基于“药性变化论”的诃子煨后固肠止泻炮制原理研究

刘婧,王巍,王一帆,王月南,郑舒意,张强

(辽宁中医药大学药学院,辽宁 大连 116600)

诃子为使君子科植物诃子(TerminaliachebulaRetz.)或绒毛诃子(T.chebulaRetz. var.tomentellaKur.)的干燥成熟果实。其性平味苦酸涩,归肺、大肠经;具有涩肠止泻、敛肺止咳和降火利咽的功效[1];临床常用于治疗久泻久痢、便血脱肛、肺虚咳喘、久咳不止和咽痛音哑等[2]。当用于涩肠止泻时常“煨熟”使用。明李中梓在《本草通玄》中首次将诃子的使用方法归纳为“生用则能清金行气,煨熟则能温胃固肠”[3]。目前,药性研究已成为中药领域的热点。机体组织细胞内两种环核苷酸(环磷酸腺苷cAMP与环磷酸鸟苷cGMP)被认为是祖国医学阴阳学说的物质基础,其在机体内通过相互拮抗作用维持着一定的平衡状态,在调节人体生物功能方面发挥重要的作用,因此将中药对内脏组织中环核苷酸水平的选择性调节作用看作中药归经的物质基础;升降沉浮常常表现出与病位相同的趋势,而与病势表现相反的趋势,研究者常常以胃排空及小肠推进为指标评价升降沉浮的改变[4-7]。

基于以上分析,本研究将从炮制影响诃子的归经和升降浮沉属性入手,以cAMP和cGMP在肺与大肠组织的含量变化分析诃子炮制对归经的影响;以胃排空和小肠推进率来考察炮制对诃子升降浮沉的影响。从药性变化的角度来探讨诃子煨后固肠止泻作用增强的原理,为临床合理用药提供理论依据。

1 材料

1.1 试药诃子[产地:云南,经辽宁中医药大学翟延君教授鉴定,为使君子科植物诃子(TerminaliachebulaRetz.)的干燥成熟果实];番泻叶(天津智汇康杰医药科技有限公司,批号:170901,经辽宁中医药大学中药鉴定教研室翟延君教授鉴定,为豆科植物狭叶番泻(CassiaangustifoliaVahl)的干燥小叶;蒙脱石散(杭州康恩贝制药有限公司,批号:03201102)。cAMP试剂盒(BPE20860)及cGMP试剂盒(BPE20448)均购自上海朗顿生物科技有限公司。

1.2 动物SPF级昆明小鼠,雄性[辽宁长生生物技术有限公司,动物许可证号为:SCXK(辽)2020-0001],体质量(20±2)g。全部动物实验经辽宁中医药大学动物伦理委员会批准(许可证号:2020059),符合要求。

1.3 仪器Multiskan-MK3型酶标仪(美国赛默飞世尔科技有限公司);Z 300K型Fresco台式高速冷冻离心机(德国Heraeus公司);FA1004B型分析天平(上海精密科学仪器有限公司)。

2 方法与结果

2.1 诃子炮制品的制备取净诃子,投入预热至260 ℃的干净河砂中,不断翻动,炒制约6 min,取出,筛去河砂,放凉备用[8]。

2.2 给药液制备取诃子生品及炮制品适量,粉碎,过200目筛,加适量水制成浓度为0.065 g·mL-1的混悬液,备用;取番泻叶适量,分别加5倍量、4倍量水回流提取两次,每次1 h,合并滤液,浓缩至浓度1 g·mL-1,备用[9];取蒙脱石散适量,加适量水制成浓度为0.06 g·mL-1的混悬液,备用[10]。所有给药液给药前均摇匀。

2.3 动物分组、造模与给药按随机对照原则将小鼠分为5组,即空白组、模型组、蒙脱石散组、诃子生品组及炮制品组,每组10只。除空白组外,其余4组每天灌胃番泻叶水提液0.4 mL/20 g,空白组灌胃同等剂量蒸馏水,连续造模8 d。每天造模12 h后,诃子生品组灌胃诃子生品混悬液0.4 mL/20 g,诃子制品组灌胃诃子炮制品混悬液0.4 mL/20 g,蒙脱石散组灌胃蒙脱石散混悬液0.4 mL/20 g,模型组和空白组灌胃同等剂量蒸馏水,连续给药7 d。

