单胞藻饵料培养的技术要点

李志刚

摘要：总结了单胞藻饵料培养的主要技术，包括培养种类选择，一级培养、二级培养、三级培养的设施条件、培养器具、培养用水的处理与消毒、营养盐的配制及日常管理等环节。

关键词：单胞藻；饵料培养；营养盐

单胞藻是指天然水域中生长的一类个体微小，呈单个细胞或多个细胞相连的低等级植物，是水体的初级生产力。几十年来，广大水产科研工作者经过不懈努力，陆续分离、提纯出了一些营养丰富，适口性好，比较易于大规模培养的单细胞藻类品种如金藻、角毛藻、扁藻、塔胞藻、小球藻、小新月菱形藻等等，并在双壳类贝类育苗中获得了广泛的、大规模的应用。笔者多年来在贝类苗种生产中从事单胞藻饵料培养工作，积累了较多的生产经验，现将这些经验和工作中的一些心得体会加以总结，供同行们借鉴参考。

1 培养品种的选择

培养品种的选择应遵循营养丰富、适口性好、广温、广盐、比较易于培养的原则。基于上述原则，进行贝类苗种生产，选择金藻（叉鞭金藻或等鞭金藻）、角毛藻、扁藻（或塔胞藻）、小球藻这几个品种作为饵料，即可以完全满足贝苗不同发育阶段的营养需求。

2 单胞藻的一级培养

2.1 一级培养室的设施条件

单胞藻一级培养室一般要求采光条件好，要具备日光灯或LED白光灯照明条件，以备连续阴雨天气时补充光照；要具备空调可以调节室内温度。

2.2 培养器具

一级培养所需的容器及工具主要有：5000mL三角烧瓶；1000mL量筒或量杯；500mL烧杯；20mL注射器；液化气炉具；酒精棉球；A4纸或滤纸；橡皮筋以及称量工具等。

2.3 藻种的引进

要选择专业的保种单位引进藻种，引进的藻种要求品种纯正，无杂藻及细菌污染，处于指数生长期。引种所用的容器要经过严格的消毒处理以防止污染。

2.4 培养用水的处理与消毒

单胞藻一级培养用水要求洁净清澈，砂滤效果不理想时，要采用纱布和脱脂棉进行二次过滤。一级培养用水采用5000mL三角烧瓶煮沸消毒法进行消毒处理，沸腾时间保持1min。煮沸好的三角烧瓶要及时用滤纸或A4纸封口。

2.5 营养盐的配制

营养盐的主要成分为氮肥和磷肥，氮肥可选择硝酸钠或尿素，磷肥可选择磷酸二氢钾，此外还有铁、锰等微量元素、维生素、氨基酸等辅助成分以及络合剂乙二胺四乙酸二钠。配制时按营养盐配方准确称取各种成分放入三角烧瓶中，加入定量的淡水，配制成1000倍母液。摇动三角烧瓶，待营养盐全部溶解后烧至沸腾，如此可避免营养盐堆积瓶底，散热不均造成烧瓶炸裂。加热易分解的成分如维生素、氨基酸等要待营养盐冷却至室温后再加。

2.6 分瓶扩种

当三角烧瓶中单胞藻浓度较高时，要及时分瓶扩种。扩种所需的烧杯、注射器等要经煮沸消毒后再用。扩种时用酒精棉球将手仔细擦拭消毒，用注射器吸取营养盐，按1：1000的比例向消毒海水中加入营养盐，摇匀后即可进行分瓶扩种。分瓶扩种的比例通常为1：2，如果急于扩大培养，也可以按1：4的比例进行。

2.7 一级培养的日常管理

2.7.1 摇瓶一级培养过程中，每日早、午、晚三次摇瓶，通过摇瓶，一方面使空气中的二氧化碳融入藻液中，以补充单胞藻的光合作用对二氧化碳的消耗，降低藻液pH值，同时使沉淀的单胞藻悬浮起来，避免沉淀堆积影响单胞藻的光合作用和生长。

2.7.2 调节光照单胞藻喜漫射光，要根据天气情况随时调整光照，晴天要调整遮光帘，避免阳光直射。阴雨天气要打开人工光源补充光照的不足。

2.7.3 控制温度大多数单胞藻的适宜生长温度在20～25℃，低温和高温期间，利用空调升温或降温，使一级培养室温度控制在单胞藻的最佳生长温度。

2.7.4 观察监测要经常观察单胞藻的生长和运动情况，根据不同单胞藻的习性和特点，结合显微镜观察，及时发现问题并做出判断。对光照、温度等因素造成的问题，要及时加以调整。对受到细菌微生物污染而造成的问题，要及时更换藻种。

3 单胞藻的二級培养

单胞藻的二级培养通常在室外塑料大棚中进行。大棚内上方要设有遮光帘可以便利地调节光照。具备充气设施。二级培养容器比较多样化，20L左右的矿泉水桶、50～100L塑料桶均可。如果进行中继培养，也可以使用500～2000L的塑料缸。

3.1 培养用水的消毒与处理

单胞藻二级培养用水通常采用氯制剂消毒处理，常用的有漂白粉、三氯异氰尿酸消毒片等。由于单胞藻二级藻种存放时间较长，水的消毒处理必须完全彻底。以漂白粉为消毒剂时，漂白粉有效氯要求30％～32％，使用浓度100～200mg／L。罐装时用水泵将上清液注入培养容器并溢出，使容器上口边缘及外部也能同时得到消毒处理。注满水的容器要及时用浸泡过消毒液的塑料布或桶盖封口，以免氯气挥发影响消毒效果。

