五灵胶囊联合富马酸丙酚替诺福韦治疗CHB患者的效果及对TGF-β/Smad信号通路的调节作用

贺露露,王玉静,徐杰,贺茂,沈裕厚

(1.新乡市传染病医院 内科二病区,河南 新乡 453000;2.新乡市中心医院 a.消化内科;b.超声科;c.普瘤外科,河南 新乡 453000;3.濮阳惠民医院 病理科,河南 濮阳 457099)

慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)是一种传染性疾病,乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)慢性炎症持续存在,诱发细胞外基质的大量沉积,且上皮细胞转换为间充质细胞对肝细胞产生侵袭,导致肝组织纤维化[1]。富马酸丙酚替诺福韦(tenofovir alafenamide fumarate,TAF)对病毒抑制率高,但单独使用抗肝纤维化的疗效欠佳[2]。五灵胶囊是治疗CHB的中成药,药理研究证实其具有抑制慢性肝损伤、抗纤维化的作用。现阶段临床治疗CHB肝纤维化主要通过抗病毒、抗肝纤维化来逆转肝组织损伤[3]。有研究表明转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β)在多种病因所致的组织纤维化中扮演重要角色[4]。本研究尝试探究两种药物联合的应用效果,并从TGF-β/Smad信号通路分析其作用机制。

1 对象与方法

1.1 研究对象

本研究经医院医学伦理委员会审批,患者家属签署知情同意书。选取2021年4月至2022年8月新乡市传染病医院收治的200例CHB患者,按照随机数字表法分为观察组(100例)、对照组(100例)。对照组男53例,女47例;年龄38～63(50.72±5.75)岁;体重指数22～29(25.78±1.38)kg·m-2;病程11～34(22.62±4.94)个月;肝纤维化分期S1期8例,S2期39例,S3期47例,S4期6例。观察组男55例,女45例;年龄39～62(51.34±5.32)岁;体重指数23～29(25.95±1.42)kg·m-2;病程12～35(23.51±5.03)个月;肝纤维化分期S1期7例,S2期42例,S3期45例,S4期6例。两组一般资料均衡可比(P>0.05)。纳入标准:符合《慢性乙型肝炎防治指南(2019年版)》标准[5];乙肝病毒e抗原(hepatitis B virus e antigen,HBeAg)阳性6个月以上;伴有一定程度肝纤维化;未感染其他病毒;近1个月无干扰素、保肝降酶药物、核苷类药物、免疫抑制剂等用药史。排除标准:酒精、人类免疫缺陷病毒、药物等所致肝炎;对本研究所用药物存在禁忌;存在肝肾综合征;伴有恶性肿瘤;重症乙肝或肝硬化失代偿期;哺乳或妊娠期女性;有酗酒史;存在重要器官病变;存在肝占位性病变;精神异常。

1.2 治疗方法

(1)对照组:口服TAF(湖南明瑞制药股份有限公司,国药准字H20213856),每次25 mg,每日1次,连续治疗6个月。(2)观察组:联合口服五灵胶囊(清华德人西安幸福制药有限公司,国药准字Z20090068),每次5粒,每日3次,连续治疗6个月。

1.3 观察指标

(1)疗效。治疗6个月后肝功能基本恢复正常,肝纤维化指标至少2项下降≥50%及以上为显效;肝功能明显改善,肝纤维化指标至少2项下降25%～<50%为有效;肝功能无明显改善,肝纤维化指标中任意2项下降<25%为无效。(2)肝功能指标。采集3 mL空腹静脉血,以8 cm半径离心(3 000 r·min-1,15 min)取血清,采用全自动生化分析仪(日本日立公司,型号7600-110型),以钒酸氧化法测定血清谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase,GPT)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、谷草转氨酶(glutamic-oxaloacetic transaminase,GOT)水平。(3)肝纤维化指标。采集3 mL空腹静脉血,离心取血清,采用全自动化学发光仪(美国雅培,型号i2000)测定血清透明质酸(hyaluronic acid,HA)水平,以双夹心抗体酶联免疫吸附试验测定血清人类软骨糖蛋白39(human cartilage glycoprotein-39,YKL-40)水平。(4)TGF-β/Smad信号通路相关指标。包括转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2、Smad7、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinase,p38 MAPK)。采集3 mL空腹静脉血,离心取血清,采用全自动酶标仪(美国Thermo公司,型号Multiskan FC型),以酶联免疫吸附法测定血清TGF-β1、Smad2、Smad7、p38 MAPK水平。(5)HBeAg、HBV-DNA转阴率。以酶联免疫吸附法检测HBeAg转阴情况,采用聚合酶链反应检测HBV-DNA水平。阴性判定:HBV-DNA复制数<每毫升103拷贝数。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 疗效

