机化性肺炎患者T 淋巴细胞亚群分析的临床意义

薛占成 韩海燕 刘冀琴 周秀

作者单位：300162 天津，武警特色医学中心检验科

机化性肺炎是一种因肺损伤导致的以远端气道炎症细胞浸润和肉芽组织增生为特征的非特异性炎症反应，可由感染、药物等因素引起［1-3］。作为间质性肺炎的一种亚型，机化性肺炎占间质性肺炎的4%～12%［4］。机化性肺炎的发病机制涉及多种炎性细胞及炎症因子，是一个复杂的多因素参与的炎性机化过程，患者临床上主要表现为持续性的咳嗽、咳痰、胸闷、气短［5］。

机化性肺炎的发生发展与机体免疫反应密切相关［6］。T 淋巴细胞是机体执行细胞免疫的主要效应细胞之一，T 淋巴细胞亚群的改变会影响肺部疾病的发生发展。在T 淋巴细胞亚群的临床研究中，目前大多选择患者外周血和支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid，BALF）作为样本，但针对二者结果的比较研究较少。本研究使用流式细胞仪检测45 例机化性肺炎患者及30 名健康体检者BALF 和外周血中的T 细胞亚群（CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+），探讨其在机化性肺炎诊断中的临床价值，现报告如下。

1 资料与方法

1.1研究对象与分组 选择本中心2013—2019 年收治的45 例机化性肺炎患者作为研究对象，纳入观察组；另外选择30 名本中心同期体检人员纳入对照组，回顾并分析两组的临床资料。所有受检者均对本研究知情同意。

1.1.1纳入标准 所有患者均符合美国胸科学会和欧洲呼吸学会（American Thoracic Society/European Respirator Sociey，ATS/ERS）颁布的机化性肺炎诊断标准［7］，临床诊断为机化性肺炎，如感染、药物、放射、过敏、风湿免疫性肺损伤等［8-9］。

1.1.2排除标准 ① 临床资料不完整或在治疗随访中失访、退出的患者；② 肺癌患者。

1.2研究方法

1.2.1仪器与试剂 FC500 流式细胞仪和CD45/CD4/CD8/CD3 检测试剂盒（流式细胞术）均购自美国贝克曼库尔特有限公司。

1.2.2检测指标 采集受检对象静脉血2 mL 置于乙二胺四乙酸二钾（dipotassium ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA-K2）抗凝管；BALF 经双层无菌纱布过滤后，以1 500 r/min（离心半径为10 cm）离心10 min，沉淀的细胞成分用鞘液制成细胞悬液。取CD3、CD4、CD8 荧光标记的单克隆抗体各20 μL，分别加入100 μL 抗凝外周血和BALF 细胞悬液中，于室温在暗处反应20 min，用细胞裂解液溶解红细胞，鞘液洗涤细胞1 次，采用流式细胞仪测定T 淋巴细胞亚群（CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+），在直方图中标记出淋巴细胞群，再分别计数6 000 个T 淋巴细胞中各标记细胞的百分比。

1.3统计学方法 采用GraphPad Prism 5 统计软件对实验数据进行统计分析。对计量资料行t检验及方差分析；绘制受试者工作特征曲线（receiver operator characteristic curve，ROC 曲线）并计算ROC曲线下面积（area under ROC curve，AUC）。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1一般资料 观察组和对照组的性别、年龄等一般资料比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），有可比性。见表1。

表1 观察组和对照组的一般资料比较

2.2外周血T 淋巴细胞亚群 两组CD3+比较差异无统计学意义（P＞0.05）；观察组的CD3+CD4+以及CD4+/CD8+比值均明显低于对照组，CD3+CD8+明显高于对照组（均P＜0.05）。见表2，图1。

