基于PI3K/Akt/NF-κB信号通路探讨升阳益胃汤对肺癌大鼠免疫力的影响

王宏君，孙星星，张润莲

肺癌是一种异质性恶性疾病，是全球癌症相关死亡的主要原因之一。化疗是肺癌常用的治疗方法，但化疗药物在有效杀伤肿瘤细胞的同时也会造成免疫系统功能损伤［1］；肺癌免疫微环境中的免疫细胞对肺癌的发生、发展有很大影响［2］。因此，提高肺癌患者免疫力具有重要意义。磷酸肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/核因子-κB（NF-κB）信号通路在肿瘤细胞凋亡和肺癌靶向药物的发现中起着至关重要的作用［3-4］。肿瘤细胞中PI3K/Akt/NF-κB通路的激活与肿瘤免疫和炎症反应有关，可增加肿瘤细胞增殖水平［5-6］；PI3K/Akt/NF-κB信号通路的抑制可抑制肿瘤生长和肿瘤免疫逃逸［7］。因此，PI3K/Akt/NF-κB 信号通路可能是肿瘤免疫治疗的重要靶点。

升阳益胃汤源于李东垣的《内外伤辨惑论》，有健脾祛湿、升阳益胃的功效。研究显示，升阳益胃汤具有抗炎、抗氧化和增强免疫的作用，在肺系统疾病和癌症中具有较高应用价值［8］。如在脾虚型胃癌患者中，升阳益胃汤联合奥沙利铂可以提高患者自身免疫力，有利于其后期康复且无明显不良反应［9］；在慢性支气管炎患者中，升阳益胃汤可显著抑制炎症反应，提高机体免疫力，改善患者肺功能［10］；升阳益胃汤对治疗肺癌发热也十分有效［11］。然而，升阳益胃汤对肺癌患者免疫力的影响及具体药理作用机制尚不清楚。有研究认为，升阳益胃汤主要通过PI3K/Akt 信号通路参与抗炎、抗纤维化和免疫调节［12］。本研究旨在通过动物实验探讨升阳益胃汤对肺癌大鼠免疫力的影响及潜在机制，以期为肺癌治疗提供新的参考。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF 级Wistar 大鼠72 只，6～8 周龄，体质量（200±20）g，雌雄各半，购自中国科学院上海药物研究所，动物生产许可证号：SCXK（沪）2020-0005，饲养在温度（24±2）℃、湿度50%～60%、12 h光照/12 h黑暗的环境中，自由食水。

1.2 主要试剂与仪器

升阳益胃汤（黄芪30 g、人参15 g、半夏10 g、甘草5 g、防风10 g、白芍10 g、羌活10 g、独活10 g、陈皮10 g、茯苓10 g、泽泻10 g、柴胡10 g、白术10 g、黄连10 g）由河北北方学院附属第一医院制剂室提供，加10 倍量蒸馏水浸泡30 min，按常规煎药法煎煮2次，每次30 min，过滤药液并浓缩至每毫升含原药材2 g，高压灭菌冷却，保存于4 ℃冰箱中备用，使用时稀释至所需浓度。3-甲基胆蒽（3-Methylcholanthrene，MCA；纯度98%）、二乙基亚硝胺（diethylnitrosamine，DEN；纯度≥99.0%）和CelLytic ™NuCLEAR ™提取试剂盒均购自美国Sigma-Aldrich 公司。碘化油注射液购自上海旭东海普药业有限公司；740 Y-P（PI3K 激活剂，纯度99.03%）购自美国MedChemExpress 公司。白细胞介素（IL）-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和免疫球蛋白（Ig）G、IgA、IgM 酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司。兔源PI3K、磷酸化PI3K（p-PI3K）一抗购自美国Thermo Fisher Scientific 公司；兔源Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、NF-κB p65、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）、核纤层蛋白B1（Lamin B1）一抗和辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗兔IgG二抗购自美国Cell Signaling Technology 公司。高分辨小动物数字X线机（美国KUBTEC公司）；Synergy LX多功能酶标仪（美国BioTek公司）；Mx3005P 实时荧光定量PCR 仪（美国Stratagene 公司）；BX53光学显微镜（日本Olympus公司）。

