尿液样本未酸化对尿钙检测结果准确性和稳定性的影响

张学军，张若寒（通信作者），朱丽凤，肖瑶

1 扬州大学附属医院 （江苏 扬州 225009）；2 上海健康医学院 （上海 200436）；3 欧陆生物科技（上海）有限公司 （上海 200436）

尿液生化检测不仅是一项重要的实验室检测项目，也是某些药物临床试验的重要评价指标。其中，尿钙检测是评价人体中钙代谢和排泄的重要指标，可用于泌尿系统结石、骨质疏松和家族遗传性低尿钙性高钙血症等多种疾病的诊断和随访，对疾病诊断、病情观察、疗效判定均具有重要意义[1-2]。但尿液成分复杂，其中的某些阴性酸根会与钙形成复合物，从而影响尿钙检测结果的准确性[3]。因此，药物临床试验方案和尿钙检测试剂厂家均推荐使用酸化容器（容器内添加一定浓度的盐酸）收集尿液样本，以确保尿钙检测结果的准确性[4]。实际操作中，由于盐酸具有强烈的腐蚀性，酸化容器操作不当易增加实验室人员和患者受伤害的风险；同时，多中心药物临床试验中尿液收集容器需由中心实验室统一制备并运输至各个临床试验机构，但因酸化容器属于特殊运输物品[5]，不仅需要特种车辆运输，且装运前需报有关部门批准，运输过程中需按特定路线行驶，因此运输时间较长，常存在运送延误导致未能及时采集尿液样本而影响研究进展的情况。基于以上原因，目前临床对尿液样本是否必须酸化存在较大争议。基于此，本研究通过分析未酸化样本和酸化样本不同时间点尿钙检测结果的可比性，探讨尿液样本酸化是否是尿钙检测的先决条件，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

于2023 年2 月21 日9:00—10:00 收集41 名志愿者的随机尿液样本各10 ml（收集容器不添加任何酸或防腐剂），志愿者均为欧陆生物科技（上海）有限公司在职员工，均签署知情同意书。

1.2 方法

首先，样本收集后立即使用欧陆中心实验室罗氏 Cobas U411 尿液分析仪检测pH 值（仪器检测结果更加准确，有利于估算盐酸的添加量）。然后，将每份样本分装为2 管，每管5 ml；其中一管不进行酸化；另一管加入2～3 滴6.0 mol/L 的盐酸进行酸化，使样本pH 值保持在1～3 之间（此时只需检测酸化样本的pH 值范围，不需要精确结果，使用pH试纸检测即可）。最后，将样本进行二次分装，即每管样本（5 ml）分装为5 管，每管1 ml，其中一管分装完成后立即检测尿钙，将检测结果作为基线数据（Day0）；其余样本保存于欧陆中心实验室（保存温度5～30 ℃），分别于第1 天（Day1）、 第2 天（Day2）、第3 天（Day3）和第7 天（Day7）检测尿钙。

尿钙检测仪为欧陆中心实验室的罗氏Cobas 6000 c501 全自动生化分析仪，检测方法为甲酚酞氨羟络合物终点比色法。

1.3 临床评价

分析未酸化样本和酸化样本不同时间点尿钙检测结果的可比性。

1.4 统计学处理

采用SPSS 21.0 统计软件进行数据分析。计量资料均符合正态分布，以±s 表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用独立t检验。P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

未酸化样本各个时间点的尿钙检测结果比较，差异无统计学意义（P>0.05）；酸化样本各个时间点的尿钙检测结果比较，差异无统计学意义（P>0.05）；未酸化样本和酸化样本各个时间点的尿钙检测结果比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

表1 41 名志愿者尿液样本未酸化和酸化后的尿钙检测结果比较（mmol/L，±s）

表1 41 名志愿者尿液样本未酸化和酸化后的尿钙检测结果比较（mmol/L，±s）

样本Day0Day1Day2Day3Day7FP未酸化3.92±2.91 4.00±2.95 3.97±2.92 3.93±2.91 3.64±2.19 0.120 0.980酸化 3.92±2.88 4.01±2.95 4.02±2.97 4.01±2.96 4.00±2.95 0.010 1.000 t0.0000.0200.0800.1200.630 P1.0000.9900.9400.9000.530

3 讨论

钙是人体重要的微量元素之一，不仅参与骨骼和牙齿的形成、肌肉的生理活动，且具有强化神经系统传导功能的作用。人体中的钙主要经食物摄入，并通过尿液代谢。尿钙是尿液矿物质检测中的常用指标之一，主要用于检测尿中钙离子的含量，正常参考范围为2.5～7.5 mmol/24 h。

实际工作中，由于尿液中含有无机盐、尿酸、尿素、肌酐等多种成分，某些阴性酸根会与钙形成复合物，导致尿中钙离子含量降低，影响尿钙检测结果的准确性[5]。因此，药物临床试验方案和尿钙检测试剂厂家均建议常规尿钙检测前在尿液样本中添加盐酸对尿液进行酸化，以促进钙离子的析出，保证检测结果的准确性。但盐酸是一种危险化学品，操作不当极易导致严重皮肤灼伤和眼损伤，少量吸入即可导致刺激性呛咳、咳嗽等症状；同时，酸化后的容器属于危险货物，其储存、操作、运输均需符合国家关于危险化学品的运输要求，常存在运输时间较长影响临床使用和研究进展的情况。此外，临床对尿钙检测前是否必须进行尿液样本酸化存在争议。Sodi 等[5]对133 例患者的尿液样本进行配对研究，比较酸化和未酸化样本及不同浓度盐酸酸化样本中尿钙水平的差异，结果均未发现差异，说明酸化并不是尿钙检测前的必要条件。Darn 等[6]通过模拟钙的沉淀过程，得出酸化或缺乏酸化不会导致尿钙检测结果显著变化的结论。同时，该研究结果显示，pH 值是钙在尿液中沉淀的主要决定因素，如果尿液pH>6.5，则应在尿钙检测前进行酸化，以保证检测结果的准确性。

本研究结果显示，未酸化样本和酸化样本各个时间点的尿钙检测结果比较，差异无统计学意义（P>0.05）。这一结果与上述研究结果相似，进一步说明，尿液样本酸化并不是尿钙检测的先决条件。但本研究存在以下不足。（1）由于尿钙水平随每日食物摄取量的变化而变化，因此临床常规采用24 h 防腐尿液作为尿钙检测样本[2]；但本研究由于试验条件和样本来源限制而采用随机尿液作为检测样本，这可能导致研究结果存在一定的局限性，日后需扩大样本来源和样本量进行深入研究[7]。（2）本研究虽然未发现未酸化样本和酸化样本尿钙检测结果的显著差异，但随着保存时间的延长，未酸化样本的尿钙水平逐渐降低，因此本研究仅可证明尿液样本短期（不超过7 d）保存后检测尿钙前不需酸化，对于长期保存的尿液样本仍然建议在尿钙检测前进行酸化。（3）本研究中2 份样本的Day7 检测结果与Day0 数据差异较大，无法排除志愿者饮食习惯和健康状况的影响，因此后续研究需严格控制样本的纳排标准，并应尽可能涵盖各个尿钙水平的人群。

综上所述，尿液样本未酸化不会影响尿钙检测结果的准确性和稳定性，因此酸化并不是尿钙检测的先决条件。