陶玉珍,刘燕霏,杨建德
(天津农学院 动物科学与动物医学学院 天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室,天津 300392)
猫上呼吸道疾病(FURTD)是猫常见的一种疾病,有多种病原,其中最常见的是猫疱疹病毒(FHV)和猫杯状病毒(FCV),它们通常都会引起患猫咳嗽、打喷嚏、流涎等,其中FCV 最易导致患猫口腔溃疡,严重危害猫的健康。FHV 又被称为猫鼻支、猫鼻气管炎病毒,主要侵害幼猫,发病率可达100%,死亡率达50%[1],且患猫康复后也会继续携带此病毒,在一定条件下病毒活化,导致猫被反复感染。猫是该病毒的自然宿主,被感染后出现发热、角膜结膜炎、浆液性眼鼻分泌物,甚至黏膜表面糜烂溃疡等症状[2]。FHV 主要引起急性上呼吸道疾病——猫传染性鼻气管炎,目前发现只有一个血清型,不仅能感染家猫,还能感染其他一些猫科动物(虎、豹等)[1]。一般情况下,FHV 是通过呼吸道进入宿主体内,在上呼吸道黏膜生长复制,导致宿主发病。牛江婷等[1]通过参考疱疹病毒科其他成员感染机制的研究,认为FHV 与宿主细胞融合并进行复制是一个由病毒囊膜糖蛋白调控的复杂级联反应过程,其中gB、gH、gD 等糖蛋白发挥着极重要的作用。FCV 又被称为猫卡里西病毒、猫嵌杯病毒,主要引起呼吸系统的疾病,导致猫传染性鼻结膜炎,可感染猫和其他珍贵的野生动物(如虎、狮子等)[3],对其健康造成严重威胁。目前,发现FCV 仅有一个血清型,多个基因型,猫被感染后会出现口腔溃疡、眼鼻分泌物增多、鼻塞等症状[4],据报道,高致病性FCV(VS-FCV)病死率高达67%,即使已经免疫的猫也很容易被感染,被感染后会出现全身性皮肤溃疡、黄疸、肝炎等症状[5],但高致病性FCV的致病机理目前尚未研究清楚。FCV 在国内外都广泛流行,目前临床上仍没有特效药,疫苗是最重要的预防手段,虽然FCV 仅有一种血清型,但抗原很容易发生变异,因此疫苗只对同源病毒有较好的保护力,无法有效地预防病毒传播,但对于数量较少的群体效果较好。目前各国市场上应用最广的是单价苗,但近年来有新型二价苗被投入使用。FCV 在56 ℃下30 min 左右便可被灭活,对氯仿等有机溶剂有一定的抵抗力,但在酸性或者碱性条件下不稳定,可利用此性质对环境进行消毒,同时要保证饲养环境干净通风,饲养密度不能过大,有研究表明动物绝育后可降低59%的感染率。本研究通过对郑州市某宠物医院2020 年2 月—2021 年7 月猫感染FHV 和FCV 的病例进行调查,明确与FHV 和FCV 感染相关的可能因素,为其防控提供参考依据。
1.1.1 试验动物
试验动物为郑州市某宠物医院2020 年2 月—2021 年7 月被FHV 和FCV 感染的患猫,其中被FHV 感染的患猫有72 只,被FCV 感染的患猫有120 只。
1.1.2 检测试剂盒
猫呼吸道病原体核酸五联检测试剂盒(由西安佰奥莱博生物科技有限公司生产)。
1.1.3 试验仪器
基灵InCycleTM全自动核酸检测系统(由上海基灵生物科技有限公司生产)。
1.2.1 采样
使用一次性棉签拭子取待检猫眼、鼻、口腔分泌物后加入到1 mL 样本保存液中,将棉签杆折断,拧紧盖子充分混匀,以4 000~8 000 r/min 的速度离心1 min,使用0.2 mL 的一次性滴管取上清液至整管颈长,即为0.2 mL 样本。
1.2.2 核酸检验
将试剂卡第一层膜撕下,样本处理后,用滴管将0.2 mL 样本加入到提取舱中,点击出舱按钮,将试剂卡放到仪器卡槽中,向右扳动卡扣,固定试剂卡,点击入舱。输入宠物信息,在仪器左侧刷RFID 卡,录入试剂信息,开始试验。结束后,点击出舱按钮,向左扳动卡扣,取出试剂卡并将试剂盒附带的黄色贴膜贴在试剂卡上,以防止污染。
