卵巢肿瘤患者超声造影参数与淋巴结转移及血管生成的相关性分析

曹春宁，翟 虹，米娜娃尔·吾提库，周 静，纪甜甜

(新疆医科大学附属中医医院腹部超声科,新疆 乌鲁木齐 830000)

卵巢肿瘤多于20～50岁发病,早期无明显症状,随肿瘤增大伴有腹胀、下坠等轻微症状,部分患者因下腹明显包块就医,此时肿瘤较大,多属晚期。晚期卵巢肿瘤是威胁妇女生命最严重的恶性肿瘤之一,常伴腹水、食欲减退、消瘦等症状,5 a生存率为20%～30%[1-2]。有研究发现,淋巴结转移与卵巢肿瘤疾病进展密切相关,且淋巴结转移主要集中在主动脉区及盆骨,出现淋巴结转移意味着患者病情较为严重[3]。因此,有效评估淋巴结转移是诊治卵巢肿瘤的关键。卵巢肿瘤的生长、转移主要依赖肿瘤新生血管的生成,有效评估卵巢肿瘤组织中血管生成对延缓卵巢肿瘤进展、评估治疗效果及预后具有重要价值[4]。微血管密度(microvascular density,MVD)计数是评估肿瘤组织新生血管生成的“金标准”,但MVD计数无法在术前对肿瘤组织血管生成进行评估,存在一定局限性[5]。影像学技术的发展使得早期卵巢肿瘤检出率显著提高,其中超声造影较常规超声检查具有更高的分辨率、敏感性及特异性,可增强实质性器官的血流多普勒信号,继而反映病变组织的血流灌注情况[6]。本研究通过分析卵巢肿瘤超声参数与淋巴结转移及血管生成的相关性,使医生在术前无法获得肿瘤组织标本的情况下较为准确地获得肿瘤组织血流及微血管信息,以期为评估卵巢肿瘤性质、治疗效果及预后提供参考依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2020年1月至2022年8月于新疆医科大学附属中医医院行手术切除治疗的110例卵巢肿瘤患者为研究对象。病例纳入标准:(1)经临床病理学检查确诊为原发性卵巢肿瘤;(2)年龄≥18岁;(3)首次发病;(4)具有手术指征且手术成功;(5)患者意识清晰、沟通交流能力正常且愿意配合研究;(6)签署关于本研究的知情同意书。排除标准:(1)入院前接受过新辅助化疗、相关手术治疗;(2)合并心肝肾等重要脏器器质性病变、生殖系统异常或代谢性疾病;(3)患有焦虑症、抑郁症或双相情感障碍等精神疾病;(4)处于妊娠期或哺乳期。本研究已获医院医学伦理委员会审核批准。

1.2 方法

1.2.1 超声造影检查

所有患者入组后接受超声造影检查。将精准E9三维彩色超声诊断仪(美国GE公司)机械指数设定为0.11、探头频率设置为9 MHz,对入组患者进行常规超声检查,确定卵巢肿瘤位置、形态等信息后将超声诊断仪切换为超声造影模式,经肘静脉团注2 mL SonoVue超声造影剂(意大利Bracco公司)后,注入5 mL生理盐水冲管,冲管后计时并观察超声造影剂灌注、回声强度情况,记录基础强度、峰值强度、达峰时间并计算增强强度。增强强度为基础强度与峰值强度之差。

1.2.2 免疫组织化学染色法检测卵巢肿瘤组织中MVD

术后保留患者卵巢肿瘤病灶组织并制备成厚约4 μm的冰冻切片,65 ℃烤箱中烤片1 h,依次常规脱蜡、抗原高压热修复,滴加阻断剂、一抗CD34(滴度1100)、辣根过氧化物酶标记的二抗(滴度12 000),室温下孵育30 min,二氨基联苯胺显色,苏木精复染、梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片固定,然后将切片置于显微镜下观察。CD34阳性表达判定标准:卵巢肿瘤组织切片中血管内皮细胞质内有棕黄色颗粒。参考Weidner校正方法[7]计数MVD:在低倍镜(×100)下观察切片,选择3个CD34阳性表达最多的血管高密度区,然后在高倍镜(×400)下计数3个血管高密度区中被染成棕黄色的微血管数量,取均值。

1.2.3 淋巴结转移情况

患者出院后随访1 a,记录患者是否出现浅表淋巴结肿大、下肢水肿、大量腹水或腹股沟局部明显肿块等淋巴结转移症状,并经临床穿刺病理学确诊。根据是否发生淋巴结转移将110例卵巢肿瘤患者分为转移组(n=59)和未转移组(n=51)。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 转移组与未转移组患者超声造影参数比较

110例卵巢肿瘤患者中,发生淋巴结转移59例,未发生淋巴结转移51例。转移组患者超声造影参数达峰时间显著长于未转移组,差异有统计学意义(P<0.05)。转移组与未转移组患者的增强强度比较差异无统计学意义(P>0.05)。结果见表1。

表1 转移组与未转移组患者超声造影参数比较Tab.1 Comparison of contrast-enhanced ultrasound parameters of patients between the metastatic group and the non-metastatic group

2.2 卵巢肿瘤患者超声造影参数与淋巴结转移的相关性

Spearman相关性分析结果显示,卵巢肿瘤患者超声造影参数中达峰时间与淋巴结转移呈正相关(r=0.580,P<0.05),增强强度与淋巴结转移无相关性(r=0.002,P>0.05)。

