POCT在呼吸道感染病原体检测中的应用研究

张小伟

（佛山复星禅诚医院呼吸与危重症医学科，广东 佛山 528000）

呼吸道感染性疾病主要是由于致病微生物进入呼吸道，在大量繁殖后引起了相应的症状。造成呼吸系统感染的微生物种类包括病菌、病毒、支原体、真菌、寄生虫等，其中绝大部分呼吸道感染都是由病毒引起的。成人病毒性呼吸道感染的住院率约为0.02%，老年患者可达到1.2%[1]。病毒性呼吸道感染发病率高，具有较强的传染性，尤其是免疫力较低的小儿、老年人最容易发生感染。春冬两季是病毒性呼吸道感染的高发季节，发病人群骤增，会导致医院住院治疗的人数增多[2]，使呼吸科工作量增加，病人负荷重，甚至还会造成一些免疫力低下的老年人或儿童死亡。呼吸道感染性疾病严重威胁老年人及儿童的健康，并给诸多家庭带来了一定的经济压力和心理负担。因此，能够在发病早期快速、精准地检测出引起呼吸道感染性疾病的病原体种类，对疾病的临床治疗和转归具有重要的意义。传统的细菌培养等检测方法虽然准确性高，但操作复杂，耗时较长，不利于大规模样本的检测、筛查，也会耽误患者的最佳治疗时机，尤其是在一些突发性公共卫生事件中，传统的检测方法不适用于这种应急领域。近年来，即时检验（point-of care testing，POCT）逐渐在临床上得到了推广应用。该技术能够在病人床边进行检测，具有操作简单、快速准确、样本微量化等优点，能够简化检测流程，缩短检测时间，及时准确地判断感染的病原体种类。本文就POCT 的发展、医学价值、技术特点、局限性以及在常见呼吸道感染性疾病诊断中的应用价值进行综述，现介绍如下。

1 POCT 的概述

1.1 POCT 的定义及现状

POCT 是指能够在采样地点即时即刻进行检测，避免样本在实验室检验中进行复杂的标本处理过程，从而能够迅速获得检验结果的一种方法[3]。该方法以仪器小型轻便、操作简单、程序简洁、耗时短、精确度和灵敏度高为特点，能够为患者争取治疗时间。在临床检验技术迅速发展的今天，我国临床常用的POCT 技术被广泛应用于内科疾病、心脑血管疾病、感染性疾病及其他一些疾病的快速检测中。同时，POCT 技术在急诊救护、重症监护室、社区医院也发挥了至关重要的作用。

1.2 POCT 的特点和价值

POCT 的鲜明特点是实验室设备微型化、操作步骤简单化及报告结果即时化，可以就近、迅速地得到检测结果，使医护人员能够根据检测结果尽早采取有效的治疗及处置措施。随着时代的不断发展，POCT技术也在不断的更新。该技术具有的检测速度快、便于携带、应用简易等特性，对医生、护士及实验室检验人员都具有强大的吸引力。另外，在临床应用中，POCT 技术不需要在实验室进行复杂的标本处理，能够节省很多时间，实现即采即检，且操作简便。近年来随着POCT 技术的发展，其应用范围也从医院、病房、门诊、急诊、事故现场等逐渐扩展到家庭、救护车、社区药店、社区服务中心、海关等。该技术能够满足医生和患者在时间上的需求，实际操作中省去了许多复杂的步骤，可由临床医生、护士甚至患者或其家属独立完成。与临床传统的实验室检验相比，POCT 在诊断时间上更具优势。研究指出，POCT 的使用会缩短临床医学诊断的时间，对改善患者的预后具有重要且实际的意义[4]。随着POCT 技术的逐步完善、检测品质的不断提高以及机器设备的不断优化，POCT 在感染性疾病尤其是呼吸道感染性疾病的临床诊断和治疗中将会起到越来越重要的作用。

1.3 POCT 的局限性

由于POCT 的实际操作过程比较简单，因此操作人员大多是未经过正规培训的医生、护士甚至是患者本人或其家属等非专业人员，在实际操作过程中基本上不会实施质控，这就导致检测结果会出现一定的误差。同时，检验标本采集、试剂采购和保存等都比较随意，仪器间无比对试验，平时既无室内质控，又无室间质评，检验质量完全处于无人管理的状态，这些因素都使得POCT 的准确度、灵敏度、精密度不如传统检测方法[3]。

