多发性硬化患者治疗前后IL-17、IL-23、IL-27、TNF-α 变化及与头颅MRI 增强病灶数目的相关性探讨

胡西西，何远宏，高灵通，程晓榆

（1.义马煤业集团股份有限公司总医院神经内二科,河南 三门峡 472300；2.郑州大学第五附属医院神经内科,河南 郑州450000 ）

多发性硬化（Multiple sclerosis,MS）是一种中枢神经系统慢性自身免疫性疾病，其中炎症、脱髓鞘和轴突丧失甚至发生在该病的早期阶段。不同患者的病程差异很大，尽管近年来取得了显著的治疗进展，但MS 仍然是年轻人神经残疾的最常见原因之一[1]。MS 的发作通常发生在20～40 岁，全球MS 中位患病率为每10 万人中有33 人[2]，女性群体患病率是男性群体的2～3 倍[3]。病理评估是诊断MS 的金标准，可阐明临床疾病表现，并指导临床探索新的治疗方法。然而，该方法存在一定的局限性，包括可用的供体数量有限、样本通常代表不常见的病例以及无法进行随访，因此寻找其他快速、准确的MS 临床诊断手段或评价指标仍然是当前该病的重要研究方向。

影像技术的进步和诊断标准的不断完善使得早期诊断和治疗成为可能，其中核磁共振成像技术（MRI）对MS 的不同病理改变敏感，包括炎症、脱髓鞘和神经轴突缺失等，在早期诊断、监测疾病进展、病程动态监测和疗效评价等方面具有重要作用。Inglese 等[4]的研究发现MRI 增强扫描技术能够探究MS 发生和发展的具体病理机制，并示踪特定的脑组织损伤标志。在MS 患者中，神经炎症是由免疫细胞、神经胶质细胞和神经元之间的相互作用诱导、维持的[5]，神经炎症可以通过局灶性炎性脱髓鞘（T2 加权图像上的高信号）和血脑屏障通透性增加（钆后T1 加权图像上的局灶性对比增强）来间接测定。据统计，约25%～50%的MS 患者可通过延迟高分辨率对比后T2 FLAIR MRI 观察到软脑膜炎性浸润[6-8]。因此，本研究拟通过比较MS 治疗前后的相关炎症因子如IL-17、IL-23、IL-27、TNF-α 等的水平变化及头颅MRI 增强病灶数目变化，并分析头颅MRI 增强病灶数目与IL-17、IL-23、IL-27、TNF-α 的相关性，来探究炎性因子对MS 发病的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料 本研究拟采用回顾性分析的方法，随机选取2018 年1 月至2021 年5 月于义马煤业集团股份有限公司总医院神经内科诊断为MS 患者的病人86 例。其中，男患者32 例，女患者54例；最大年龄60 岁，最小年龄20 岁，平均年龄（38.13±7.38）岁。本研究严格遵守中华人民共和国相关临床科学研究伦理审核标准，并积极征得入选患者的知情同意。

1.2 诊断标准 多发性硬化诊断国际专家小组制定的《2010 年修订版多发性硬化诊断标准解读》[9]。

1.3 纳排标准 纳入标准：（1）符合诊断标准者；（2）患者年龄＞18 岁者；（3）临床病例资料完整者。

排除标准：（1）酒精滥用者；（2）肝功能异常者；（3）伴有自身免疫性疾病、血液功能障碍、其他类型恶性肿瘤者；（4）对本研究用药过敏者。

1.4 治疗方法 采用大剂量甲泼尼龙鞘内注射治疗。将注射用甲泼尼龙琥珀酸钠[商品名：米乐松。批准文号：国药准字H20143136。生产企业：重庆华邦制药有限公司。规格：40 mg（以甲泼尼龙计）]1支+0.9%氯化钠溶液（批准文号：国药准字H32025239。生产企业：江苏恒瑞医药股份有限公司。规格：100 mL:0.9 g）5 mL 对MS 患者进行鞘内注射，每隔2 d 对MS 患者进行1 次注射，持续注射3 d 后，给予MS 患者甲泼尼龙片[商品名：美卓乐。批准文号：H20150245。生产企业：Pfizer Italia S.r.l.（意大利）。规格：4 mg×30 s]50 mg，口服，日一次，持续治疗14 d。

1.5 观察指标

1.5.1 统计头颅MRI 增强病灶数目 86 例MS 患者均作MRI 平扫与增强扫描。使用美国GE SIGNA Pioneer 3.0T 定量图谱磁共振。首先采用SE序列行MRI 平扫检查，T1WI TR 设定为400 ms、TE 设定为20 ms，T2WI TR 设定为2 800 ms、TE设定为110 ms，然后将矩阵设定为256×256、层后距离5 mm、层间距离1 mm，增强剂使用GD-DTPA，按0.1 mL／kg 静脉注射，行MRI 作轴位、冠位、矢位增强扫描。

1.5.2 MS 患者的炎性因子检测 分别于治疗前后清晨空腹采集MS 患者静脉血10 mL，ELISA 法检测MS 患者血清IL-17、IL-23、IL-27、TNF-α 水平，每一样品平行测定不少于2 次。

1.6 统计学方法 本研究所有实验数据均采用SPSS 20.0 软件进行统计分析。计数资料以频数表和百分率表示，采用χ2检验；计量资料若满足正态分布，以（）表示，采用t 检验，各指标之间的相关性采用Pearson 相关性分析法；计量资若不满足正态分布，则采用中位数和四分位间距表示，两组之间的差异采用秩和检验分析，各指标之间的相关性采用Spearman 相关性分析。以α=0.05 为统计学检验水准，P＜0.05 视为差异显著。