3.2 单胞藻二级扩种

二级扩种最好在晴天的上午进行。扩种所需要的增氧管、气泡石、烧杯、量筒、注射器等物品以及中和漂白粉余氯用的硫代硫酸钠溶液以及营养盐均需经过煮沸消毒处理，容器封口所用的塑料布亦需提前用漂白粉溶液浸泡消毒处理。扩种时先将容器中消毒好的海水倒掉一部分，安装好充气管充气；加入漂白粉的1／3～1／2的硫代硫酸钠中和余氯；将1000倍的营养盐母液按1：1000的比例加入营养盐；将一级藻种加入二级培养容器中，容器封口，完成二级扩种。二级扩种的比例可根据生产需要进行调整，以50L塑料桶为例，可以1瓶扩1桶，也可以1瓶扩多桶。

3.3 单胞藻二级培养的日常管理

单胞藻二级培养通常在常温下进行，其日常管理主要是根据天气调节光照；根据温度情况保温或通风降温；经常检查充气管是否正常充气；同时要注意观察容器中藻类的生长情况，及时发现问题，查明原因，妥善予以处理。

4单胞藻的三级培养

单胞藻的三级培养通常在水泥池中进行，在贝类大规模苗种生产中三级培养池通常在20～50m3。培养用水通常采用漂白粉消毒法进行消毒处理。

4.1 三级培养用水的处理

三级培养用水的处理通常在下午进行。水泥池加好砂滤水后，充气状态下将漂白粉用20～40目筛绢网袋洗入池内，保持充气10～20 min左右，待漂白粉完全散布均匀后关闭气阀，增氧管摘下全部浸没在水中，以使得增氧管内壁得到充分的消毒处理。漂白粉要求粉末细腻，残渣少，有效氯30％以上。漂白粉使用量一般50～100mg／L，应根据砂滤效果和水温进行适当调整，砂滤效果好、水温低时可适当少些；砂滤效果较差、高温期细菌和微生物繁殖活跃时应适当增加使用量。

4.2 单胞藻的三级扩种

单胞藻三级扩种前，安装好增氧管充气，排掉部分池水，排水量除了加入藻种的量外，还要在扩种完成后在水面以上留出8～10cm的无菌带。按漂白粉用量的三分之一左右加入硫代硫酸钠中和余氯，待中和反应完成后，加入营养盐，然后加入二级藻种，完成三级扩种。

单胞藻三级培养中，营养盐的添加量以氮肥计算一般5～20mg／L，可一次性添加，也可以分次添加，具体用量因当地水质条件和天气条件而加以调整。如果当地自然条件下终年水质较瘦，说明水中营养盐较为贫乏，三级培养时营养盐要适当增加。温度适宜、天气晴好、藻类生长旺盛时，营养盐可以适当增加，反之应适当减少。

三级培养扩种时，要挑选颜色深而浓，色泽纯正，生长旺盛的二级种作为种源，以提高三級培养的成功率。三级培养接种比例应因天气的变化而变化，低温和连续阴雨天气，接种比例适当提高，水温适宜，天气晴好，接种比例可适当降低。

4.3 单胞藻三级培养的日常管理

单胞藻三级培养期间，每日通过目视观察与显微镜相结合的方式，密切关注藻类的生长繁殖情况，发现异常及时采取措施。根据天气变化情况及时调整光照强度，低温天气注意保温，高温季节注意开窗通风，尽可能为藻类快速增长创造一个良好的环境条件。

5 小结与讨论

5.1 单胞藻饵料培养工作的核心和重点

单胞藻饵料培养工作的核心和重点是预防细菌及原生动物的污染，无论是一级培养、二级培养，还是三级培养，都必须把防范细菌微生物污染放在首位，各个生产环节必须严格、规范地实行无菌操作，这是单胞藻饵料培养成功的基础和前提条件。

5.2 单胞藻三级培养中营养盐的使用

营养盐是单胞藻生长繁殖的物质基础，其多寡直接影响单胞藻的繁殖速度和藻液浓度。由于三级培养后的单胞藻要直接投喂给贝苗，残留过多的营养盐并不利于贝苗的生长发育，因此三级培养中营养盐并不是越丰富越好。在实际生产当中，要根据天气、水温、培养品种来适当调整。天气晴好，水温适宜，藻类繁殖速度快，营养盐可适当多一点，反之应减量使用。对于小球藻、扁藻这类抗污染能力较强，培养时间较长的品种，营养盐可以多一些，以期获得较高的藻液浓度。如何以最少的营养盐、最少的营养盐残留，获得较好的繁殖速度和较高的藻液浓度，是每一个单胞藻饵料培养工作者需要细心观察、总结和研究的问题。这不仅是生产成本问题，更是安全生产的一个重要环节。

参考文献：

［1］陈明耀．生物饵料培养［M］北京：中国农业出版社，1995：25-26.

Technical key points for unicellular algae cultivation

LI Zhigang

（Dandong Fishery Development Service Center，Dandong，Liaoning，118000）

Abstract：The key technique for cultivating unicellular algae was summarized， including the selection of algae species， facility conditions， cultivation equipment， treatment and disinfection of cultivation water， preparation of nutrient salts， and daily management for primary， secondary， and tertiary culti- vation.

Key words：unicellular algae， feed cultivation，nutrient salts

（收稿日期：2023—04—19）