学发光免疫方法的失误率不高，远低于放射免疫方法，灵敏度较高，不仅能够较好地对甲状腺肿瘤疾病进行检测，还可以使用到其余生化科学医疗技术中，对提升医疗水平具有重要作用，对免疫学的发展前景，更是有着不可估量的意义。总之，化学发光免疫检验法方法，在生化检验中的使用，可明显提升疾病诊断精确率，临床使用比较广泛，对更好满足临床疾病诊断，意义重大。

本研究结果表明，放射性免疫检验法技术检验、化学发光免疫检验法技术检验TPOAB、TGAB水平差异无统计学意义（P＞0.05）；化学发光免疫检验法TSH、FT3、FT4水平较放射性免疫检验法高（P＜0.05）；化学发光免疫检验法更高，98.94%（93/94）vs.91.49%（86/94），差异有统计学意义（P＜0.05）。与金标准对比，化学发光免疫检验法对于甲状腺肿瘤的诊断准确度、灵敏度及特异度均较放射性免疫检验法高（94.68%、91.67%、97.62%vs.75.53%、70.83%、78.57%），P＜0.05。本次研究中使用化学免疫分析法进行检测，化学免疫分析方法与其余方法相比，比较简单、实用。化学发光免疫检验法是根据抗原与抗体特异度结合的原理，使用特殊标记技术对组织或细胞中的特异度抗原或抗体进行定性检测的一种检测技术。化学发光免疫检验法具有特异度强、灵敏度高、操作步骤简单的特点，在病理诊断工作中应用广泛。采用该项检查技术不仅提高了病理诊断的准确性，而且在分析肿瘤起源、确定肿瘤性质、指导后续治疗等方面都发挥了重要作用。

化学发光免疫检验法具有以下价值[12]：①发现有利于确定病原体与肿瘤的关系。化学发光免疫检验法可以应用于研究病原体引起癌症的机制，该检测方法在发现癌症发生原因工作中有着重要意义。如在对乙肝病毒进行化学发光免疫检验法时，通过使用HBsAg单克隆抗体与多克隆抗体，还有已经被生物素标记过的HBVDNA探针，可检出标志物。②有利于确定肿瘤的发生起源。免疫组化检查技术在研究肿瘤来源的过程中也起到了关键作用，通过开展化学发光免疫检验法，可以分析在各种肿瘤细胞中表达的特异度抗体，有助于人们更加明确地发现肿瘤的真正起源，如淋巴结组织内存在大量恶性肿瘤细胞，利用免疫组化就能够有助于人们判断肿瘤细胞起源。③有利于鉴别诊断肿瘤的发展位置。免疫组织化学检验还普遍应用于对肿瘤中的抗原进行检查，如通过检查甲胎蛋白来判别人体肝脏、卵巢、睾丸等部位是否出现肿瘤细胞。若消化道、卵巢、子宫、乳房和膀胱等部位出现恶性肿瘤，那么这些部位会广泛分布有癌胚抗原，虽然该抗原不具备特异度，但是在一定的条件下依旧可以清晰识别出来，其表达情况可直接反映出肿瘤的恶化程度。除此之外，在前列腺肿瘤诊断过程中，已知前列腺酸性磷酸酶与前列腺肿瘤的分化程度呈现正相关，因此通过对其进行检测对于研究前列腺肿瘤的发展情况具有重要意义。④有利于区分分化差的肿瘤。在对肿瘤疾病进行治疗的过程中，其细胞分化程度往往不同，单靠光镜无法具体判断之间的差别，因此正确分别出肿瘤和肉瘤是临床医师亟待解决的问题。通过利用免疫组化的标记细胞角蛋白、波形蛋白、S-100蛋白、白细胞共同抗原（CD45RB）等就可以进行区分。对上皮组织细胞进行检查后，若表现为细胞角蛋白阳性，则可以确定为恶性肿瘤，若检测结果为波形蛋白阳性，则可以确定其为间叶组织肿瘤。若表现为S-100阳性，可判定其为神经组织肿瘤和黑色素瘤，检验结果表现为白细胞共同抗原（CD45RB）阳性，则可判定为淋巴瘤，而检测结果为白细胞共同抗原（CD45RB）阴性，可以判断为是其他类型的恶性肿瘤。通过进行化学发光免疫检验法，不仅可以协助医师发现病变位置，还能够进一步的确定肿瘤性质，有助于正确的诊断并为后续的治疗进行指导。⑤有利于确定肿瘤性质。在对淋巴造血系统的疾病进行诊断时，免疫组化染色检查几乎已成为常规开展的检查项目，不仅有助于鉴别反应性增生性疾病与淋巴瘤，也是各类淋巴瘤分型的重要依据。⑥有利于测定肿瘤的增殖活性。恶性肿瘤的生物学行为在很大程度上与恶性肿瘤细胞的生长活动密切相关，而化学发光免疫检验法则可以通过直接测定细胞核内的与细胞增殖行为有关的蛋白酶，从而间接地探讨了恶性肿瘤细胞的生长增殖活动，对临床估计肿瘤的恶性程度以及制订治疗方案等方面提供了重要的参考信息。增殖细胞核抗原是一种36kD的核孔基因，同时也是DNA聚合酶δ的一个重要辅助因子，由于DNA的结构与细胞发展的状况有关，所以增殖细胞核抗原可以成为判断肿瘤细胞生物学行为以及治疗预后的关键。Ki-67是另一个与蛋白质增殖活动有关的核蛋白，由于Ki-67蛋白能够与DNA融合，在调控蛋白质的增殖活动中具有主要功能，其水平随细胞周期的变化而产生变化，所以Ki-67单克隆抗体被广泛应用于测定肿瘤蛋白质水平和确定其增殖活动。⑦用于指导肿瘤的治疗以及判断预后。联合化疗是治疗恶性肿瘤的最重要的方式之一，而在化疗过程中的耐药现象是医师面临的最大问题。胸苷酸合成酶（thymidylate synthetase，TS）是5-FU产生耐药的一个重要酶，癌组织中TS的表达水平可以用于指导治疗并与患者的预后相关，临床可通过TS的表达情况来判断结肠癌患者的预后效果，预后效果较好的患者，TS指标较低。TS高表达患者对5-FU的敏感性明显高于低表达者，TS低意味着患者更容易对5-FU出现耐药性，因此术后5-FU辅助化疗对于TS指标较高的患者效果更加好，因此TS蛋白的表达情况对临床结肠癌患者的后续治疗方案的制订具有指导意义，对患者的预后也有一定指导作用。

综上所述，化学发光免疫检验法甲状腺功能在生化检验中的应用效果较为理想，可以测定患者TPOAB、TGAB、TSH、FT3、FT4等情况，甲状腺异常检出率较之放射性免疫检验法技术检验更高广。