微生物检测技术在生活饮用水检验中的应用效果研究

高 敏，周伟伟

（阳谷县疾病预防控制中心，山东聊城 252300）

生活饮用水是指供人生活的饮水和用水。生活饮用水在经过净化处理后微生物含量及数量已明显降低，但生活中潜在的水源污染、管网污染、二次供水污染等仍可能会导致生活饮用水中的出现致病微生物或有毒有害物质，从而使生活饮用水卫生质量不合格[1]。采用微生物检测技术对生活饮用水中相关微生物指标进行检测，能够帮助人们判断生活饮用水的卫生质量是否符合国家制定的相关标准。一般情况下，生活饮用水中的常见的致病微生物有肠道致病菌、病毒、水性致病原虫和蠕虫等，其中菌落总数和肠道菌群（如总大肠菌群、耐热大肠杆菌）等是检测的重点。基于此，本文分析了微生物检测技术在生活饮用水检验中的应用效果，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 样品来源

生活饮用水样品来源于2020 年1 月至2022 年1 月送检的集中供水共520 份，包含末梢水132 份（25.38%）、二次供水365 份（70.19%），直饮水23 份（4.42%）；丰水期样品260 份（50.00%），枯水期样品260份（50.00%）。所有水样品储存均符合相关要求，无污染、渗漏状况。

1.2 检测方法

检测依据为《生活饮用水标准检验方法 水样的采集与保存》（GB/T 5750.2—2006）、《生活饮用水标准检验方法 微生物指标》（GB/T 5750.12—2006）。

（1）菌落总数检测。采用平板计数法进行菌落总数检测。吸取待测水样1 mL，注入灭菌平皿中，倾注培养基，混匀水样和培养基。将培养基放在培养箱内培养48 h，之后通过生物显微镜（B203 生物显微镜，重庆市奥特光学仪器有限责任公司）对水样中的菌落总数进行计数。

（2）总大肠菌群检测。采用多管发酵法进行总大肠菌群检测，使用实验室制备的3 倍浓缩乳糖蛋白胨培养液培养24 h，培养温度37 ℃，观察产酸产气情况。出现产酸产气视为阳性管培养物，需要进行进一步操作，即接种在伊红美蓝培养基上，观察菌落状况，并进行革兰氏染色和镜检。

（3）耐热大肠菌群检测。采用多管发酵法进行耐热大肠菌群检测，先进行初步发酵试验，采用3 倍浓缩乳糖蛋白胨培养液于37 ℃条件下培养24 h。观察产酸产气情况，将出现产酸产气的发酵管中的菌落分别接种于伊红美蓝培养基，于44 ～45 ℃条件下培养24 h。观察再次培养后发酵管的产酸产气情况，选出产酸产气的发酵管的菌落，接种于乳糖蛋白胨培养液中，置于37 ℃条件中培养24 h，再进行镜检。

（4）大肠埃希氏菌检测。采用多管发酵法进行检测，对总大肠菌群初步发酵试验中出现产酸产气的阳性管进行检测，接种后于45 ℃条件下培养24 h，通过紫外灯照射观察有无蓝色荧光，若有则表明存在大肠埃希氏菌，则应计算阳性管数。

1.3 观察指标及评定标准

（1）观察指标。观察不同来源水样品的微生物检测结果以及丰水期、枯水期水样品的微生物检测结果，包括菌落总数、肠道菌群。

（2）评定标准。参照《生活饮用水卫生标准》（GB 5749—2022）进行评定。菌落总数≤100 CFU·mL-1判定为合格；肠道菌群（总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌）的合格标准为每100 mL 中最大可能数（MPN）不得检出。

1.4 统计学分析

采用SPSS 25.0 软件对相关数据进行统计学分析，计数资料采用χ2检验，P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 不同来源水样品的微生物检测结果比较

末梢水、二次供水、直饮水的菌落总数结果差异有统计学意义（P＜0.05），其中直饮水的菌落总数检测合格率最低，为60.87%。末梢水、二次供水、直饮水的肠道菌群（总大肠菌群、耐热大肠杆菌、大肠埃希氏菌）合格率差异不显著（P＞0.05），见表1。

表1 不同来源水样品的微生物检测结果比较表[n（%）]

2.2 丰水期、枯水期水样品的微生物检测结果比较

丰水期水样品的菌落总数合格率低于枯水期（P＜0.05），丰水期的肠道菌群检测合格率与枯水期差异不明显（P＞0.05），见表2。

表2 丰水期、枯水期水样品的微生物检测结果比较[n（%）]

3 讨论

水中常见的微生物有细菌、病毒、真菌、噬菌体、原生动物等，大多数需要处理后才能作为生活饮用水[2]。根据现行的《生活饮用水卫生标准》（GB 5749—2022），生活饮用水应不含有病原微生物和寄生虫卵。然而受环境污染、水体滞留变质、回流污染等各种因素的影响，近年来水污染问题突出，若生活饮用水中的微生物超标，则可能会造成水源性传染性疾病的暴发流行，对人们的健康及生命安全构成威胁[3]。因此，需要对生活饮用水进行检验，并将检测结果作为判断水质卫生状况的依据。

微生物检测技术是检验生活饮用水的常用方法，检测项目主要包括菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群等。微生物检测技术检测生活饮用水的步骤包括采集水样、实验室检验、结果分析，其中采集水样主要是对生活饮用水进行采集，如末梢水、二次供水、直饮水等，在采集水样后需要在4 h 内完成检验[4]。实验室检验应根据待测项目选择适宜的检验方法，如采用多管发酵法检测总大肠菌群、耐热大肠菌群，采用平皿技术法检验菌落总数等。在实际应用中，需要检验人员根据检测需求灵活选择微生物检测技术，确保检验结果的准确性。

本研究主要对520 份水样进行微生物检验，末梢水、二次供水、直饮水的菌落总数检测结果差异有统计学意义（P＜0.05），其中直饮水的菌落总数检测合格率最低，为60.87%。可能是因为末梢水、二次供水是城市集中供水，消毒设施、制度管理、供水管道设施相对完善，卫生状况较好，而直饮水主要来源于农村中小学，受设备简陋、工程建设标准较低、消毒设施较为落后、消毒工艺不完善、缺乏完善的管理制度等因素影响，导致水质卫生状况较差，菌落总数合格率偏低。总大肠菌群、耐热大肠菌群、大肠埃希氏菌等肠道菌群可以反映粪便污染情况，水质中存在大量大肠杆菌容易导致肠道传染性疾病暴发流行[5]。本次检测结果表明，末梢水、二次供水、直饮水的肠道菌群合格率差异不明显（P＞0.05），表明末梢水、二次供水、直饮水均未出现粪便污染的情况。丰水期水样品的菌落总数合格率低于枯水期（P＜0.05），丰水期的肠道菌群合格率与枯水期差异不明显（P＞0.05），提示丰水期的水质稍差，而枯水期的水质较好。分析原因可能是丰水期一般在5—10 月，这一时段气温高、水量大且不稳定、水中杂质多、水流速较快使水中的杂质难以沉淀，而且微生物在此阶段也大量繁殖，导致丰水期的微生物检出率较高，水质较差；而枯水期主要出现在少雨或无雨的季节，水流少、流速缓慢、水中杂质容易沉淀，水质相对较好[6]。

4 结论

综上所述，使用微生物检测技术检验生活饮用水中菌落总数、肠道菌群，能够帮助相关部门了解不同来源（末梢水、二次供水、直饮水）及丰水期、枯水期的水样品中微生物分布状况，对于判定生活饮用水质是否合格极为关键，具有较高的应用价值。