RhD阴性献血者Rh血型及不规则抗体调查分析

李 敏,张麦利,赵宝娟,杜 丹

陕西省渭南市中心血站检验科,陕西渭南 714000

Rh血型系统是国际输血协会命名的第4号血型系统,也是最复杂的血型系统,具有高度免疫原性和复杂多态性,在输血医学中的临床重要性仅次于ABO血型系统,Rh血型系统目前已发现54种抗原,具有临床重要性的抗体大多数针对的是5种主要抗原(D、C、c、E、e),其抗原的强弱依次为D>E>C>e>c[1]。RhD阴性在我国汉族人群中的分布频率为0.2%～0.5%[2]。本研究通过对渭南地区RhD阴性献血者抗原表型分布及抗体筛查进行分析,了解RhD阴性献血者抗原及不规则抗体的分布特点,对于实施精准输血,保障临床用血安全具有重要意义。本研究对2020年3月至2022年12月渭南地区RhD阴性献血者抗原分布及不规则抗体进行调查分析,现报道如下。

1 资料与方法

1.1标本来源 选取2020年3月至2022年12月本血站检验科从155 353例献血者中初筛RhD阴性献血者821例作为研究对象。

1.2仪器与试剂 KA-2200离心机(日本Kubota公司)、HW37免疫孵育器(中山市生科试剂仪器有限公司)、微柱凝胶卡(江苏力博医药生物技术股份有限公司)、IgM+IgG抗-D[单克隆抗体Milliporw(UK)Ltd]、IgM+IgG抗-D(单克隆抗体Dominion Biologicals Limited)、IgG抗-D(单克隆抗体,上海血液生物医药有限责任公司)、抗-C(单克隆抗体,上海血液生物医药有限责任公司)、抗-c(单克隆抗体,上海血液生物医药有限责任公司)、抗-E(单克隆抗体,上海血液生物医药有限责任公司)、抗-e(单克隆抗体,上海血液生物医药有限责任公司);抗体筛查细胞(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型,上海血液生物医药有限责任公司);室内质控(上海血液生物医药有限责任公司)。试剂批号均在有效期内。

1.3方法 检验科采用NEO全自动血型分析仪对所有无偿献血者的血液标本进行RhD抗原初筛,初筛为RhD阴性的标本送血型室,分别采用3种不同厂家的试剂进行盐水试管法和抗人球蛋白微柱凝胶卡法阴性确认试验,如果均不凝集判为RhD阴性,若其中一种方法或试剂出现凝集,则加做直接抗人球蛋白试验排除献血者自身干扰,若阴性,则判为D抗原变异型,同时进行盐水试管法的C、c、E、e抗原表型检测及抗人球蛋白微柱凝胶卡法的不规则抗体筛查。

2 结 果

2.1RhD阴性献血者抗原表型分布情况比较 821例RhD初筛阴性献血者中ccee占比最高,为442例(53.84%),其次由高到低依次为Ccee 270例(32.89%)、ccEe 42例(5.12%)、CCee 32例(3.90%)、CcEe 27例(3.29%)、CCEe 6例(0.73%)、ccEE 2例(0.24%),未发现CCEE、CcEE表型献血者。

2.2D抗原变异抗原表型分布情况比较 821例初筛RhD阴性献血者经抗人球蛋白确认试验,确认为D抗原变异49例,占RhD初筛阴性人数的5.97%,以ccEe占比最高。见表1。

表1 49例D抗原变异抗原表型分布情况比较

2.3RhD确认阴性与D抗原变异型E抗原分布情况比较 检出的49例D抗原变异型献血者中含E抗原36例,抗人球蛋白确认试验阴性的772例献血者中含E抗原72例,差异有统计学意义(χ2=168.063,P<0.01)。

2.4RhD阴性献血者意外抗体分布情况比较 821例RhD阴性献血者中,检出意外抗体14例,占RhD初筛阴性人数的1.71%,其中抗-D抗体12例,全部为女性;抗-E抗体1例,为男性;IgM抗-M抗体1例,为男性。

