豫北地区汉族癫痫患者CYP2C9*3（1075A＞C）等基因型分析

袁红昌，高渐联，，郭锦,，王鹏伟，朱超男，邓智建,3

（1.新乡医学院第一附属医院 临床药学办公室，河南 新乡 453100；2.新乡市免疫性疾病个体化用药研究重点实验室；3.河南省医学重点学科临床药学）

癫痫是一种脑神经细胞异常放电引起的短暂性神经功能失常疾病。具有突发性、反复性、持续性发作的特点。发作时可出现全身性强直-阵挛性惊厥样症状，若不及时治疗可导致神经系统功能障碍，严重威胁着患者的身心健康。目前，临床上丙戊酸钠和卡马西平是治疗癫痫的常用药物，疗效显著[1-2]。但这两种药物的治疗窗较窄，毒副反应较大[3-5]。基因多态性与药物的个体化差异性密切相关。不同基因型的患者使用丙戊酸钠可引起肝损害和衰竭，线粒体聚合酶γ（Mitochondrial DNA polymerase γ，POLG）基因与其密切相关，常见的突变基因为POLG（A467T，G＞A）和POLG（W748S，C＞G）[6]。细胞色素P450 2C9（CYP2C9）主要参与丙戊酸钠的体内代谢，常见的突变基因为CYP2C9*3（1075A＞C）[6]。使用卡马西平可出现Steven-Johnson综合征（SJS）和中毒性表皮坏死松解（Toxic epidermal necrolysis，TEN）等不良反应[6-7]。其风险位点主要是人类白细胞抗原（Human leukocyte antigen，HLA），常见的突变基因为HLA-B*1502TA（C＞G）和HLA-B*1502TB（C＞T）[6]。因此，在使用丙戊酸钠和卡马西平治疗癫痫时应做药物的基因检测，根据检测结果制定个体化用药方案。不同地区人群的基因型各异，本研究分析豫北地区（河南省北部）汉族癫痫患者CYP2C9*3（1075A＞C）等5 个基因型的分布特点，分析其临床意义。

1 方法

1.1 研究对象 研究对象为2017 年1 月1 日至2020 年11 月30 日新乡医学院第一附属医院收治的豫北地区汉族癫痫患者。采取回顾性研究的方法收集患者CYP2C9*3（1075A＞C）等基因的检测结果，一些情况如下：CYP2C9*3（1075A＞C）288例，平均年龄（13.95±18.62）岁；POLG（A467T，G＞A）和POLG（W748S，C＞G）584 例，平均年龄（8.30±10.52）岁；HLA-B*1502TA（C＞G）和HLA-B*1502TB（C＞T）106 例，平均年龄（7.76±10.96）岁。

1.2 仪器与试剂 RT-Cycler TM 436/TL988 荧光检测仪（博奥生物科技公司）；TDZ4A-WS 低速离心机（湘仪离心机仪器公司）；CJV1000-Y 洁净工作台（山东新华医疗器械有限公司）；Pharm-gene 01 SNP 样本分析保存液（北京华夏时代基因公司，生产批号：20190514）；Pharm-gene 200 SNP 样本处理试剂（北京华夏时代基因公司，生产批号20181009）；测序反应试剂盒（北京华夏时代基因公司，生产批号0220190608）。

1.3 检测方法 采集患者外周静脉血3 mL 置于EDTA 抗凝管中。取静脉血200 μL 加至含1 mL1%NH4CL 的离心管中裂解红细胞，静置5 min 后3 000 r/min 条件下离心5 min，弃去上层液。加入0.9% 生理盐水1 mL 重悬白细胞，3 000 r/min 再次离心5 min 后弃去上层液。加入PHARM-GENE 01 SNP 分析保存液30 μL 静置30 min。移取上述样本1.8 μL 加至相应的PHARM-GENE 200 SNP分析样本处理试剂中。采用荧光检测仪检测基因型，CYP2C9*3（1075A＞C）、HLA-B*1502TA（C＞G）和HLA-B*1502TB（C＞T）的检测位点温度为62℃，POLG（A467T，G＞A）和POLG（W748S，C＞G）的位点温度为64℃。Microseq 微测序程序分析。