2 POCT 在常见呼吸道感染性疾病诊断中的应用价值

2.1 新型冠状病毒肺炎（新冠肺炎）

2019 年肆虐全球的新冠肺炎对人们的生活造成了很大的影响，在最初流行时新冠肺炎的致死率较高。本病是一种由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）感染引起的急性呼吸道传染病，其潜伏期为1 ～14 d。后来尽管新冠肺炎患者多为轻型病例，但本病具有高度传染性，发病人数众多。国家卫生健康委员会公布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》中提到，新冠肺炎确诊病例必须有病原学检测阳性的依据，即逆转录-聚合酶链式反应（PCR）检测SARS-CoV-2 核酸呈阳性，或经高通量测序与已知的SARS-CoV-2 高度同宗[5]。快速检出SARS-CoV-2 对新冠肺炎疫情的防控及患者的早诊断、早治疗、早隔离具有重要意义。SARS-CoV-2 的POCT 技术包括核酸检测、抗原检测和抗体检测，其中核酸检测结果是主要诊断依据，抗原、抗体检测结果是核酸检测结果重要的辅助诊断依据。核酸检测对及早发现无症状感染者以及疾病的治疗具有重要意义，也有助于疫情的早期防控。抗原、抗体检测主要是检测呼吸道分泌物中病毒感染所产生的SARS-CoV-2 蛋白质，可在30 min 内获得检测结果。人体感染SARS-CoV-2 后最早产生的抗体是免疫球蛋白M（IgM）抗体，随着病程的延长，IgM 抗体的滴度逐渐消失，免疫球蛋白G（IgG）抗体逐渐产生。因此，IgM、IgG 抗原检测可以作为新冠肺炎的辅助诊断方法[6]。

2.2 流感

流感是由流感病毒感染引起的呼吸道传染性疾病，具有传播速度快、覆盖面广、传染性强、呈周期性流行等特点，可引起全球性感染。病毒培养、免疫荧光法、PCR 核酸检测、血清学检测等是流感病毒常规的检测方法。但这些方法多因检测时间长、检测所用仪器设备特殊等很难被临床上广泛使用。属于POCT 技术的胶体金免疫层析法（GICA）是通过利用抗原和抗体的特异性反应，以胶体金为标记物进行检测的一种方法，其检测结果在较短时间内便可获得。GICA 操作简便、价格低廉，适用于大样本的筛查，也可作为早期诊断病毒感染的有效手段。临床检测流感病毒及区别不同流感病毒亚型的最佳方法是PCR法。目前，临床已有依据逆转录PCR 方式的POCT 检测试剂盒，可以实现智能化、多重PCR 检测，能够同时检测流感病毒和呼吸道合胞病毒，并且检测结果可在1 h 内获得，有较高的敏感性和特异性，为临床决策提供了科学的依据[7]。

2.3 支原体肺炎（mycoplasmapneumonia，MP）

MP 是感染肺炎支原体所导致的一种间质性肺炎，多见于儿童，尤其是婴幼儿。研究表明，近年来MP 的发病率逐年上升[8]。肺炎支原体是最常见的造成儿童肺炎的病原体之一。采用GICA 检测末梢血MPIgM 抗体是如今较为常见的POCT 技术，适用于医院呼吸科或急诊科迅速筛查疑似MP 患儿。该方法在小儿MP-IgM 抗体检测中的敏感性较高，且具有操作简便、快速、用血量少、试剂保存方便等优点，可一步完成检测，有利于临床儿科对MP 的诊断，是早期快速诊断小儿MP 的有效方法。但抗原含量低时采用GICA 进行检测很容易发生漏诊，阴性结果并不能排除MP，并且IgM 抗体可以在一部分痊愈患者体内持续存在，对短时间再度感染的MP 的评估会有一定的困难[9]。

2.4 结核病

肺结核是由结核分枝杆菌感染引起的一种人兽共患的慢性传染性疾病，可经呼吸道飞沫传播[10]。结核病的诊断金标准是对疑似患者的痰液或肺泡灌洗液标本进行涂片镜检和细菌培养，但细菌培养所需的时间较长，且涂片需要手工制作，影响因素较多。进行细菌培养时，即便是采用速度最快的培养技术，也最少需要2 周才能出结果，这时再制定治疗方案会耽误患者的病情，而凭借经验制定的治疗方案又容易造成结核分枝杆菌耐药[11]。因此，快速准确地获得检测结果对结核病患者治疗方案的制定及促进疾病转归具有重要的意义。目前，可用于辅助诊断结核病的POCT 技术越来越多，例如利用免疫胶体金技术能够检测血清、血浆或全血中的结核分枝杆菌抗体。该技术对大规模疑似结核病患者的初筛具有重要价值，但对于一些免疫系统异常的人群，检测的灵敏度可能会相对较低。在结核病的诊断中应用POCT 技术能够辅助临床诊断，且能较准确地发现结核分枝杆菌的耐药基因，对指导临床治疗具有重要的意义。

3 结语

与传统的病原学检测相比，POCT 在呼吸道感染性疾病的诊断中具有更快的检测速度，能大大缩短检测时间，简化检测步骤，快速得出检测结果，且成本较低，对于临床治疗方案的制定、传染性疾病的防控以及患者预后的改善均具有重要作用。在应对突发公共卫生事件时，POCT 是快速检测致病病原体的强有力工具。虽然目前POCT 技术发展比较迅速，但其在临床检验中还无法替代传统的实验室检查，只能作为临床检验技术的有力补充[12]。随着POCT 技术的逐步创新和完善，相关检测项目也会逐渐增加，只有正确地认识并且合理利用POCT 技术，才能发挥其最大作用，为临床检验及疾病诊断创造更大的价值。