蓝晓琳 曲春生 王双虎 黄金伟 樊慧苏 商振球
作者单位:323000 丽水市人民医院肝科感染科(蓝晓琳、商振球),检验科(曲春生),药学部(王双虎),呼吸内科(黄金伟)儿科(樊慧苏)
呼吸道鼻病毒感染是免疫力较低的儿童群体常见的疾病,呼吸道可感染的病原体众多,在感染早期及时确定鼻病毒感染有助于临床治疗的决策,减少医疗资源浪费。近年来,抗原检测技术、PCR 技术、宏基因组二代测序技术等均用于儿童呼吸道感染病原学诊断,并展现出良好的应用前景[1]。本研究利用RTPCR 联合毛细电泳技术对丽水地区某医院儿童样本进行鼻病毒等病原体检测,根据结果分析鼻病毒的流行病学特征,为预防感染及临床精准医疗提供帮助。
1.1 对象 收集2020 年3 月至2021 年6 月在丽水市人民医院门诊或住院的0~12 岁儿童鼻拭子送检标本1 603 例,其中男770 例,女833 例;<1 岁413 例,1~6 岁681 例,>6~12 岁509 例。纳入标准:在丽水定居3 个月以上,经本院收治的上呼吸道症状患者,且病毒核酸检测为鼻病毒阳性。排除标准:患病就诊前使用过抗生素者;合并流感病毒、腺病毒等其他呼吸道病毒感染者。本研究经医院医学伦理委员会审查通过,所有儿童家属均签署知情同意书。
1.2 仪器与试剂 全自动核酸提取仪(型号:Smart LabAssist-32,中国台湾圆点奈米技术股份有限公司)由宁波海尔施基因科技有限公司进口;核酸或纯化提取试剂(浙甬食药监械生产备20150063)、呼吸道病原体多重检测试剂盒(浙食药械生产许20130074 号)、T400 Sanger 测序仪(浙食药械生产许20150033 号)购自宁波海尔施基因科技有限公司;基因扩增仪[型号:TC-96/G/H(b)C]购自杭州博日科技有限公司。
1.3 检测方法 收集0~12 岁儿童的鼻拭子置于细胞保存液中,利用全自动核酸提取仪及试剂进行核酸提取,提取的核酸用呼吸道病原体多重检测试剂盒进行RT-PCR 扩增,在T400 Sanger 测序仪上用毛细电泳技术分离不同长度的PCR 产物,可以分析出鼻病毒、博卡病毒、腺病毒、偏肺病毒、冠状病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒等。
1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0 统计软件。计数资料组间比较采用χ2检验。P<0.05 为差异有统计学意义。
2.1 儿童鼻病毒阳性检出率分析 1 603 例标本中,鼻病毒阳性检出率为25.95%(416/1 603)。
2.2 不同性别儿童鼻病毒阳性检出率比较 男童鼻病毒阳性检出率为32.60%(251/770),高于女童的19.81%(165/833),差异有统计学意义(χ2=34.06,P<0.01)。
2.3 不同年龄儿童鼻病毒阳性检出率比较 <1 岁、1~6 岁和>6~12 岁儿童鼻病毒阳性检出率分别为18.89%(78/413)、36.71%(250/681)和17.79%(88/509),不同年龄儿童鼻病毒阳性检出率比较差异有统计学意义(χ2=71.63,P<0.01)。其中1~6 岁儿童鼻病毒阳性检出率高于<1 岁和>6~12 岁儿童(均P<0.05)。
2.4 不同季节儿童鼻病毒阳性检出率比较 春季、夏季、秋季和冬季儿童鼻病毒阳性检出率分别为26.08%(103/395)、35.31%(149/422)、23.38%(94/402)和18.23%(70/384),不同季节儿童鼻病毒阳性检出率比较差异有统计学意义(χ2=32.53,P<0.01)。其中夏季鼻病毒阳性检出率最高,其次为春季和秋季。
2.5 混合感染分析 1 603 例样本中,检出鼻病毒合并其他类型病毒感染52 例,其中,合并博卡病毒的阳性检出率最高,占双重混合感染的44.23%(23/52);其次为合并呼吸道合胞病毒感染,占双重混合感染的21.15%(11/52);余下依次为合并腺病毒、偏肺病毒、冠状病毒,分别占双重混合感染的15.38%(8/52)、13.46%(7/52)、5.78%(3/52)。
呼吸道病原体感染是儿童常见的感染原因之一,其中鼻病毒感染是较为常见的呼吸道病原体感染[2]。本研究利用RT-PCR 联合毛细电泳分析鼻病毒的流行病学特征,发现其在冬季检出率最低,而在夏季检出率最高,这可能与鼻病毒自身的生长最适温度为33~35 ℃有关[3]。不同年龄分组中,<1 岁儿童鼻病毒阳性检出率最低,这与儿童的活动环境相对固定,家人的悉心照顾有关。1~6 岁儿童鼻病毒阳性检出率最高,可能是因为他们所处环境容易接触到传染源,并且此阶段的儿童免疫力相对较低,更易感染有关。随着年龄的增长,儿童免疫力不断加强,>6~12 岁儿童鼻病毒阳性检出率有所下降。
本次观察的1 603 例标本中,共检出416 例鼻病毒阳,阳性检出率为25.95%,这与郭鹏波等[4]在郑州地区儿童鼻病毒的感染率十分接近。在不同性别的阳性检出率上,本研究发现男童的阳性检出率高于女童;与于乐香等[5]研究报道不一致。引起这一差异的原因可能在于标本的来源不同,于乐香等[5]分析的是儿童下呼吸道标本,而本研究分析的标本来源为上呼吸道鼻拭子标本。在鼻病毒检出的患儿群体中,有合并检出博卡病毒的情况,这与苏州地区儿童呼吸道急性感染报道中的混合感染情况相类似[5]。患儿中出现鼻病毒合并呼吸道合胞病毒的感染情况在苏州、武汉等地均有报道[6-7]。鼻病毒合并偏肺病毒的混合感染情况主要出现在我国南方地区[7],这与本研究中发现的混合感染相一致。但鼻病毒合并冠状病毒的报道较为少见,还需进一步与其他地区的研究报道相互认证。
综上所述,夏季鼻病毒阳性检出率高,且1~6 岁儿童更易感染,男童高于女童,提示夏季应做好鼻病毒的预防工作,并根据不同季节、不同年龄段儿童进行精确管理,做好预防措施及相关病原体的诊治。