1.4 统计学处理 采用SPSS 16.0 软件处理数据。χ2检验或Fisher's 确切概率法比较计数资料，P＜0.05为差异有统计学意义。判断基因型分布是否符合Hardy-Weinberg 平衡，P＞0.05 表示有群体代表性。

2 结果

2.1 Hardy-Weinberg 平衡定律 CYP2C9*3（1075A＞C）、POLG（A467T，G＞A）、POLG（W748S，C＞G）、HLAB*1502TA（C＞G）及HLA-B*1502TB（C＞T）基因的P 值分别为0.135、0.999、0.997、0.940 及0.323。基因型分布符合平衡定律（P＞0.05），表明研究人群有群体代表性。

2.2 基因分布 研究表明，豫北地区汉族癫痫患者CYP2C9*3（1075A＞C）、POLG（A467T，G＞A）、POLG（W748S，C＞G）、HLA-B*1502TA（C＞G）及HLAB*1502TB（C＞T）等位基因的突变率分别为6.08%、0.17%、0.34%、3.30%及17.45%。见表1。

2.3 性别之间的基因差异 CYP2C9*3（1075A＞C）等5 个基因不同性别之间的突变率无统计学差异（P＞0.05）。见图1。

图1 CYP2C9*3（1075A＞C）等不同性别之间基因多态性分布

3 讨论

研究药物代谢酶基因多态性的意义重大[8]。丙戊酸钠治疗儿童癫痫的有效剂量为20～30 mg/kg.d，成人为20 mg/kg.d。丙戊酸的血液浓度应维持在50～100 μg/mL 范围，超过142 μg/mL 易出现中毒反应。因此，应严格控制给药剂量[6]。CYP2C9 基因型影响丙戊酸的血药浓度[9-10]。CYP2C9*1/*1 型的代谢活性较强，若给予标准剂量，平均血药浓度的波动范围较大，部分患者可出现恶心、呕吐及腹泻等消化系统，以及嗜睡、平衡失调、乏力等中枢神经系统的不良反应[11]。CYP2C9*3/*3 患者的给药剂量应减少50%，以及CYP2C9*1/*3 的给药剂量应减少25%以避免严重的不良反应。POLG（A467T，G＞A）基因的未突变类型为GG 型，POLG（W748S，C＞G）的未突变类型为CC 型，未突变基因型可用丙戊酸；而POLG（A467T，G＞A）的GA 型和POLG（W748S，C＞G）的CG 型等杂合突变者有肝损害和死亡风险，建议不用丙戊酸[6]。POLG（A467T，G＞A）AA 型和POLG（W748S，C＞G）GG 型等基因纯和突变者发生肝损害和死亡风险高，禁用丙戊酸[6]。丙戊酸钠血药浓度与不良反应存在年龄段特异性[12-13]。本研究表明，有0.34% POLG（A467T，G＞A）和0.68% POLG（W748S，C＞G）患者为基因杂合突变，建议不用丙戊酸。

不同基因型的患者使用卡马西平可出现眩晕、手指震颤、共济失调、SJS 和TEN 综合征等不良反应[6,11]。SJS 综合征属于多形红斑重症型，临床表现为口腔水肿、充血及糜烂，眼结膜充血、眼睑水肿、内眦糜烂，分泌物过多等结膜炎或角膜炎样症状，皮肤出现靶样红斑等[14]。TEN 综合征是一种罕见的皮肤性疾病，与遗传密切相关，患者的皮肤非常脆弱，严重影响患者的正常生活。HLAB*1502TA（C＞G）和HLA-B*1502TB（C＞T）分别为白细胞分化抗原B1502 标签位点A 和位点B，属于毒副作用风险基因位点[6]。两个位点可分别预测50%和77%的SJS 综合征。HLA-B*1502TA（C＞G）的G 基和HLA-B*1502TB（C＞T）的T 基均为HLA-B*1502 阳性，使用卡马西平时可出现SJS 和TEN 综合征的风险非常高，应禁用卡马西平[6,15]。本研究表明，HLA-B*1502TA（C ＞G）和HLAB*1502TB（C＞T）等位基因的突变率分别为3.30%和17.45%，表明该人群使用卡马西平极易出现SJS和TEN 综合征，建议不用卡马西平。

豫北地区汉族癫痫患者CYP2C9*3（1075A＞C）等5 个基因型存在差异性，建议使用丙戊酸钠和卡马西平等药物时应检测基因，制定个体化给药方案。