下肢缺血再灌注损伤患者检测8-异前列腺素F2α和血栓烷B2的临床意义

梁祥森，杨胜壮，黄高昇

（广西医科大学第二附属医院胸心血管外科，广西 南宁 530000）

缺血再灌注损伤（IRI）是指正常组织器官的细胞发生缺血后，血流再次恢复，从而引起细胞功能代谢障碍、结构破坏持续加重等损伤[1]。下肢IRI 可引起患肢坏死，毒素经吸收可影响全身多器官功能，严重时可引起多器官功能衰竭，危及生命[2]。近年来有研究指出，8- 异前列腺素F2ɑ（8-iso-PGF2ɑ）与机体过氧化损伤关系密切，能够反映氧化应激后的脂质过氧化，是最理想的评价氧化应激程度的生化指标[3]。血栓烷是血小板微粒体合成并释放的生物活性物质，具有促进血管收缩和血小板聚集的作用。其代谢产物血栓烷B2（TXB2）可间接反映组织器官的血供情况[4]。本文对广西医科大学第二附属医院心血管外科收治的40 例经介入治疗重新开通动脉恢复血供后出现IRI 的下肢动脉硬化闭塞患者进行研究，旨在探讨下肢IRI 患者检测8-iso-PGF2ɑ 和TXB2的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取广西医科大学第二附属医院心血管外科收治的40 例经介入治疗重新开通动脉恢复血供后出现IRI的下肢动脉硬化闭塞患者为研究对象。纳入标准：（1）临床确诊为IRI[5]；（2）年龄55 ～75 岁；（3）接受手术治疗（介入手术）。排除标准：（1）存在静脉栓塞性疾病；（2）存在血液系统疾病；（3）存在抗凝药物使用禁忌者；（4）存在高危致死性疾病，如心肺肝肾功能衰竭等[6]。本研究获得医院医学伦理委员会批准，研究对象已签署知情同意书。

1.2 试剂与器材

ELISA 试剂盒、抗原、抗体、酶标记抗体、阳性对照血清由美国Cayman Chemical 公司提供。聚苯乙烯塑料板( 酶标板) 为96 孔，ELISA 检测仪由美国Cayman Chemical 公司生产。

1.3 方法

1.3.1 血液标本收集

分别于术前、术后1 天、术后3 天抽取患者的静脉血5 mL。血液标本立即放入无菌的乙二胺四乙酸试管中，并在4℃下以3500 r/min 的速度离心15 min,收集血清储存于-80℃的冰箱中。

1.3.2 检测方法

1.3.2.1 酶联免疫吸附法(ELISA) 检测8-iso-PGF2ɑ严格按照试剂盒提供的检测方法及步骤进行检测，其中标准品的配置按标准品: 稀释液=1:1 进行稀释，依次进行5 次；标准品和样品均做3 孔，每孔加量为50 μL；所有反应孔均加入链霉亲和素-HRP 50 μL；用蒸馏水30 倍稀释原液配制洗涤液进行洗涤；洗涤后先后加入显色剂A、显色剂B 各50 μL进行显色；终止效果确认：蓝色转为黄色。以450 nm波长依次测量各孔的吸光度，数据分类保存，最后收集整理数据，统计分析结果。

1.3.2.2 TXB2测定 采用放射免疫分析法(RAI)进行测定（按试剂盒标准流程进行测定）。

1.4 统计学方法

用统计软件 SPSS 22.0 对试验数据进行统计分析，计量资料以均数± 标准差（±s）表示，两两比较采用两独立样本均数t检验或配对t检验；计数资料采用卡方检验；结果相关性分析采用 Pearson 相关性分析和多元逐步回归分析，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同时间血清8-iso-PGF2ɑ 样本、TXB2 样本相关性的分析

术前- 术后1 天和术前- 术后3 天的8-iso-PGF2ɑ 相关性分别为0.024、-0.048，相关性均不强；术前- 术后1 天和术前- 术后3 天的TXB2相关性分别为0.031、-0.050，相关性均不强。术后1 天- 术后3 天的8-iso-PGF2ɑ 相关性为0.634，相关性较强；术后1 天- 术后3 天的TXB2相关性为0.715，相关性较强。详见表1、2。

表1 不同时间血清8-iso-PGF2ɑ 样本相关性的分析

表2 不同时间血清TXB2 样本相关性的分析

2.2 不同时间血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2 水平相关性的分析

术前- 术后1 天、术前- 术后3 天、术后1 天-术后3 天血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平均呈正相关，P＜0.05，详见表3。

表3 不同时间血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2 水平相关性的分析

2.3 不同时间血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2 平均水平的比较

与术前相比， 术后1 天和术后3 天的血清8-iso-PGF2ɑ、TXB2水平均较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。与术后1 天相比，术后3 天的血清8-iso-PGF2ɑ、TXB2水平均较低，差异有统计学意义（P＜0.05）。详见表4、5、6。

