清咽宣肺袋泡茶的质量标准研究

郑黎明 梁小蕾 梁 敏

1.广东省湛江市第一中医医院药学部，广东湛江 524300；2.广东省湛江市食品药品检验所中药实验室，广东湛江 524000

清咽宣肺袋泡茶的处方是由荆芥、薄荷、桔梗、法半夏、射干、蝉蜕等多味中药组成，经多年临床实践证明，该方剂具有清咽宣肺、开音散结、化痰止咳的功效，用于急慢性咽炎、扁桃体炎等。为能对清咽宣肺茶泡剂的质量进行有效的控制，本研究进行了该制剂质量标准的研究，建立了薄荷、荆芥的显微鉴别方法[1]及法半夏、桔梗的薄层色谱鉴别方法[2]，同时建立了气相色谱法对袋泡茶中的薄荷脑、胡薄荷酮的含量进行测定[3]。

1 仪器与试药

1.1 仪器

电子天平CPA324S（北京赛多利斯科学仪器），高速粉碎机KC-02（开创同和科技），生物显微镜及摄影成像系统BX51-TF；Pro580ES（日本奥利巴斯），气相色谱仪7890B（美国安捷伦）。

1.2 试药

桔梗对照药材（中国食品药品检定研究院，批号121028-202113），半夏对照药材（批号121272-201806），薄荷脑对照品（中国食品药品检定研究院，批号110728-201707），胡薄荷酮对照品（中国食品药品检定研究院，批号111706-201907），清咽宣肺袋泡茶（医院制剂室生产，批号210820、210923、211012）。试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 显微鉴别方法

取本品置高速粉碎机粉碎，过5号筛，取少许粉末于载玻片上，滴加水合氯醛试液1～2滴，在酒精灯上微微加热，以不烧干为度直至完全透化，透化后加封盖玻片[1]，放置在显微镜下，用40×10显微倍数观察，可见其药材显微特征。

2.1.1 薄荷的显微鉴别 非腺毛稍弯曲、壁较厚；腺鳞头部具有8细胞，柄单细胞（图1）。

图1 薄荷的显微鉴别图

2.1.2 荆芥的显微鉴别 内果皮石细胞具有密集纹孔；腺鳞头部具有8细胞，柄单细胞（图2）。

图2 荆芥的显微鉴别图

2.2 薄层鉴别

2.2.1 法半夏薄层色谱鉴别 分别取三个批号（210820、210923、211012）的清咽宣肺茶1包12 g，加入50 ml乙醇溶液，回流加热提取1 h，放置冷却，滤过后将滤液蒸发，在残渣中加入乙醇2 ml，制得供试品液。根据处方剔除半夏药材，制成阴性样品，再按供试品溶液制作办法制成阴性对照溶液。将半夏的对照药材用同样方法制成对照药材液[4-7]。以上各溶液取15 μl分别点在硅胶G板，用石油醚/乙酸乙酯/丙酮/甲酸展开剂展开，取出晾干，用10%硫酸乙醇液喷洒，加热至显示斑点，颜色清晰，供试品与对照品色谱在相同位置显同颜色的斑点[4-7]（图3）。

图3 法半夏薄层色谱图

2.2.2 桔梗薄层色谱鉴别 分别取三个批号（210820、210923、211012）的清咽宣肺茶1包12 g，加入7%硫酸乙醇-水（1∶3）混合液60 ml，回流加热提取3 h，放置冷却后过滤，用三氯甲烷振摇萃取2次，每次30 ml，合并两次三氯甲烷萃取液，纯化水清洗2次，每次30 ml，将三氯甲烷液脱水，滤过后将滤液蒸干，在残渣中加入甲醇液，制作成供试品溶液；根据处方剔除中药桔梗，制成不含桔梗的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液；用桔梗对照药材按同样办法制作对照药材液[8-10]。上面几种溶液各取15 μl，点在同一硅胶G板上，用三氯甲烷/乙醚展开，取出晾干，再喷10%硫酸乙醇液[11-12]，加热至显示斑点及颜色明显，供试品溶液与对照药材溶液色谱在相同的位置上显示棕黑色斑点，阴性对照液无干扰（图4）。

图4 桔梗薄层色谱图

2.3 含量测定

2.3.1 色谱条件与系统适用性试验 安捷伦气相色谱HP-INNOWAX毛细管柱（柱长为30 m，内径为0.25 mm，膜厚度为0.25 μm），程序升温，初始温度70℃，保持4 min，先以1.2℃/min的速率升温至120℃，再以3℃/min的速率升温至200℃，最后以30℃/min的速率升温至230℃，保持2 min，进样口温度200℃，检测器的温度是300℃，所有样品不分流进入色谱柱。

