几种市售野生食用菌中3 种活性物质含量的测定*

曹燕妮，游金坤，邓雅元，代秋琼，孙达锋，**

（1.云南省食用菌产业发展研究院，云南 昆明 650221；2.中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所，云南 昆明 650221；3.云南云菌科技（集团）有限公司，云南 昆明 650221）

食用菌种类繁多，富含蛋白质、膳食纤维、维生素、矿物质等营养物质[1]，具有很高的营养价值。其高蛋白、低脂肪、低热量的特性，使其成为理想的功能性食品[2]。此外，食用菌含有多糖、多酚、萜类、黄酮类、生物碱、多肽、活性蛋白、腺苷等多种具有生理功能的活性成分[3-7]，具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、免疫调节、降血脂、抗炎、降血糖等药理活性[8]。

研究发现，食用菌多糖通过激活免疫细胞，对免疫系统发挥调节作用，具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化和突出的降血糖活性，可用于降血压、降血脂和糖尿病的预防[9-10]。食用菌中的萜类物质多为二萜和三萜，少数为倍半萜[8]，萜类物质可通过减少炎症介质的产生来发挥抗炎作用，具有抗氧化、抗肿瘤、抑菌、降血糖、降血脂、神经保护等功效[11]。多数食用菌中都含有腺苷，可改善血液微循环、调节免疫功能、提高血液供氧能力、抑制血小板凝集、降低胆固醇等[7]。鉴于多糖、三萜和腺苷3 种活性物质对人体具有显著的药用功效，试验选取11 种市售野生食用菌，测定其3 种活性物质的含量，探讨不同种类食用菌之间3 种活性物质的差异，对于深入研究食用菌功效成分和产品开发具有重要意义。

1 材料与试剂

1.1 试验材料

11 种野生食用菌子实体：香肉齿菌（Sarcodon aspratus）、松口蘑（Tricholoma matsutake）、变绿红菇（Russula virescens）、玫黄黄肉牛肝菌（Butyriboletus roseoflavus）、多汁乳菇（Lactifluus volemus）、白牛肝菌（Boletus bainiugan）、皱盖牛肝菌（Rugiboletus extremiorientalis）、真根蚁巢伞（Termitomyces eurhizus）、兰茂牛肝菌（Lanmaoa asiatica）、干巴糙孢革菌（Thelephora ganbajun）、 梭柄松苞菇（Catathelasma ventricosum），均购于昆明市场。子实体经干燥、粉碎、过筛后备用。

主要试剂：葡萄糖标准溶液（100 μg·mL-1），北京北方伟业计量技术研究院；齐墩果酸（纯度98.1%），上海麦克林生化科技股份有限公司；腺苷（纯度99.7%），中国食品药品检定研究院；甲醇（色谱纯），上海安谱实验科技股份有限公司；硫酸、无水乙醇、甲醇、高氯酸、冰醋酸、5%苯酚、5%香草醛-冰醋酸等试剂均为分析纯。

1.2 仪器与设备

紫外可见分光光度计，德国耶拿分析仪器股份有限公司；U3000 高效液相色谱仪，赛默飞世尔科技（中国） 有限公司；T-214 型电子天平，美国丹佛仪器公司；电热恒温水浴锅，天津市泰斯特仪器有限公司；超声波清洗机，宁波新芝生物科技股份有限公司。

2 试验方法

2.1 粗多糖含量的测定

2.1.1 标准曲线制备

准确吸取葡萄糖标准溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，置于10 mL 具塞试管中，用蒸馏水补液至1.0 mL，葡萄糖质量依次为即0、20、40、60、80、100 μg。快速向试样中加入5%苯酚溶液1.0 mL和硫酸5.0 mL，静置10 min 后涡旋混匀。试管放在30 ℃水浴中反应20 min 后，在490 nm 处测定吸光度。以葡萄糖质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

2.1.2 供试样品制备

称取样品0.5 g 置于50 mL 离心管内，加入5 mL水浸湿样品，然后缓慢加入20 mL 无水乙醇，涡旋1 min 后超声提取30 min。提取结束后4 000 r·min-1离心10 min 弃上清液，不溶物用10 mL 80%乙醇洗涤，4 000 r·min-1离心10 min，弃上清。用蒸馏水将不溶物转入250 mL 圆底烧瓶后，加入50 mL 蒸馏水，在100 ℃水浴中冷凝回流提取2 h。冷却后过滤，将滤液转至100 mL 容量瓶中并定容。同时做空白试验。取提取样品溶液0.2 mL 于10 mL 具塞试管中，按照标准曲线制备方法同法操作，测定吸光度。

2.1.3 粗多糖含量计算

样品中粗多糖含量（X1，g·100-1·g-1） 的计算公式为：

式中：m1为标准曲线计算得到的样品测定液中含糖量（μg）；V1为样品的定容体积（mL）； m2为样品质量（g）；V2为比色时移取样品测定液的体积（mL）；0.9 为葡萄糖换成葡聚糖的校正系数。

2.2 总三萜含量的测定

2.2.1 标准曲线制备

准确称取于105 ℃干燥至恒重的齐墩果酸标品10 mg（以实际称样量折算），用甲醇（分析纯） 溶解并定容至100 mL，得到质量浓度为100 μg·mL-1的齐墩果酸标准液。取上述溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，置于10 mL 具塞试管中，即齐墩果酸质量依次为0、20、40、60、80、100 μg。在90 ℃烘箱中挥干。待试管冷却至室温后，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL 和高氯酸0.8 mL，涡旋混匀后，在70 ℃水浴中保温显色15 min。取出后立即置于冰水浴中冷却5 min，再加入5.0 mL 冰醋酸，涡旋混匀后在546 nm 处测定吸光度。以齐墩果酸质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