表4 不同时间血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2 平均水平的比较（ng/L，± s）

表4 不同时间血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2 平均水平的比较（ng/L，± s）

项目（n=40） 术前 术后1 天 术后3 天8-iso-PGF2ɑ TXB2 49.17±5.73 19.81±18.34 31.31±2.92 11.25±1.22 57.73±4.81 24.25±2.40

表5 血清中8-iso-PGF2ɑ 两样本比较t 检验

表6 血清中TXB2 两样本比较t 检验

3 讨论

下肢IRI 分为缺血期、再灌注期两个周期，随着患者机体缺血导致组织缺血时间过长，受损组织内三磷酸腺苷被消耗殆尽，并产生大量氧自由基及脂质过氧化产物，机体所产生的大量氧自由基不能被静脉回流作用清除，微血管内皮细胞被破坏，不但可引起局部肢体骨骼肌缺血、肿胀和坏死，而且还可影响机体各大系统，严重者甚至会发生多器官功能衰竭，危及生命[7]。通过介入治疗让患者进入再灌注期，产生的细胞激肽会促使血管内皮产生氧自由基，氧自由基则会通过脂质过氧化酶的序贯反应损伤细胞膜，致钠泵功能不全，加重肢体肿胀和缺血，氧自由基介导的细胞膜脂质分子过氧化是IRI 的重要原因之一。研究[8]证实，在心肌缺血再灌注过程中, 氧化应激可通过相关途径生成大量血栓烷。血栓烷是血小板微粒体合成并释放的生物活性物质, 具有促进血管收缩和血小板聚集的作用。其代谢产物TXB2可间接反映组织器官的血供情况。血管内皮损伤可导致前列环素合成酶生成减少,活性下降,此时TXB2增多可造成血小板聚集、血管收缩和血栓形成，从而导致组织器官缺血缺氧，造成损伤。8-iso-PGF2α 是细胞生物膜上花生四烯酸经体内自由基超氧化作用、非酶途径经β 裂解重组产生的前列腺素的衍生物，其从生成到代谢的整个过程不易受到药物或其他因素的影响[9]。有研究指出，8-iso-PGF2α 作为脂质过氧化产物异前列腺素F2α的一种亚型，其水平反映了肢体IRI 脂质过氧化反应的严重程度，能准确地反映机体脂质过氧化的状态，可以作为判断下肢IRI 的指标，并可用于推测损伤程度。肢体出现血液再灌注后，导致氧自由基被大量释放进入血液，可能会引起8-iso-PGF2α 水平的改变。有研究[10]指出8-iso-PGF2α 的水平与血液高凝状态有关。大量的研究证实，血清8-iso-PGF2α 水平可作为IRI 发生、发展及相关靶器官损伤的评价指标，检测8-iso-PGF2α 水平对IRI 的预防、诊断、治疗、预后及病情评估有重要意义[10]。有研究指出，8-iso-PGF2α 是最理想的评价氧化应激程度的生化指标之一。自由基介导的细胞膜脂质大分子过氧化是IRI 的重要原因之一。大量的研究[8-12]证实，血清中8-iso-PGF2α 的水平可作为IRI 相关靶器官损伤程度的评价指标。因此，联合检测血清中IRI8-iso-PGF2ɑ 和TXB2的水平对IRI 的诊治和预防具有重要的临床意义。麻京豫等[8]对急性冠脉综合征相关IRI 患者进行了8-iso-PGF2ɑ 和TXB2检测，结果显示与正常对照组相比，患者组8-iso-PGF2ɑ 和TXB2的水平均较高，且其8-iso-PGF2ɑ 和TXB2的水平与病情严重程度呈正相关，这与本研究的结论一致。本研究的结果显示，与术前相比，术后1 天和术后3 天的血清8-iso-PGF2ɑ、TXB2水平均较高，差异有统计学意义（P＜0.05）。与术后1 天相比，术后3 天的血清8-iso-PGF2ɑ、TXB2水平均较低，差异有统计学意义（P＜0.05）。术后出现IRI 时（术后1 天）患者的血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平明显升高，随后（术后3 天）患者的血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平又有所下降，提示血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平可能与IRI 的严重程度有关。

综上所述，血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平呈正相关，二者均为评估IRI 的潜在生物学指标。从IRI 患者术后血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平的变化情况来看，其血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平可能与IRI 的严重程度有关。需要注意的是，本研究的样本数量不够大、样本代表性欠佳，且未设置正常对照组，故血清8-iso-PGF2ɑ 和TXB2水平与下肢IRI 的具体关系还有待进一步研究。