微小RNA-122、HOMA-IR 水平的表达与妊娠期糖尿病及妊娠结局的关系

崔利娜 姜得悦 辛雅萍

（郑州大学第二附属医院内分泌科 河南郑州 450014）

妊娠期糖尿病（Gestational Diabetes Mellitus,GDM）作为妊娠期最常见的并发症之一，也是威胁母婴生命安全的常见原因之一，易导致孕妇早产、畸形，甚至流产、难产。近年来GDM 发病率呈上升趋势，给家庭和社会带来沉重负担。然而，除了一些研究表明妊娠期胰岛素抵抗可能引发GDM 外，其发病机制仍未明确，但多数学者认为胰岛素抵抗在GDM 的发生、发展中起着重要作用[1～2]。微小核糖核酸（miRNA）属于内源性非编码RNA，在自然界广泛存在于真核生物中。作为一类非编码微小RNA，miRNA 转录后其水平与许多疾病的病理生理过程密切相关。近些年，多项研究均发现，miRNA 与多种代谢性疾病如肥胖、多囊卵巢综合征（Polycystic Ovarian Syndrome,PCOS）及糖尿病的发生、发展有密切关系[3～5]。进一步研究发现，miRNA 是胰岛素抵抗中必不可少的生物调节因子之一，许多miRNA已被证明是GDM 的有效诊断标志物。有研究表明miR-330-3p 在GDM 中表达上调，并与患者的胰岛素抵抗有关，也有其他研究进一步探讨了miRNA在GDM 中的作用。还有学者发现miR-494 可保护胰岛β 细胞功能，通过靶向磷酸酶基因（PTEN）调控GDM，miR-409-5p 已被证明在多种肿瘤中作为癌基因发挥作用。有研究发现miR-409-5p 在乳腺癌中表达上调，抑制其表达可显著抑制乳腺癌细胞的生长，也表明miR-409-5p 与糖尿病的发生有关。同时有研究证实miR-122 能够在肝脏中高水平表达[6]，而肝脏又是糖脂代谢的核心，也是胰岛素抵抗的关键位置。目前临床已经有关于miR-122 与胰岛素抵抗的报道，但尚存争议。本研究旨在探讨miR-122 表达水平、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）与妊娠糖尿病及妊娠结局的关系，并分析miR-122 表达水平与HOMA-IR 的相关性。现报道如下：

1 材料与方法

1.1 一般资料 选取2019 年4 月至2020 年10 月在我院诊治的孕24～32 周GDM 孕妇52 例作为观察组，另选取同期在我院产检且口服葡萄糖耐量试验（Oral Glucose Tolerance Test,OGTT）正常的孕24～32 周孕妇45 例作为对照组。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。本研究经医院医学伦理委员会审批（伦理号：2018012）。见表1。

表1 两组一般资料比较（±s）

表1 两组一般资料比较（±s）

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1.2 入组标准

1.2.1 纳入标准 符合《妊娠合并糖尿病诊治指南（2014）》中GDM 诊断标准[7]，妊娠24～28 周行75 g OGTT 检查，空腹、口服葡萄糖后1 h、口服葡萄糖后2 h 的血糖阈值分别为5.1 mmol/L、10.0 mmol/L、8.5 mmol/L，任何一个时间点血糖值达到或超过上述阈值即诊断为GDM；年龄20～36 岁；孕24～35 周；单胎妊娠；自然受孕；签署知情同意书。

1.2.2 排除标准 妊娠前既有糖尿病者；入组前接受降糖药物治疗者；接受药物治疗或辅助生殖技术（ART）后妊娠者；同时合并有妊娠高血压疾病、妊娠合并心脏病、先兆子痫等妊娠合并症者；双胎或多胎妊娠者；PCOS 者；合并有血液系统疾病、全身感染性疾病、自身免疫性疾病及内分泌系统其他疾病者；入组前2 周内有糖皮质激素使用史者；肝、肾等重要脏器功能不全者。