1.3 实验方法

1.3.1 模型制备

100 g/L MCA、0.1 g/L DEN 分别溶解在碘化油中。大鼠适应性喂养后，将动物按随机数字表法分为对照组12只和造模组60只。造模组参考文献［13］方法，采用气管内灌注致癌碘化油溶液法建立肺癌模型：大鼠麻醉后，将其以仰卧位固定在倾斜的手术板上，用固定线挂住大鼠上颌门齿；呼气结束时，在额镜直视下将0.1 mL 含致癌物质（100 g/L MCA、0.1 g/L DEN）的碘化油通过钝的ZY 型12 号针头经左肺支气管缓缓注入到大鼠的左肺，肺内出现碘化油时为灌注成功，3周后用高分辨小动物数字X线机进行胸部影像学检查，当观察到肺部有重物形成时，则表示模型制备成功，所有大鼠均造模成功。对照组同法将0.1 mL 不含任何致癌物质的碘化油注入左肺。肺内若可见碘化油即为灌注成功。

1.3.2 分组与给药

造模1 周后将建模成功的60 只大鼠按随机数字表法分为模型组、顺铂组（5 mg/kg）、升阳益胃汤组（14 g/kg）、740 YP 组（10 mg/kg）［14］、升阳益胃汤+740 Y-P 组，每组12 只。顺铂和740 Y-P 采取腹腔注射给药，升阳益胃汤采取灌胃给药，均1次/d，连续28 d。灌胃升阳益胃汤的大鼠每日给药剂量为14 g/kg 体质量（根据人与大鼠的体表面积换算法计算得出）。

1.3.3 流式细胞术检测外周血T淋巴细胞亚群

末次干预后24 h，麻醉各组大鼠，从其眼眶取外周血2 mL，置于15 mL 离心管（含1 mL 抗凝剂）中，加入磷酸缓冲盐溶液（PBS）稀释，采用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞，PBS洗涤并重悬后，加入含10µL T细胞表面标志物异硫氰酸荧光素（FITC）-CD3、藻红蛋白（PE）-CD4、别藻蓝蛋白（APC）-CD8 单抗的离心管中，4 ℃下避光孵育10 min，利用流式细胞仪分析T 淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+占比，并计算CD4+/CD8+比值。

1.3.4 ELISA检测血清炎性因子和免疫球蛋白水平

腹主动脉采血2 mL，室温静置30 min，3 000×g离心10 min，分离血清，按照ELISA试剂盒检测说明书，经温育、加酶、显色、终止后，于450 nm 波长处测定吸光度（A）值，根据标准曲线计算血清IL-6、TNF-α和IgG、IgA、IgM水平。

1.3.5 肺、脾和胸腺指数检测

腹主动脉采血完成后，处死大鼠，取肺、脾和胸腺并称质量，计算肺、脾、胸腺指数。肺、脾、胸腺指数=［肺、脾、胸腺质量（mg）/大鼠体质量（g）］。

1.3.6 HE染色观察肺组织病理学变化

取大鼠左侧肺组织并分为两部分，一部分于-80 ℃冰箱中保存备用，另一部分用10%中性甲醛固定，梯度乙醇脱水，石蜡包埋，连续切5µm 厚切片行常规HE 染色。封片后，光镜下观察肺组织病理学变化。

1.3.7 实时荧光定量PCR（qPCR）检测基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）mRNA表达

使用Trizol试剂从冻保存的肺组织中分离总RNA。RNA浓度使用分光光度计测定。随后使用PrimeScript RT Master Mix生成mRNA的互补DNA（cDNA）。qPCR反应体系（25µL）：SYBR Green qPCR Master Mix 12.5µL、正向引物和反向引物各0.5µL、cDNA 模板2.0µL、ddH2O 9.5µL。反应条件：95 ℃预变性10 min；95 ℃变性15 s，60 ℃退火60 s，循环40次；72 ℃延伸60 s。MMP-9引物：上游5'-CATTCGCGTGGATAAGGA GT-3'，下游5'-CACTGCAGGAGGGTCGTAGG-3'；ICAM-1引物：上游5'-CGCAAGTCCAATTCACACTGA-3'，下游5'-CCAGAGCGGCAGAGCAA-3'；GAPDH引物：上游5'-GGTTG AGCAGGTACTTT-3'，下游5'-AGCAAGAGCACAAGAGGAA G-3'。以GAPDH 为内参，采用2-ΔΔCt法定量分析ICAM-1、MMP-9的mRNA相对表达水平。