观察组显效52例,有效39例,无效9例;对照组显效37例,有效41例,无效22例。观察组总有效率(91.00%)较对照组(78.00%)高(χ2=6.452,P=0.011)。

2.2 肝功能指标

治疗前两组TBIL、GPT、GOT比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗1、3、6个月后两组TBIL、GPT、GOT均较治疗前降低,且观察组低于对照组(P<0.05),见表1。

表1 两组肝功能指标比较

2.3 肝纤维化指标

治疗前两组HA、YKL-40比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗1、3、6个月后两组HA、YKL-40均较治疗前降低,且观察组低于对照组(P<0.05),见表2。

表2 两组肝纤维化指标比较

2.4 TGF-β/Smad信号通路相关指标

治疗前两组TGF-β1、Smad2、Smad7、p38 MAPK比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗1、3、6个月后两组TGF-β1、Smad2、p38 MAPK均较治疗前降低,且观察组低于对照组,Smad7较治疗前升高,且观察组高于对照组(P<0.05),见表3。

表3 两组TGF-β/Smad信号通路相关指标比较

2.5 HBeAg、HBV-DNA转阴率

观察组HBeAg转阴率[54(54.00%)]、HBV-DNA转阴率[77(77.00%)]均高于对照组[29(29.00%)、50(50.00%)](χ2=12.872,P<0.001;χ2=13.648,P<0.001)。

3 讨论

CHB肝损伤过程中,肝星状细胞活化并移行、增殖,在肝纤维化中起关键作用[6]。肝纤维化是肝内细胞与细胞外基质参与的复杂生理改变,是肝脏慢性炎症与肝细胞损伤的必然结果[7]。

临床治疗CHB肝纤维化一方面是抗HBV治疗,去除致病因素,另一方面抑制炎症及脂质过氧化,以逆转肝纤维化[8]。TAF是抗HBV的新型药物,进入人体内可转化为二磷酸替诺福韦,竞争性结合DNA底物,抑制HBV聚合酶活性,进入HBV-DNA主链并与其结合,抑制主链延长,抑制逆转录酶活性和HBV-DNA复制,发挥抗HBV的作用[9]。五灵胶囊由灵芝、柴胡、五味子和丹参组成,是治疗慢性肝炎的复方中药,从中药药理学方面分析,五灵胶囊具有疏肝健脾、解郁化瘀、益气活血的效果[10]。五灵胶囊中包含五味子乙素、柴胡皂苷、丹参酚酸B、五味子醇甲、丹参新醌乙、柴胡多糖、异丹参酮Ⅰ等有效成分,可通过抑制核因子κB信号通路蛋白活性,阻滞肝巨噬细胞过量分泌促炎因子,从而缓解肝细胞损伤,改善肝纤维化[11]。本研究显示,相较于对照组,观察组总有效率较高,TBIL、GPT、GOT均较低,HBeAg、HBV-DNA转阴率较高,上述结果提示五灵胶囊联合TAF可提高治疗效果,抑制HBV,改善患者肝功能。

HA、YKL-40可反映CHB患者肝纤维化程度[12]。本研究结果显示,治疗后观察组HA、YKL-40均低于对照组,表明五灵胶囊联合TAF可改善CHB患者肝纤维化。有研究显示,TGF-β1/Smad信号通路与移植肾纤维化联系密切,TGF-β1可通过TAK1-MKK6途径活化p38 MAPK,促使炎症因子表达增加并作用于肾,促进肾近端小管纤维化[13]。治疗后观察组TGF-β1、Smad2、p38 MAPK均低于对照组,Smad7高于对照组。其中Smad2、Smad7属Smad蛋白家族,是TGF-β信号转导途径中必需的下游分子,与多种疾病生物学行为有关。TGF-β1可通过与Smad2结合使之磷酸化,继而形成异源复合物,调控细胞外基质蛋白基因表达[14]。Smad7与TGF-β1相互调节,能抑制Smad2的活化磷酸化,拮抗TGF-β1对细胞生长的抑制效应[15]。p38MAPK在机体炎症刺激下被激活,与上游因子TGF-β1相互作用,增强TGF-β1活性,TGF-β1可使p38 MAPK自磷酸化并结合下游纤维连接蛋白,进而上调纤维连接蛋白表达,加重纤维化程度[16]。

4 结论

五灵胶囊联合TAF可调节TGF-β/Smad信号通路,有效改善CHB患者肝功能及肝纤维化,抑制HBV复制,促进HBeAg转阴。