1.3 测定方法

1.3.1 糖代谢及HOMA-IR 测定 治疗前，抽取患者静脉血约5 ml，其中2 ml 离心分离血清，采用全自动生化分析仪（美国Beckman Coulter 公司，型号：AU5800）检测血清空腹血糖（Fasting Blood Glucos,FBG）、空腹血浆胰岛素（Insulin, INS） 水平，HOMA-IR=FBG×INS/22.5。

1.3.2 miR-122 表达水平测定[8]血清miR-122：剩余3 ml 血液样本进行核糖核酸（RNA）提取和纯化，所有操作按照miRcute miR-NA 提取分离试剂盒说明进行；胎盘组织中miR-122：分娩后将胎盘迅速用生理盐水反复冲洗干净，切除适当大小的胎盘组织块（约4 mm×4 mm×4 mm）经液氮速冻处理，冰箱-80℃保存，使用RNAiso Plus 试剂提取胎盘组织中总RNA。使用逆转录试剂盒（miRcute Plus miRNA First-Strand cDNA）将RNA 逆转录成cDNA，引物序列见表2。采用实时荧光定量PCR 仪检测miR-122表达水平，内容如下，反应体系：cDNA 4 μl，上、下游引物（10 μmol/L）各0.4 μl，SYBR Green Master Mix 10 μl，50×ROX Reference Dye 20.4 μl，H2O 4.8 μl。反应条件：95℃5 min，95℃30 s，94℃30 s，60℃20 s，共40 个循环。将每个cDNA 平均检测3 次，取平均值得循环阈值。采用2-△△CT法分析miR-122 的相对表达水平。

表2 引物序列

1.4 临床干预方案及控制标准 所有患者进行饮食、运动等干预，必要时给予胰岛素进行降血糖治疗。定期在院产前门诊进行产前检查及随访，门诊进行降低血糖相关干预，指导患者每天监测血糖水平，连续进行3 d 的血糖检测，空腹血糖（FBG）水平＜5.6mmol/L、餐后2 h 血糖＜6.7 mmol/L、糖化血红蛋白（HbA1c）≤6.5%，为患者血糖控制有效。

1.5 观察指标 （1）比较两组糖代谢指标水平、HOMA-IR 及血清和胎盘中miR-122 水平；（2）比较结局良好组和不良结局组上述指标；（3） 分析miR-122 水平与HOMA-IR 的相关性。

1.6 统计学分析 采用SPSS20.0 统计学软件分析处理数据，计量资料以（±s）表示，组间比较采用独立t检验；miR-122 水平与HOMA-IR 的相关性分析采用Pearson 相关分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组糖代谢指标及HOMA-IR 比较 观察组FBG、INS 水平及HOMA-IR 均高于对照组（P＜0.05）。见表3。

表3 两组糖代谢指标及HOMA-IR 比较（±s）

表3 两组糖代谢指标及HOMA-IR 比较（±s）

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2.2 两组血清及胎盘miR-122 水平比较 观察组血清及胎盘miR-122 水平均高于对照组（P＜0.05）。见表4、图1 和图2。

图1 两组患者血清miR-122 表达水平

图2 两组患者胎盘miR-122 表达水平

表4 两组血清及胎盘miR-122 水平比较（±s）

表4 两组血清及胎盘miR-122 水平比较（±s）

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2.3 不同妊娠结局GDM 患者miR-122 水平及HOMA-IR 比较 根据GDM 患者妊娠结局，将52例GDM 患者分为结局良好组34 例和不良结局组18 例，若出现流产、早产、巨大儿、死胎、死产、胎儿畸形、新生儿呼吸窘迫综合征及新生儿死亡等任一情况均归为不良结局组。结果显示，不良结局组HOMA-IR 及血清和胎盘miR-122 水平均高于结局良好组（P＜0.05）。见表5。

表5 不同妊娠结局GDM 患者miR-122 水平及HOMA-IR 比较（±s）

表5 不同妊娠结局GDM 患者miR-122 水平及HOMA-IR 比较（±s）

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2.4 miR-122 水平与HOMA-IR 的相关性 经Pearson 相关分析结果显示，GDM 患者血清及胎盘miR-122 水平均与HOMA-IR 呈正相关（P＜0.05）。见表6。