2.3.2 制备溶液 ①制备对照品溶液：分别精确称取薄荷脑对照品、胡薄荷酮对照品适量，置容量器中，加无水乙醇分别制成100 μg/ml薄荷脑对照品溶液、100 μg/ml胡薄荷酮对照品溶液，密封保存于阴凉处。②制备供试品溶液：精密称定本品粉末1包约12 g，放在锥形瓶中，加50 ml无水乙醇，用250 W超声处理（频率33 kHz）1 h[3，12-13]，放置冷却，根据冷却后的减少量，用无水乙醇补充，然后取滤过的滤液。③制备阴性对照品溶液：按处方与制备方法制成不含荆芥和薄荷的阴性对照样品，用与供试品溶液一样的制备方法制作成阴性对照液[3，12-13]。

2.3.3 专属性试验 将供试品液、薄荷脑与胡薄荷酮对照品液以及阴性对照品液各吸取1μl，按2.3.1项下的色谱条件进行含量测定，薄荷脑对照品、胡薄荷酮对照品溶液与供试品溶液有同样的色谱峰，阴性对照品溶液不显示[11，14]。

2.3.4 线性关系考察 分别精密称取胡薄荷酮和薄荷脑对照品，分别制成薄荷脑100 μg/ml胡薄荷酮100 μg/ml、薄荷脑50 μg/ml胡薄荷酮50 μg/ml、薄荷脑25 μg/ml胡薄荷酮25 μg/ml、薄荷脑10 μg/ml胡薄荷酮10 μg/ml、薄荷脑5 μg/ml胡薄荷酮5 μg/ml的混合对照品溶液并注入气相色谱仪，进行含量测定，各1 μl的进样量，进行回归方程计算。薄荷脑、胡薄荷酮在进样量范围的回归方程式：薄荷脑Y=10.927 00X+7.695 98（r=0.999 40），胡薄荷酮Y=10.327 14X+6.593 17（r=0.999 52）[3，12]，结 果 表明薄荷脑进样量在5.0290～100.5800 ng，胡薄荷酮进样量在5.0105～100.2100 ng范围内具有良好的线性关系。

2.3.5 精密度试验 精确吸取供试品液，按照2.3.1项下色谱条件，共进行6次重复进样，记录每次的峰面积，结果薄荷脑RSD为0.97%和胡薄荷酮RSD为0.94%（n=6），说明有良好的精密度[3，11]。

2.3.6 稳定性试验 上面同样的供试品液与色谱条件，在0，2，4，8，12，24 h分别进行测定，将峰面积记录，结果是薄荷脑RSD为1.59%、胡薄荷酮为1.89%。说明供试品液有良好的稳定性[2-3，11-12]。

2.3.7 重复性试验 批号相同（批号210923）的供试品6份，按照2.3.2项下的制备方法制备供试品液，与2.3.1项下色谱条件来进行测定，将测得的峰面积记录，然后计算6份样品中薄荷脑和胡薄荷酮的含量，结果是薄荷脑RSD为1.10%、胡薄荷酮RSD为1.15%（n=6），说明该方法具有良好的重复性[11，15]。

2.3.8 加样回收率试验 精确称取样品（批号210923）溶液9份，加入70%、100%、130%的混合对照品液，用2.3.2项下制备方法制得供试品液，在同样的色谱条件中测定，计算回收率，试验结果说明该方法具有良好的回收率（表1～2）[1-6]。

表1 薄荷脑回收率试验

表2 胡薄荷酮回收率试验

2.3.9 样品含量测定 取3批不同批号的清咽宣肺袋泡茶，按2.3.2项下同样的方法制得供试品溶液和对照品溶液，将供试品溶液与薄荷脑对照品溶液、胡薄荷酮对照品溶液分别取1 μl，按2.3.1项下色谱条件进行测定，计算薄荷脑与胡薄荷酮的含量，结果见表3～4。本品每袋含薄荷和荆芥以薄荷脑（C10H20O）计算不得少于0.86 mg；以胡薄荷酮（C10H16O）计算不得少于0.59 mg。

表3 薄荷脑含量测定结果

表4 胡薄荷酮含量测定结果

3 讨论

3.1 显微鉴别药材的选择

荆芥、薄荷是清咽宣肺方中的君药，首选作为显微鉴别药材，结果显示显微特征明显，清晰可见。

3.2 薄层鉴别药材的选择

清咽宣肺方的组成共有11味中药，成分多而复杂，处方中的中药在进行薄层鉴别的过程中，除桔梗、法半夏外，其他药材成分在检测中受干扰、结果不理想，故只将桔梗、法半夏作为定性鉴别药材，结果显示桔梗、法半夏的薄层鉴别斑点与颜色都清晰[4]、明显。

3.3 含量测定指标成分的选择

清咽宣肺方中，将君药荆芥、薄荷的有效成分胡薄荷酮与薄荷脑的含量作为含量测定指标，在选择样品的处理方法时，比较了水蒸气提取法和超声仪提取法，超声仪提取法更多地保留了胡薄荷酮和薄荷脑，也比较了提取时间30、60、90 min，以60 min提取效果最好，通过气相色谱方法制订了胡薄荷酮和薄荷脑的含量，操作方法简易，测定的结果准确，有良好的重复性[2-3]，可控制清咽宣肺茶的质量。

本实验操作方法简单，同时具有良好的灵敏度，可以作为清咽宣肺袋泡茶的质量控制方法。