1.2.3 结果判定
若Ct 值≤36 且有特定的S 型扩增曲线时,检测结果为阳性;若Ct 值≥39 或无Ct 值时,检测结果为阴性;若Ct 值为36~39,建议重复试验,如结果仍小于39,曲线有明显峰值,则判断样品为阳性,否则为阴性。
1.2.4 数据统计
利用Excel 2016 软件对数据进行统计分析。
郑州市某宠物医院2020 年2 月—2021 年7月共有192 个FHV 和FCV 阳性病例,其中被FHV感染的患猫有72 只,被FCV 感染的患猫有120只,FHV 和FCV 阳性病例分别占发病总数的37.5%和62.5%,FCV 的阳性率远高于FHV 的阳性率,两种疾病发病率的比例大约为1.67∶1.00。
FHV 和FCV 感染的患猫主要是中华田园猫、英国短毛猫、美国短毛猫、布偶猫、暹罗猫、加菲猫和其他杂交品种的猫。其中,对FHV 比较易感的是中华田园猫和英国短毛猫,分别占FHV 阳性病例总数的27.78%和22.22%,患病率最低的是暹罗猫和杂交品种的猫,都占4.17%。对FCV 比较易感的是布偶猫和中华田园猫,分别占FCV 阳性病例总数的26.67%和23.33%,患病率最低的是杂种猫,占2.50%,详见图1。
图1 FHV 和FCV 检出率与品种之间的关系
FHV 阳性病例主要集中在3 月龄以下和10岁以上,分别占FHV 阳性病例总数的41.67%和25.00%;FCV 阳性病例主要集中在3 月龄以下和3~6 月龄,分别占FCV 阳性病例总数的35.00%和25.00%;成年猫由于自身抵抗力较强,对两种病毒都不敏感,相比之下,患病率较低,详见图2。
图2 FHV 和FCV 检出率与年龄之间的关系
在72 个FHV 阳性病例中,有40 只公猫和32只母猫,分别占55.56%和44.44%;在120 个FCV阳性病例中,有69 只公猫和51 只母猫,分别占57.5%和42.5%;两种病毒感染都无明显的性别差异,雄性动物的发病率略高于雌性动物,详见图3。
图3 FHV 和FCV 检出率与性别之间的关系
动物在冬春季易感染FHV,发病率分别为36.11%和31.94%,在夏春季易感染FCV,发病率分别为33.33%和29.17%;FHV 和FCV 都在春季感染率较高,而秋季感染率较低,详见图4。
图4 FHV 和FCV 检出率与季节之间的关系
FHV 和FCV 是引起猫科动物上呼吸道疾病的常见病毒。在此次调查中共收集了郑州市某宠物医院2020 年2 月—2021 年7 月192 个阳性病例,其中FHV 阳性病例有72 例(37.5%),FCV 阳性病例有120 例(62.5%),FCV 的阳性率高于FHV的阳性率,两者比例约为1.67∶1.00。2020 年杨玥晗[6]调查了安徽省猫疱疹病毒Ⅰ型和猫杯状病毒的流行情况,发现FHV-1 感染率为45.5%,FCV感染率为71.5%,两者的感染比例约为1.00∶1.57,FCV 的感染率高于FHV-1,与本次调查结果一致。许楚楚等[7]对北京地区的患猫调查发现,FHV 和FCV 的感染率分别是26.3%和46.3%;NGUYEN等[8]对澳大利亚的患猫调查发现FCV 和FHV-1 的阳性率分别是16.0%和7.0%,FCV 的阳性率普遍高于FHV 的阳性率,与本次调查结果一致。这可能与疫苗的保护力和病毒结构有关[9],疫苗是目前预防病毒感染最有效的方法,而FCV 是一种小型RNA 病毒,它的衣壳蛋白进化率高导致核苷酸不断发生改变,因此,即使FCV 被认为只有一种血清型,传统疫苗仍无法保护动物免受突变体感染[10];而FHV 是结构稳定的DNA 病毒,因此,疫苗能够更好地预防FHV 感染。其次,携带FCV的猫会连续不断排毒,而携带FHV 的猫是间歇排毒,且病毒多潜伏在三叉神经[11],因此,临床上对FHV 检测和病毒分离比较困难,这可能也是FHV 检出率低于FCV 的原因之一。