表6 miR-122 水平与HOMA-IR 的相关性

3 讨论

GDM 被认为是妊娠期严重的糖耐量异常。近年来，越来越多的产妇被诊断为GDM，已成为常见的公共卫生问题。对于许多患者来说，诊治不及时必然会给母体和胎儿带来严重的不良影响。多项研究[9～11]均认为，GDM 的发生与妊娠后胰岛β 细胞分泌胰岛素功能相对不足及胰岛素抵抗有关。妊娠后孕妇通常会进补大量的营养物质，超过母婴需求后，就会造成体内糖脂代谢出现异常，正常情况下可通过增加胰岛素分泌来分解多余的葡萄糖，但若胰岛β 细胞分泌胰岛素功能下降或伴有胰岛素抵抗时，则可导致糖代谢异常，进而诱发GDM 的发生[12]。本研究结果显示，观察组FBG、INS 水平及HOMA-IR 均高于对照组，提示GDM 患者机体糖代谢紊乱，胰岛素分泌减少，HOMA-IR 增加，有研究指出产生这种变化的原因或许与糖代谢的靶器官对胰岛素的敏感性下降有关[13]。

miRNA 属于非编码单链RNA，与靶基因mRNA3'端的非编码区结合后可调控基因的表达，与多种代谢性疾病的发生、发展有关，多项研究均显示，miRNAs 在包括糖尿病在内的许多疾病的发生和发展中起着至关重要的作用[14～16]。miRNA 也可由胎盘分泌，进入机体血液循环后，通过调控糖脂代谢过程参与胰岛素抵抗及GDM 等的发生[17]。王雪梅等的一项研究发现，miR-200a 及miR-34a 在GDM患者体内呈高水平表达，并指出其或许是通过调控胰岛素相关调控基因的表达来引起血糖变化，进而导致GDM 的发生[18]。张婧怡等研究发现，miR-101在GDM 患者胎盘中表达水平异常升高，并指出其或许是通过调控EZH2-H3K27me3 途径，降低了胎盘滋养细胞增殖、迁移的能力，进而导致GDM 的发生[19]。miR-122 是miRNA 的一种类型，前体基因位于18q21.31 位点，其表达水平与机体糖脂代谢有关，目前已经证实miR-122 可调控胰岛素抵抗、脂肪细胞分化等多种生物学过程[20]。观察组血清及胎盘miR-122 水平均高于对照组，提示miR-122 在GDM患者体内呈高水平表达，且其高水平表达与胰岛素抵抗有关。可能是miR-122 作为肝脏富含的特异性RNA，可以有效激活固醇调节元件结合蛋白-1c 以及二酯酰甘油酰基转移酶-2 等，进而直接参与早期的肝脏代谢。肝脏早期代谢的异常改变能够诱发胰岛素抵抗、糖尿病等。还有研究报道利用软脂酸诱导胰岛素抵抗模型，结果发现在胰岛素抵抗状态下，miR-122 的表达明显上调，并指出miR-122 参与胰岛素抵抗的调控或许与下调AMPK 基因表达有关[21]。

GDM 孕妇不良妊娠结局如流产、早产、巨大儿、死胎、死产、胎儿畸形、新生儿呼吸窘迫综合征及新生儿死亡等发生率明显增加[22]。本研究依据GDM患者妊娠结局将其分为结局良好组和不良结局组，结果显示，不良结局组患者HOMA-IR 及血清和胎盘miR-122 水平均高于结局良好组，提示miR-122或许参与了GDM 疾病的发生、发展，并可影响患者妊娠结局，这一结果与禤文婷等研究结果一致[8]。

综上所述，GDM 患者伴有明显的胰岛素抵抗，miR-122 在GDM 患者体内呈高水平表达，这可能是GMD 临床诊断和治疗GMD 的潜在靶点。然而，本研究也有一些不足之处，比如研究缺乏体内和体外相关基础实验来支持研究结论。