1.3.8 Western blot 法检测肺组织PI3K/Akt/NF-κB 通路相关蛋白表达

使用RIPA裂解液（含有1%蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂）提取肺组织中的蛋白质，并采用核蛋白提取试剂盒提取核蛋白（用于检测NF-κB p65水平）。测定蛋白浓度后，将等量蛋白质（50µg）上样到10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶上并进行电泳以分离目标蛋白质，转移到聚偏二氟乙烯膜上后，使用5%脱脂奶粉在室温下封闭蛋白质2 h。将膜与一抗PI3K（1∶1 000）、p-PI3K（1∶1 000）、Akt（1∶1 000）、p-Akt（1∶1 000）、NF-κB p65（1∶500）、Lamin B1（1∶1 000）、GAPDH（1∶2 000）在4 ℃下孵育过夜。然后，将膜洗涤后与HRP 偶联的山羊抗兔IgG 二抗（1∶4 000）在室温下孵育1 h。使用增强型化学发光试剂（ECL）检测试剂显色，并进行半定量分析，用GAPDH条带进行标准化。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0软件进行数据分析。符合正态分布的计量资料以±s表示，多组间比较用单因素方差分析，组间多重比较用SNK-q法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组肺癌大鼠外周血T淋巴细胞亚群比较

与对照组比较，模型组CD3+、CD4+占比和CD4+/CD8+均降低，CD8+占比升高（P＜0.05）；与模型组比较，顺铂组和740 Y-P 组CD3+、CD4+占比及CD4+/CD8+比值降低，CD8+占比升高（P＜0.05），而升阳益胃汤组CD3+、CD4+占比和CD4+/CD8+比值升高，CD8+占比降低（P＜0.05），其中升阳益胃汤组CD3+、CD4+占比和CD4+/CD8+比值较顺铂组升高（P＜0.05）；与740 Y-P 组比较，升阳益胃汤+740 Y-P 组CD3+、CD4+占比和CD4+/CD8+比值升高，CD8+占比降低（P＜0.05）。见表1。

Tab.1 Comparison of the proportion of CD3+,CD4+,CD8+and CD4+/CD8+proportion of T lymphocyte subsets in peripheral blood of rats between the six groups表1 各组大鼠外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+占比与CD4+/CD8+比值比较 （n=12，±s）

Tab.1 Comparison of the proportion of CD3+,CD4+,CD8+and CD4+/CD8+proportion of T lymphocyte subsets in peripheral blood of rats between the six groups表1 各组大鼠外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+占比与CD4+/CD8+比值比较 （n=12，±s）

＊＊P＜0.01；a与对照组比较，b与模型组比较，c与顺铂组比较，d与740 Y-P组比较，均P＜0.05。

组别对照组模型组顺铂组升阳益胃汤组740 Y-P组升阳益胃汤+740 Y-P组F CD3+/%72.64±7.31 48.19±5.24a 36.30±4.07b 59.57±7.16bc 32.24±4.35b 45.61±5.29d 82.799＊＊CD4+/%65.23±7.12 42.18±6.49a 30.43±4.80b 54.90±6.32bc 27.60±4.28b 39.08±3.56d 80.689＊＊组别对照组模型组顺铂组升阳益胃汤组740 Y-P组升阳益胃汤+740 Y-P组F CD8+/%27.34±3.25 38.11±5.16a 46.56±5.2b 32.31±6.85bc 49.24±5.40b 40.83±3.62d 41.064＊＊CD4+/CD8+2.38±0.17 1.10±0.13a 0.65±0.10b 1.68±0.15bc 0.55±0.09b 0.96±0.12d 344.714＊＊

2.2 各组肺癌大鼠肺、脾和胸腺指数比较

与对照组比较，模型组脾和胸腺指数均降低，肺指数升高（P＜0.05）；与模型组比较，顺铂组肺、脾和胸腺指数均降低（P＜0.05），而740 Y-P 组脾和胸腺指数降低，肺指数升高（P＜0.05），升阳益胃汤组脾和胸腺指数升高，肺指数降低（P＜0.05），其中升阳益胃汤组脾和胸腺指数较顺铂组升高（P＜0.05）；与740 Y-P 组比较，升阳益胃汤+740 Y-P 组脾和胸腺指数升高，肺指数降低（P＜0.05）。见表2。

Tab.2 Comparison of lung index,spleen index and thymus index of rats between the six groups表2 各组大鼠肺指数、脾指数和胸腺指数比较（n=12，mg/g，±s）

Tab.2 Comparison of lung index,spleen index and thymus index of rats between the six groups表2 各组大鼠肺指数、脾指数和胸腺指数比较（n=12，mg/g，±s）

