童 飞,杨志凯
(1.安徽省无为市农业综合行政执法大队,安徽 无为 238300;2.安徽省无为市鹤毛镇农业服务中心,安徽 无为 238361)
采集猪机体组织或血液样本进行检测评估是做好生猪重大动物疫病监测的重要手段。组织样本采集适用于猪产品和病死猪,对于活猪更适合采用血液样本采集。猪前腔静脉采血具有采血量足、血样质量高等特点。
1.1 人的因素 采血人员没有掌握猪前腔静脉采血技术或缺乏实际操作能力,存在畏难情绪;养殖场(户)防疫意识淡泊,采血时会因猪的叫声大、流血较多等,产生抵触情绪,拒绝采样而导致采样失败和免疫效果评估不准确。
1.2 猪的因素 与其他畜禽相比较,猪的脂肪较多,前腔静脉隐藏于体内,摸不着、看不见,下针采血时很难精准定位;成年猪体重大、性情暴躁、易嚎叫,保定很费力气;猪舍内采样空间狭小和存在其他猪群的干扰等因素均可造成采血困难。
1.3 物的因素 采样设备简陋,没有专用的大动物保定装置,给大型家畜采样存在安全隐患。对此可研发采样保定架,确保保定大动物时,其产生的应激反应小、安定性好,并保障采样人员或救治人员的安全,符合动物保护与职业安全的要求。
2.1 采血前准备 备好专用铝镁合金动物采样箱(内有:止血钳、弯圆手术剪、直尖手术剪、手术刀、听诊器、棉球、镊子、刀片、折叠放大镜、标签纸、记号笔、碘酒、无菌密封采样袋、酒精棉球、注射器、各型号不锈钢针头、口罩等)、保温桶(内有冰袋和试管架)、防护手套、猪套口器(金属杆套绳、钢丝套绳)、10 mL或20 mL一次性塑料注射器(采血器)、防护服、胶鞋等。
猪的采血器可选10 mL规格的一次性塑料注射器,因为猪的采血样多在5 mL左右。不同体重猪的前腔静脉深浅不同,采血针头太长会刺穿前腔静脉血管,太短又会采不到血,因此针头型号要根据猪的体重做对应选择(见表1)。
表1 不同体重猪采血针头型号选择
采样单填写:详细填写养殖场名称、地址,猪的品种、日龄、健康状况,存栏数、抽样数、抽样人、采样日期及养殖场主的联系方式、签字等信息。
2.2 采血保定 乳猪、小猪采用侧卧或仰卧保定,最好由两人进行保定,一人固定猪的后肢,一人固定前肢,尽量使猪的头部与前肢垂直,暴露出颈胸间两侧的“凹陷窝”。中、大猪采用站立保定,保定人员在两人或两人以上,一人站立用两腿夹住猪的身体,另一人面对猪的头部,用保定钢丝套绳或杆状套口器套住猪的上颌,向前上方用力牵拉,使猪头抬起,头颈与水平面呈30°以上的夹角,以完全露出猪胸前两侧的“凹陷窝”,并使猪两前肢能轻微着地。
采样人员可通过抚摸、挠痒等方法使猪保持安定,如果猪采血时出现躁动,采血下针时极易出现偏离,扎伤气管等组织。大猪的保定很费力,最好让养殖场的饲养员参加保定,饲养员长期与猪接触,猪对他们熟悉、不害怕,保定会更加顺利。
2.3 采血位置 猪前腔静脉分左右束,位于猪的颈部近身体中线。小猪前腔静脉直径约0.5 cm,成年猪在1 cm以上,由颈内外静脉、肩胛下静脉、锁骨下静脉、胸内静脉汇集而成。
采血扎针部位在第一对肋骨与胸骨柄结合处的两个“凹陷窝”(见图1),猪前腔静脉在此位置直径最大,扎针比较容易成功。
图1 猪前腔静脉位置
2.4 采血操作 先用碘酒消毒被采血猪胸前右侧“凹陷窝”处的皮肤,再用75%的酒精棉球对该处进行脱碘。
在10 mL 一次性注射器上安装好与采样猪体重相适应的不锈钢针头,将注射器活塞多抽动几次,以减小抽血时的阻力,也便于观察针头是否漏气,最后让注射器活塞靠近针头部位,预留0.5 cm 左右的空隙,便于扎针后能产生负压,血液能回流。
采样人单手持注射器,手不抖动,大拇指、食指和中指固定注射器的后端,无名指和小指反方向推动注射器活塞拉杆完成抽血。下针部位在猪胸前右侧“凹陷窝”最低处(因为左侧有膈神经,所以右侧扎针),由下而上垂直于“凹陷窝”底,稍偏向猪颈中央及胸腔方向刺入,见有血回流入注射器后,稳定住注射器,轻推活塞拉杆抽取血液。若下针后不见回血,可将针头前后小范围移动,直到见到有回血为止。猪前腔静脉血管被刺穿,可能引起局部血肿,这时要立即停止抽血,给猪止血消毒,并换别的猪采血。
一头猪采血3~5 mL 即可,采血后要快速拔掉针头,用干棉球按压采血部位止血1 min,再用碘酒棉球消毒,最后松掉套口器解除保定。
采血完成后用记号笔在标签纸上登记好样品信息并贴在注射器外壁上,用止血钳折弯注射器针头(防止血液渗漏),倒立放于保温桶中。
2.5 血清提取和保存 若环境温度较低,可将注射器内的血样在实验室过夜自然析出血清,再经离心提纯血清,最后编号保存于1.5 mL 的无菌离心管中备用。若环境温度高,则要及时将采集的血样带回实验室,将血样从注射器挤入10 mL离心管中,以3 000 r/min离心2 min,分离出上层血清,最后编号保存备用。
提取好的血清如在一个星期内做检测,可以放入冰箱的保鲜层(-2~8 ℃)中保存。若要较长时间保存血清,可以放入-20 ℃以下的冰柜中保存,有条件的可以放入-80 ℃冰箱中保存(可存1年以上)。