本研究显示,中华田园猫和英国短毛猫FHV阳性率最高,分别为27.78%和22.22%,暹罗猫和杂交品种的猫患病率最低,都占4.17%;最易感FCV 的是布偶猫和中华田园猫,分别占26.67%和23.33%,患病率最低的是杂种猫。杨玥晗[6]对安徽省48 家宠物医院进行调查,发现外来品种患病率较高;NGUYEN 等[8]对澳大利亚的患猫调查发现家养短毛猫更易感FCV 和FHV,与本次调查结果不符。这可能与人们饲养宠物的品种倾向性有关,不同地区人们饲养动物品种喜好有所不同,对于纯种猫,主人可能更愿意花钱为其诊断治疗,且纯种猫对外界抵抗能力更差。FHV 易在冬季和春季感染动物,感染率分别为36.11%和31.94%;FCV易在夏季和春季感染动物,感染率分别为33.33%和29.17%。郑思艳等[12]通过对北京地区306 个病例进行调查,发现FHV 在10 月份检出率最高,而FCV 阳性病例在7、8 月份最多,与本次调查结果一致。这可能与病毒本身的特性有关,FHV有囊膜,对热敏感,而FCV 无囊膜,对外界温度不敏感[13]。两种病都在春季易发,可能与春季天气回暖,环境更适合病毒生存有关;同时,春季大多主人喜欢带宠物出门,动物有更多机会接触病原,增加感染几率。
本研究将来自郑州市某宠物医院的72 个FHV 阳性病例和120 个FCV 阳性病例分成7 个年龄段进行统计分析,发现3 月龄以下的猫最易感FHV,发病率为41.67%,其次是10 岁以上的猫,发病率为25.00%,3~5 岁的猫发病率最低,约为2.78%,与王吉等[14]研究结果一致。3 月龄以下和10 岁以上的猫FHV 感染率较高,原因可能是幼龄猫失去了母源抗体保护[15];很多老龄猫是感染耐过猫,会终身带毒,病毒潜伏在三叉神经,当动物受到应激后,病毒就会再次被激活并传播,而老年猫抵抗力较低,因此感染的可能性也比较大。3 月龄以下的猫对FCV 最易感,其次是3~6 月龄,发病率分别为35.00%和25.00%,3~5 岁的猫发病率最低,约为3.33%。李响[16]通过对吉林省多个城市的320 份样本进行采集检验,发现2~3 月龄的幼猫最易感,其次是4~5 月龄,与本次调查结果一致,可能是母源抗体缺失及FCV 的高度变异性[17]导致疫苗保护力降低。两种病毒的共同点都是幼猫易感,而3~5 岁的成年猫发病率最低,原因可能是幼猫本身抗病毒能力低,而大多数猫都是幼年时期从猫舍到达新的家庭,环境改变易使猫产生应激。幼猫断奶后失去母源抗体保护,若未及时免疫,便易受到病毒入侵,且危害较大。研究表明,幼猫受到母源抗体保护的时间一般不超过10~14 周,因此,最好在10 周左右进行免疫接种,并按要求完成免疫程序。而成年猫抗病毒能力强,大多已经进行过免疫接种,且对所生活的环境已经适应,故发病率较低。
调查发现,FCV 的检出率高于FHV。中华田园猫和英国短毛猫最易感FHV,布偶猫和中华田园猫最易感FCV。FHV 主要感染3 月龄以下和10岁以上的猫,FCV 主要感染3 月龄以下和3~6 月龄的猫,3~5 岁的成年猫发病率最低。两种病的发病率均与性别无关。猫疱疹病毒病在冬春季高发,猫杯状病毒病在春夏季频发。