图1 观察组与对照组患者外周血中T 淋巴细胞亚群分析

表2 观察组与对照组患者BALF 和外周血中T 淋巴细胞亚群比较（x±s）

2.3BALF T淋巴细胞亚群 观察组CD3+、CD3+CD8+均明显高于对照组，CD3+CD4+以及CD4+/CD8+比值均明显低于对照组（均P＜0.05）。见表2，图2。

图2 观察组和对照组患者BALF 中T 淋巴细胞亚群分析

2.4BALF 与外周血T 淋巴细胞亚群比较 观察组BALF 中CD3+、CD3+CD8+均明显高于PB 中（均P＜0.05）；观察组BALF 中CD3+CD4+、CD4+/CD8+比值与外周血比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。见表2，图3。

图3 观察组患者BALF 与外周血T 淋巴细胞亚群比较

2.5BALF 及外周血中CD4+/CD8+比值检测对机化性肺炎诊断的敏感度和特异度比较 ROC 曲线分析结果显示，以BALF 中CD4+/CD8+比值等于0.960作为最佳截断值，该指标诊断机化性肺炎的敏感度为86.67%，特异度为80.00%；以外周血中CD4+/CD8+比值等于0.890作为最佳截断值，该指标诊断机化性肺炎的敏感度为80.00%，特异度为76.09%。BALF检测诊断机化性肺炎的AUC 为0.892〔95%可信区间（95%CI）为0.808～0.963〕，外周血检测诊断机化性肺炎的AUC 为0.747（95%CI为0.628～0.866），差异有统计学意义（P＜0.05）。见图4。3 讨论

图4 BALF 及外周血中CD4+/CD8+比值检测诊断机化性肺炎的ROC 曲线

机化性肺炎是由于肺组织受损造成非特异性反应所致，表现为纤维母细胞异常增殖、炎症细胞浸润及间质纤维增生等，致肉芽组织遍布肺泡腔［10］。国内外有研究结果表明，不同类型间质性肺炎患者的BALF 中T 淋巴细胞亚群水平均不同［6，11-13］。

BALF 由支气管以下肺部病变段灌洗回收而得，是获取远端肺实质炎症细胞简单而安全的途径，通过对BALF 的检测和分析，可在患者发病早期了解肺部疾病的特点，有助于对间质性肺炎的诊断［14-18］。且BALF 中的T 淋巴细胞亚群在不同类型间质性肺炎患者中表达水平不同［19］。T 淋巴细胞介导机体细胞免疫，是细胞免疫的主要效应因子，其发挥的调节作用主要是通过T 淋巴细胞亚群相互作用来维持［20-21］。CD3+CD4+细胞为机化性肺炎的保护因素，其表达量降低是机化性肺炎恶化的原因之一。CD3+CD8+为病情加重的危险因素，可通过释放抑制性细胞因子，负调节机体免疫功能［22-23］。CD3+CD4+与CD3+CD8+在体内维持一定程度的动态平衡，CD4+/CD8+决定了机体免疫状态和免疫反应水平［24-25］。本研究结果显示，在机化性肺炎患者的BALF 和外周血中，CD4+/CD8+比值明显降低，与田辉等［6］、王小燕［17］、林芳等［18］研究结果一致，其中BALF 和外周血中CD4+/CD8+比值降低是CD3+CD4+降低和CD3+CD8+升高共同作用的结果，提示CD4+/CD8+比值与机化性肺炎的发生发展有一定关系。

进一步绘制ROC 曲线结果显示，BALF 和外周血中CD4+/CD8+比值诊断机化性肺炎的最佳阳性阈值分别为0.960 和0.890；BALF 和外周血检测的AUC 分别为0.892 和0.747，两者差异具有统计学意义，提示BALF 中CD4+/CD8+比值检测对机化性肺炎的诊断效能高于外周血检测。

综上所述，BALF 和外周血中T 淋巴细胞亚群检测对机化性肺炎患者的诊断具有一定临床价值，对患者BALF和外周血的T淋巴细胞亚群进行分析，可作为机化性肺炎患者免疫状态评估的辅助手段。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突