一例荷斯坦犊牛支原体性肺炎和关节炎的诊断

玄玉莹，丁玉林，王金玲

内蒙古农业大学兽医学院和农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室，内蒙古呼和浩特 010018

0 引言

牛支原体性肺炎和关节炎是危害牛养殖业的一类重要疾病[1]，牛支原体是主要侵害3月龄至1周岁的牛[2]。临床表现分为急性型和慢性型，慢性病例症状不明显，体温稍有升高，采食正常，眼和鼻腔有轻度的黏液性或脓性的分泌物排出，急性型开始只是个别牛出现症状，24～48 h发病牛增加，发病牛会出现剧烈的咳嗽、关节肿大等症状[3，4]。常规的抗生素治疗对于支原体性感染效果比较差，且有研究显示，支原体可大大促进其他病原微生物的继发感染， 进而造成大量死亡，给养殖企业造成损失[5]。

1 临床病史

某牛场共养殖荷斯坦牛1 200 头左右，犊牛200 头左右。犊牛于出生4～7 天开始发病，发病犊牛腕关节、膝关节和跗关节明显肿大，有的犊牛出现一侧颈部肿大，站立不稳，后期出现呼吸困难症状。2月开始偶然发病，4月时发病牛数量明显增多，已死亡8 头犊牛。病程1 周～2 个月不等。

2 剖检病变

发病牛消瘦，胸部皮下水肿，四肢腕关节、膝关节和跗关节明显肿大（图1），切开可见大量淡黄色半透明的关节液，关节内可见大量的纤维素性渗出物（图2），关节周围肌肉组织内可见坏死灶（图3），并与皮肤粘连。肋骨与椎骨关节也见脓肿。颈胸部淋巴结肿大明显，较湿润，呈灰黄色。肝肿大。支气管性大叶性间质性肺炎，肺脏心叶和副叶完全实变，呈深红色肌肉样（图4）。心内膜下散在小出血斑点。肾脏轻度肿大，表面偶见小出血点。其它组织眼观无明显病变。

图2 浆液纤维素性关节炎

图3 跗关节周围坏死灶

图4 间质性肺炎

3 组织病理学

慢性增生性间质性肺炎，肺间质增宽，特别是各级细支气管和血周围淋巴细胞增生明显，形成血管周围炎和细支气管周围炎（图5）；肺泡间质增宽，Ⅱ型肺泡上皮细胞增生，肺泡腔内大量红细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞渗出和浸润，部分巨噬细胞胞浆内可见吞噬若干红细胞和变质的中性粒细胞（图6）。淋巴结皮质淋巴小节和副皮质区淋巴细胞增生明显，髓质淋巴窦内有巨噬细胞增生，中性粒细胞也增多。肝细胞、肾小管上皮细胞和心肌细胞呈急性变性。骨骼肌内化脓灶中内为坏死组织，周围大量嗜中性粒细胞渗出和浸润，有的坏死灶周围已形成明显的肉芽肿和包囊。

图5 慢性增生性间质性肺炎，血管周围炎

图6 间质性肺炎，肺泡间隔增宽，肺泡腔内中性粒细胞和巨噬细胞浸润

4 病原学的分离和培养

取犊牛关节液分别接种普通固体琼脂培养基和支原体培养基上，37 ℃培养72 h后，普通固体琼脂培养基上无细菌生长，支原体培养基上可观察到透明细小的菌落，显微镜下菌落呈“油煎蛋”样（图7）。取支原体培养基内菌落制备涂片，采用姬姆萨染色法进行染色和观察，可见大小不等的多形态的蓝染支原体（图8）。

图7 油煎蛋样的支原体菌落

图8 多形态的蓝染支原体

5 PCR扩增和测序

提取肺组织和关节液内的基因组，用支原体通用引物扩增，肺组织和关节液内均扩增出1500 bp左右目的条带，经测序后，在Genbank中比对，肺脏和关节液内扩增出的基因核苷酸序列同源性为100%，均与湖北牛支原体参考株亲缘关系最近，同源率在99%以上。

6 诊断

本研究通过临床病史、尸体剖检、涂片和触片检查，以及组织病理学方法综合确诊了1例荷斯坦犊牛支原体性肺炎和关节炎。

7 讨论

感染支原体性肺炎和关节炎的病牛初期表现出食欲不振、有鼻液、运动后会出现干咳，后期出现呼吸困难、血便、关节炎和结膜炎等症状[6]。本文中的病例出现了关节肿大和呼吸困难的症状，与资料中描述一致。

支原体性肺炎的典型的病理剖检变化是肺脏的坏死灶和大理石样变，严重者会与胸腔粘连，出现浆液性纤维素性肺炎，也有肝脏肿大、心包积液的病理变化[6，7]。出现关节炎症状的病牛，关节腔内的关节液黏稠且量多，关节腔内充满了黏稠性、半透明而混浊的关节液[8，9]。本次剖检的犊牛出现同样的病变，但是关节炎症状更明显，肿胀部位的皮肤与皮下已经发生粘连且关节腔内有脓性渗出物。

组织病理学表现为肺间质增宽，肺泡Ⅱ型上皮细胞增生，肺泡壁明显增厚，肺脏内以大量中性粒细胞渗出浸润为主，也有巨噬细胞和坏死的上皮细胞。肾脏和心脏出现颗粒变性，淋巴窦内巨噬细胞增生，淋巴结小梁水肿[3]。本病例出现的肺泡间质增生，肺泡Ⅱ型上皮细胞增生，肺泡中的嗜中性粒细胞浸润以及肾脏和心肌的变性都与文献中描述的变化相似。

支原体的大小为0.1～0.3 μm，无细胞壁，不能维持固定的形态而呈现多形性，在固体培养基表面呈特有的“油煎蛋”状，本次用关节液培养出的菌落在显微镜下呈现出典型的“油煎蛋”样，与资料中描述一致。PCR扩增测序结果也显示与支原体的同源性最高达99%以上。

“早诊断、早治疗”能有效控制该病，药物治疗以抗菌消炎为主，在治疗中应注意观察全身症状，根据病情的变化合理调整药物对症治疗[10]。但是牛支原体引起的疾病对任何化学疗法都有抵抗力，有时正确使用抗生素以减少继发性细菌感染，但常常不能有效地治疗支原体感染。注意牛舍场地和用具的清洁卫生，是防止本病发生的基本措施[8]，通过加强日常饲养管理，及时接种疫苗以及对外来的引入牛做好防疫来预防此病的发生[11]。