2 结果

2.1 MS 患者治疗前后MRI 增强扫描病灶数目比较 MS 患者治疗前后的MRI 增强病灶数目变化不明显[（5.02±1.26）vs（5.48±1.39）]，两者之间比较无差异，不具有统计学意义（P＞0.05）。见图1。

图1 MS 患者治疗前后的MRI 增强病灶数目比较

2.2 MS 患者治疗前后相关炎性因子水平 与治疗前相比较，MS 患者治疗后的IL-17、IL-23、TNF-α水平明显降低，两者之间差异显著，具有统计学意义（P＜0.05）；治疗后IL-27 水平明显升高，与治疗前比较，差异显著，具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 MS 患者治疗前后的炎性因子比较（pg/mL，）

表1 MS 患者治疗前后的炎性因子比较（pg/mL，）

2.3 MS 患者头颅MRI 增强病灶数目与炎性因子水平变化的相关性分析 MS 患者头颅MRI 增强病灶数目与IL-17、IL-23、TNF-α 水平呈正相关性，具有统计学意义（r=0.266，P=0.013；r=0.237，P=0.028；r=0.252，P=0.019）；与IL-27 水平呈负相关性，具有统计学意义（r=-0.324，P=0.002）。见表2。

表2 MS 患者头颅MRI 增强病灶数目与炎性因子水平变化相关性

3 讨论

以炎症和脱髓鞘为特征的局灶性脑白质病变是MS 组织病理学最明显的标志。炎性浸润主要由来源于血液的吞噬细胞、T 细胞和B 细胞组成[10]，在疾病早期常见的活动性脱髓鞘病变中主要为圆形和泡沫状形态的吞噬细胞的炎性细胞群。在病变形成的最初阶段，这些吞噬细胞的细胞质中含有髓磷脂碎片，表明髓磷脂正在分解[11]。在疾病后期，具有完全或部分吞噬细胞边缘的混合活性/非活性病变和几乎完全缺乏吞噬细胞的非活性病变变得更加突出[12]。与复发缓解型MS 相比，继发性和原发性进行性MS 患者中混合活动/非活动病变的概率的升高更明显，并且与疾病严重程度相关[13]。因此能够识别MS 病变类型的MRI 技术对预测MS 预后具有较高价值。早期活动性脱髓鞘病变阶段的组织病理学在补体沉积、免疫球蛋白和少突胶质丢失量方面是不均匀的，这表明不同的病理机制均可能触发病变的形成。本研究结果显示，MRI 增强扫描可清晰显示MS 患者的病灶，这表明大多数增强的MS 病灶可以在使用3T 扫描仪获得的DIR 和FLAIR 序列上识别，这些病灶可能表示大脑存在炎性改变。

IL-23 是由受刺激的巨噬细胞和树突状细胞分泌的促炎细胞因子之一，是T 细胞依赖性炎症反应生长的增强因子，在慢性和自身免疫性疾病的发展中起着重要作用[14]，Th17 细胞通过非T 细胞的促进IL-23 的分泌，并刺激生成IL-17，IL-23 促进TH17 细胞产生IL-6、IL-17、IL-2、TNF-α 和粒细胞-单核细胞集落刺激因子[15]。在MS 患者的大脑中，T 淋巴细胞和巨噬细胞位于急性斑块的活动边缘，均能够分泌TNF-α[16]，能够在体外对髓鞘和胶质细胞产生损伤[17]。TNF-α 不仅发挥促炎和细胞毒性作用，而且对于中枢神经系统炎性病变具有抑制、修复和再生作用[18]。本研究结果显示，MS 患者治疗后IL-17、IL-23、TNF-α 水平明显低于治疗前（P＜0.05），提示MS 的发生发展与炎性反应相关；另一方面，本研究结果还证实了MS 患者头颅MRI 增强病灶数目与IL-17、IL-23、TNF-α 水平呈正相关（P＜0.05），这也证实了本研究的上述发现。

IL-27 是IL-6/IL-12 细胞因子家族的成员，由EBI3 和p28 两个亚单位组成，具有促炎和抗炎两种特性，参与多种自身免疫性疾病的发病机制[19]。p28 对IL-27 有特异性，而EBI3 结 合p35 构成IL-35 细胞因子。然而，EBI3 被认为是IL-27 细胞因子的代表，因为它通常由抗原呈递细胞产生，而IL-35 由淋巴细胞产生，特别是Foxp3+调节性T 细胞[20]和调节性B 细胞[21]。有研究者[22]在中枢神经系统星形胶质细胞中观察到EBI3 的表达，但在MS斑块中的淋巴细胞中表达为阴性，因此在MS 中星形胶质细胞产生的是IL-27，而不是IL-35。本研究结果显示，MS 患者治疗后的IL-27 水平明显高于治疗前（P＜0.05），且MS 患者头颅MRI 增强病灶数目与IL-27 水平呈负相关（P＜0.05），结合有关该细胞因子的其他相关文献，表明IL-27 在自身免疫性疾病中具有调节作用，推测IL-27 对炎症性疾病的有抑制或治疗作用。

综上，MS 患者的IL-17、IL-23、TNF-α 水平升高，IL-27 水平降低，则头颅MRI 增强病灶数目增多，作为参与到MS 发病机制中的炎性因子，IL-17、IL-23、TNF-α 具有促进炎性反应的作用，IL-27 具有抑制炎性反应的作用，因此，可根据IL-17、IL-23、IL-27、TNF-α 水平变化指导临床治疗。