3 讨 论

本研究共检测821例RhD初筛阴性的献血者,其中ccee表型占比最高,为53.84%,Ccee其次,占32.89%,与张薇薇等[3]报道的西安地区1 944例初筛阴性献血者中的ccee表型(56.38%)和Ccee表型(28.50%),闫芳等[4]报道的北京地区3 795例初筛阴性献血者中的ccee表型(56.36%)和Ccee表型(27.54%),杨松等[5]报道的南充市425例初筛阴性献血者中的ccee表型(50.00%)和Ccee表型(37.70%),王连友等[6]报道的徐州地区847例初筛阴性献血者中的ccee表型(58.80%)和Ccee表型(28.90%)比例相近,表明在我国RhD阴性献血者中ccee和Ccee表型分布高度一致。分析认为,在临床救治中,对于需长期输血治疗的RhD阴性患者,选择相同表型的血液尤为重要,特别是已产生同种抗体的患者,输血时不应仅仅满足交叉配血符合,还应尽量输入相同表型的血液,以减少输血反应发生。

本研究共检出D抗原变异型49例,占RhD初筛阴性人数的5.97%,与王照军等[7]报道的徐州地区D抗原变异型占5.65%和周娜等[8]报道的山东省济南市D抗原变异型占6.27%相近,与刘丽丽等[9]报道的廊坊地区D抗原变异型占4.12%和熊莉等[10]报道的南昌地区D抗原变异型占2.78%有较大差异。分析认为,不同来源的抗-D试剂与其细胞的反应强度可能存在差异。在临床输血中,RhD变异型对于献血者和受血者的处理方式是不同的,若阴性确认试验证实献血者为D抗原变异型时,则表明其红细胞表面存在较弱的D抗原表达,有可能刺激D阴性的受血者产生抗体,应被看作是D抗原阳性。对于受血者来说,无论确认试验是否能证实其有弱D抗原表达,为了避免受血者产生针对缺失D抗原部分的抗-D抗体,该类受血者都应被作为D抗原阴性受血者。本研究认为,可实施对D抗原变异型献血者主动临床咨询,对检测结果进行解释,告知其作为献血者和受血者的用血策略,旨在消除献血者对临床检测结果与血站检测结果不符的疑虑。

本研究发现,49例D抗原变异型献血者中含E抗原36例,与抗人球蛋白确认试验阴性的772例献血者中含E抗原72例有明显差异,表明含有E抗原的献血者是D抗原变异型的概率更高。分析认为,Rh血型系统其他抗原,如C、E抗原对于D抗原的表达均有一定影响,导致D抗原变异型产生[4],提示实验室在进行RhD阴性确认时,对含有E抗原的标本应加以关注。

多数D阳性红细胞表达正常RhD蛋白,基因突变导致氨基酸改变,从而改变D抗原的表达,产生弱D、部分D、Del表型,Del红细胞上D抗原非常弱,用常规血清学方法检测不到,但红细胞可吸收并放散抗-D抗体,仍然可能免疫RhD阴性受血者。目前本实验室未将吸收放散试验纳入RhD阴性确认试验,势必造成Del漏检,输血时会存在一定程度的风险,这是本实验室正在努力的方向。

本研究通过抗人球蛋白微柱凝胶卡法对RhD阴性献血者进行抗体筛查,共检出14例意外抗体,其中抗-D抗体12例,全部为女性,因Rh系统的D抗原具有极强的免疫原性,RhD阴性个体因输血或妊娠接触D抗原,极易产生抗-D抗体[11],是引起胎儿或新生儿溶血病的主要抗原,因此,RhD阴性女性在孕前及孕期需定期进行不规则抗体监测[12]。对存在意外抗体的血液,其供应时必须选择适宜的成分血品种,以规避这些意外抗体输入患者体内,血浆可报废处理,红细胞可制成洗涤红细胞或冰冻解冻去甘油红细胞供应于临床。

综上所述,RhD阴性血液是稀有资源,本血站实施对RhD阴性献血者的表型检测和不规则抗体筛查,建立RhD阴性献血者血型信息数据库,旨在搭建输血安全信息共享平台,对于实施精准输血,增强输血安全性与有效性,帮助临床在紧急情况下能快速找到合适的血液具有重要意义。