2.2.2 供试样品制备

称取样品0.1 g 置于50 mL 具塞离心管内。加入10 mL 无水乙醇，涡旋混匀后超声提取60 min，提取结束后7 000 r·min-1离心10 min。同时做空白试验。移取样品0.4 mL 上清液于10 mL 具塞试管中，按照标准曲线制备方法同法操作，测定吸光度。

2.2.3 样品中总三萜含量计算

样品中总三萜含量（X2，%） 计算公式为：

式中：m1为标准曲线计算得到的样品测定液中总三萜的含量（μg）；V1为提取时加入无水乙醇的体积（mL）；m2为样品质量（g）；V2为比色时移取样品测定液的体积（mL）。

2.3 腺苷含量的测定

2.3.1 标准曲线制备

准确称取准确称取腺苷标品10 mg（以实际称样量折算），用流动相溶解并定容至100 mL，得到质量浓度为100 μg·mL 的腺苷标准溶液。移取标准溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL 置于10 mL 容量瓶中，用水定容摇匀，得到标准系列浓度为1.00、2.00、5.00、10.0、20.0、50.0 μg·mL。以腺苷质量浓度为横坐标，相应峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

2.3.2 供试样品制备

准确称取0.5 g 样品于100 mL 容量瓶中，加水约80 mL，混匀后超声提取3 h，冷却至室温后定容摇匀。取适量样液离心后，上清液过0.45 μm 水相滤膜作为待测液。

2.3.3 色谱条件

选用AcclaimTM120 C18 色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈5%-水95%；流速为1.0 mL·min-1；柱温为35 ℃；检测波长为260 nm；进样量为10 μL。

2.3.4 样品中腺苷含量计算

样品中腺苷含量（X3，mg·kg-1） 计算公式为：

式中：m1为标准曲线计算得到的样品测定液中腺苷的含量（μg·mL-1）；V1为样品的定容体积（mL）；m2为样品质量（g）。

3 结果与分析

3.1 线性关系

3 种活性物质的线性关系见表1。

表1 线性关系Tab.1 Linear relationship

如表1 所示，3 种活性物质的相关系数均大于0.999，在相应的线性范围内线性关系良好。

3.2 三种活性物质测定结果

11 种食用菌中3 种活性物质的测定结果见表2。

表2 三种活性物质含量Tab.2 The content of three active substances

由表2 可知，11 种野生食用菌中粗多糖含量为1.44～5.27 g·100-1·g-1，平均含量为3.04 g·100-1·g-1，变异系数为34%。总三萜含量为0.75%～1.60%，平均含量1.09%，变异系数为26%。腺苷含量为657～334 9 mg·kg-1，平均含量为1 629 mg·kg-1，变异系数为46%。11 种食用菌粗多糖含量统计结果见图1。

图1 粗多糖含量Fig.1 The content of crude polysaccharide

如图1 所示，白牛肝菌、松口蘑、真根蚁巢伞、皱盖牛肝菌、梭柄松苞菇的粗多糖含量高于平均值。11 种野生食用菌中，白牛肝菌粗多糖含量最高，多汁乳菇含量最低，二者相差3.7 倍。总三萜含量统计结果见图2。

图2 总三萜含量Fig.2 The content of total triterpenoids

如图2 所示，香肉齿菌、皱盖牛肝菌、梭柄松苞菇、松口蘑、干巴糙孢革菌的总三萜含量高于平均值。11 中野生食用菌中，香肉齿菌总三萜含量最高，真根蚁巢伞含量最低，二者相差2.1 倍。腺苷含量统计结果见图3。

图3 腺苷含量Fig.3 The content of adenosine

如图3 所示，白牛肝菌、皱盖牛肝菌、兰茂牛肝菌、真根蚁巢伞、玫黄黄肉牛肝菌的总三萜含量高于平均值。11 种野生食用菌中，白牛肝菌腺苷含量最高，干巴糙孢革菌含量最低，二者相差5.1 倍。

4 讨论与结论

食用菌丰富的营养成分和活性物质，使其具有很高的营养价值和药用价值。近年来，食用菌多糖抗肿瘤[12]、降血糖[13]、抗炎[14]的机制研究和萜类物质生物活性研究[15-17]等颇受关注，部分以食用菌为原材料的药品和保健品已上市[18-19]。通过国家药品监督管理局官网查询，目前获得国家批准并已上市的多糖药品中，以食用菌为原材料的主要有香菇（Lentinula edodes） 多糖、紫芝（Ganoderma sinense） 多糖、猪苓（Polyporus umbellatus） 多糖、茯苓（Wolfiporia cocos） 多糖、“灵孢多糖”[20]，常用剂型为胶囊、片剂、注射液、口服液等。以食用菌为原材料获批的保健食品中，在功效成分和标志性成分方面，以多糖、三萜、腺苷居多[19]。

本试验中对11 种市售野生食用菌子实体中粗多糖、总三萜、腺苷3 种活性物质含量进行测定，发现白牛肝菌的粗多糖、腺苷含量均为最高，但总三萜含量低于平均值；香肉齿菌总三萜含量最高，但粗多糖、腺苷含量均低于平均值；皱盖牛肝菌的粗多糖、总三萜、腺苷的含量均高于平均值，且总三萜和腺苷含量仅次于含量最高的香肉齿菌和白牛肝菌；变绿红菇和多汁乳菇的3 种活性物质含量均低于平均值；3 种活性物质的变异系数由高到低为腺苷、粗多糖、总三萜，说明食用菌种类对腺苷的影响最大，其次是粗多糖，对总三萜含量的影响最小。通过对11 种市售野生食用菌之间3 种活性物质含量的差异比较，为食用菌活性物质的进一步研究、产品开发和综合利用提供参考。