2.4 指标测定

2.4.1 DAI评分每天观察并记录各组小鼠体重及腹泻情况的变化,记录并进行疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分,评分标准见表1。DAI评分=体重变化情况×50%+腹泻程度×50%[11]。

表1 DAI评分标准

2.4.2 胃排空率及小肠推进率的测定各组小鼠末次给药后禁食不禁水12 h,进行末次造模给药,再于4 h后灌胃半固体状物(5%羧甲基纤维素钠,5%碳粉),0.8 mL/只,15 min后处死,剥离肺、胃、大肠及小肠,生理盐水冲洗干净后,称重,大肠和肺加10倍量生理盐水匀浆,3 500 r·min-1离心15 min,取上清-20 ℃保存,备用。胃称重后洗去残留碳粉,称量胃净重,计算胃残留率。小肠测量碳粉推进率。

2.4.3 肺肠组织中cAMP及cGMP表达水平的测定取肺和大肠组织匀浆上清,按cAMP、cGMP ELISA试剂盒说明操作,测定cAMP、cGMP表达水平,并计算cAMP/cGMP值。

2.6 结果

2.6.1 DAI评分结果各组小鼠实验前体重无显著性差异,均无腹泻情况。造模后,除空白组外各组小鼠体重显著下降,并出现毛色晦暗伴有炸毛、聚堆现象,腹泻明显。给药后,各给药组体重显著升高,聚堆、炸毛及腹泻现象好转。对各组小鼠实验最后一天的DAI评分见表2。

表2 各组小鼠DAI评分、胃残留率及小肠推进率结果

2.6.2 胃残留率及小肠推进率结果与空白组比较,模型组小鼠胃残留率显著下降(P<0.01),小肠推进率显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组均有改善,且诃子制品组优于诃子生品组,结果见表2。

2.6.3 cAMP及cGMP表达水平结果与空白组比较,模型组小鼠肺与大肠cAMP均显著升高(P<0.01),cGMP则显著下降(P<0.01),cAMP/cGMP值显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组均有改善,同时,诃子生品组肺cAMP/cGMP值低于大肠,诃子制品组则相反,结果见表3～4。

表3 各组小鼠肺及大肠cAMP、cGMP含量

表4 各组小鼠肺及大肠cAMP/cGMP值

3 讨论

3.1 炮制对药性的影响炮制可以增强药物作用,减轻毒性,还能改变成分、功效、药性等属性。药性始于神农,炮制盛于雷斅。药性者寒热温凉,苦酸甘辛咸,归经,补泻,有毒无毒是也。药以治病,因性为能。寒不及则无以清热,热不足则无以祛寒。酸不足无以收敛固涩,苦不及无以燥湿清泄,辛不足无以发散行气,甘不及无以补虚和中,咸不足无以软坚散结[10]。不同炮制方法对中药药性有很大的影响,适宜的炮制可以使中药的某一个或某些药性占主导地位,从而发挥其特殊治疗功效。在传统炮制理论中有生升熟降,是说有些药物生品使用其作用趋势趋上,而制熟之后其作用趋势趋下。诃子“生用清金行气,煨熟温胃固肠”就是生升熟降的表现。

3.2 炮制对诃子升降浮沉的影响升降浮沉是中药特点之一,与人体机体内的不同趋向性有关。味辛甘,性温热的中药主要具有升浮功效,味苦酸咸,性寒凉的中药则主要具有沉降功效。但是在通过一定的炮制后,其升降功效也会出现变化[13]。本研究中诃子生品及炮制品对小鼠腹泻情况均有改善,其中炮制品组DAI评分、小肠推进率及胃内残留率优于生品组,说明诃子制熟之后,其止泻作用增强,作用趋势变为趋下,降气涩肠。

3.3 炮制对诃子归经的影响中药在经过炮制后归经会发生变化,药效也会随之改变。同时对于一种中药而言,其归经往往并不是单一的,而是会分为几种,而经过炮制之后,能够增强其中某一种归经的效果,让其对该部位疾病的疗效更加确切[13]。根据本实验cAMP/cGMP值的变化可以推断出炮制影响了诃子的归经偏性,原本诃子归肺与大肠经,制熟之后偏于归大肠经而止泻。

4 结论

诃子煨后固肠止泻作用增强,根据本实验结果,其炮制原理从药性变化角度看是诃子炮制后作用趋势趋下,偏于归大肠经。但具体机理还需从分子生物层面深入研究以解析诃子的炮制原理。