2.3 卵巢肿瘤患者超声造影参数与MVD的相关性

110例卵巢肿瘤患者超声造影参数中的达峰时间、增强强度和MVD分别为(27.29±7.46)s、(80.09±8.26)dB、25.70±5.14。Pearson相关性分析结果显示,卵巢肿瘤患者超声造影参数中达峰时间、增强强度与MVD均呈正相关(r=0.491、0.456,P<0.05);见图1。

图1 卵巢肿瘤患者超声造影参数与MVD的相关性Fig.1 Correlation between contrast-enhanced ultrasound parameters and MVD in patients with ovarian tumor

3 讨论

早期卵巢肿瘤5 a生存率达90%以上,但早期卵巢肿瘤仅表现出消化不良、月经紊乱等轻微症状,因缺乏显著临床症状而不易被发现,且常规临床筛查效果有限,约70%的卵巢肿瘤患者确诊时疾病已进展至晚期,治疗效果、预后情况均不理想[8-9]。卵巢肿瘤早期即可发生淋巴结转移,有研究发现,淋巴结转移是导致卵巢肿瘤患者死亡的独立危险因素,有效评估淋巴结转移对卵巢肿瘤临床分期、构建治疗方案、预后评估具有重要参考价值[10]。卵巢肿瘤细胞生长、浸润均离不开新生血管的生成,肿瘤新生血管血流丰富,在为肿瘤细胞生长提供所需养分的同时可与肿瘤细胞直接接触而促进肿瘤细胞转移,因此,明确卵巢肿瘤组织内血管生成情况有助于评估临床治疗效果。

超声造影是近年来兴起的影像学检查方式,可显示病灶内血流灌注情况,通过动态记录血流变化还可评估新生血管的特征。本研究结果显示,转移组患者超声造影参数中的达峰时间显著长于未转移组,达峰时间主要反映血流阻力,达峰时间越长意味着血流阻力越大,转移组达峰时间较长说明淋巴结转移时病灶组织发生液化和纤维化。正常情况下淋巴结血供较为缺乏,卵巢肿瘤发生淋巴结转移后血供充足,但常规超声检查只能依据病灶回声进行诊断,且易受肠道气体的影响,加之腹壁脂肪较少,检查结果存在较大偏差;而超声造影可通过定量参数分析卵巢肿瘤血流动态变化,在临床中具有较高的应用价值[11-12]。此外,本研究中Spearman相关性分析结果显示,达峰时间与卵巢肿瘤患者淋巴结转移呈正相关,提示超声造影检查时达峰时间越长,卵巢肿瘤患者发生淋巴结转移的概率越大,达峰时间对临床医师制定卵巢肿瘤患者治疗方案具有重要指导意义。MITAMURA等[13]对接受放化疗后的卵巢肿瘤淋巴结转移患者进行超声造影检查,结果发现,有效组患者的达峰时间较无效组短。结合本研究结果推测,达峰时间越长,卵巢肿瘤患者病情缓解程度越弱,甚至可能有加重的趋势,这可能与淋巴结转移的发生有关,后续临床研究可进一步探索超声造影参数与卵巢肿瘤患者治疗效果的相关性。

本研究中Pearson相关性分析结果显示,超声造影参数中的达峰时间、增强强度与MVD均呈正相关,即卵巢肿瘤患者达峰时间越长、增强强度越强,肿瘤血管生成概率越高,进展为恶性肿瘤的概率越大。新生血管网络是供应肿瘤细胞不断增殖、代谢所需营养的重要途径,其可促进肿瘤细胞增殖后不断向宿主输出肿瘤细胞以满足肿瘤细胞自身的转移,继而加速卵巢肿瘤进展,MVD是目前评估肿瘤新生血管生成的“金标准”,但临床工作中多采用免疫组织化学法检测手术切除的肿瘤组织标本中MVD,因此,寻找一种快捷、在活体上可重复检测的用以评估肿瘤血管生成的方法尤为关键[14-15]。近年来超声影像技术飞速发展,超声造影在造影前团注的造影剂自由通过微循环后可较好地显示肿瘤内微循环分布情况,通过造影剂在肿瘤组织内的流量、流速随时间的变化定量分析肿瘤组织新生血管的生成情况。本研究中Pearson相关性分析结果显示,达峰时间、增强强度与卵巢肿瘤组织中MVD均呈正相关,即卵巢肿瘤患者超声造影检查中达峰时间越长、增强强度越强,肿瘤血管生成概率越高,恶性肿瘤概率越大,超声造影中达峰时间、增强强度可为术前评估卵巢肿瘤组织血管是否生成提供参考依据。从机制上分析,病灶组织新生血管越多,肿瘤血管床的微泡灌注量越大,肿瘤细胞过度侵袭的可能性越大,病灶组织纤维化和液化越严重,达峰时间更长,基础强度与峰值强度差值越大[16-17]。

4 结论

卵巢肿瘤超声造影参数中达峰时间与淋巴结转移呈正相关,达峰时间、增强强度与MVD呈正相关。本研究可为卵巢肿瘤的诊治提供参考依据,但因选取样本量有限,相关结论仍需大样本多中心临床试验进一步佐证。