＊＊P＜0.01；a与对照组比较，b与模型组比较，c与顺铂组比较，d与740 Y-P组比较，均P＜0.05。

组别对照组模型组顺铂组升阳益胃汤组740 Y-P组升阳益胃汤+740 Y-P组F肺指数2.75±0.34 4.83±0.56a 3.50±0.41b 3.62±0.49b 5.87±0.62b 4.90±0.53d 62.721＊＊脾指数4.91±0.57 2.52±0.33a 2.03±0.28b 3.40±0.36bc 1.81±0.25b 2.39±0.30d 120.021＊＊胸腺指数2.56±0.31 2.04±0.27a 1.69±0.22b 2.45±0.30bc 1.42±0.24b 1.81±0.23d 33.981＊＊

2.3 各组肺癌大鼠血清IL-6、TNF-α水平比较

与对照组比较，模型组IL-6、TNF-α 水平升高（P＜0.05）；与模型组比较，740 Y-P 组IL-6、TNF-α水平升高（P＜0.05），而顺铂组和升阳益胃汤组IL-6、TNF-α 水平降低（P＜0.05），且升阳益胃汤组IL-6、TNF-α 水平低于顺铂组（P＜0.05）；与740 Y-P 组比较，升阳益胃汤+740 Y-P 组IL-6、TNF-α 水平降低（P＜0.05）。见表3。

Tab.3 Comparison of serum IL-6 and TNF-α levels in rats between the six groups表3 各组大鼠血清IL-6和TNF-α水平比较（n=12，ng/L，±s）

Tab.3 Comparison of serum IL-6 and TNF-α levels in rats between the six groups表3 各组大鼠血清IL-6和TNF-α水平比较（n=12，ng/L，±s）

＊＊P＜0.01；a与对照组比较，b与模型组比较，c与顺铂组比较，d与740 Y-P组比较，均P＜0.05。

组别对照组模型组顺铂组升阳益胃汤组740 Y-P组升阳益胃汤+740 Y-P组F IL-6 34.26±6.45 61.47±8.39a 50.15±7.62b 39.22±6.18bc 93.40±10.34b 70.83±9.56d 85.268＊＊TNF-α 24.45±4.20 56.29±7.86a 43.31±6.45b 32.06±5.29bc 81.52±8.37b 62.48±7.56d 115.121＊＊

2.4 各组肺癌大鼠血清IgG、IgA、IgM水平比较

与对照组比较，模型组IgG、IgA、IgM 水平降低（P＜0.05）；与模型组比较，顺铂组和740 Y-P 组IgG、IgA、IgM 水平降低（P＜0.05），升阳益胃汤组IgG、IgA、IgM 水平升高（P＜0.05）；升阳益胃汤组IgG、IgA、IgM 水平较顺铂组升高（P＜0.05）；与740 Y-P 组比较，升阳益胃汤+740 Y-P 组IgG、IgA、IgM水平升高（P＜0.05）。见表4。

Tab.4 Comparison of serum IgG,IgA and IgM levels in rats between the six groups表4 各组大鼠血清IgG、IgA、IgM水平比较（n=12，g/L，±s）

Tab.4 Comparison of serum IgG,IgA and IgM levels in rats between the six groups表4 各组大鼠血清IgG、IgA、IgM水平比较（n=12，g/L，±s）

＊＊P＜0.01；a与对照组比较，b与模型组比较，c与顺铂组比较，d与740 Y-P组比较，均P＜0.05。

组别对照组模型组顺铂组升阳益胃汤组740 Y-P组升阳益胃汤+740 Y-P组F IgG 0.48±0.05 0.30±0.04a 0.21±0.03b 0.39±0.05bc 0.15±0.03b 0.27±0.04d 103.680＊＊IgA 0.081±0.011 0.052±0.007a 0.041±0.006b 0.067±0.008bc 0.032±0.005b 0.048±0.006d 69.151＊＊IgM 0.37±0.05 0.24±0.03a 0.15±0.03b 0.31±0.04bc 0.10±0.02b 0.23±0.04d 89.924＊＊

2.5 各组肺癌大鼠肺组织病理学变化比较

对照组大鼠肺组织结构正常，未见明显病变；模型组肺组织左叶增生、肺泡囊扩张、上皮细胞明显破损、鳞状上皮化生、大量肿瘤细胞呈片状或条索状，排列紊乱，伴有较多炎性细胞浸润；740 Y-P组上述病变较模型组加重，伴有组织肿胀、气管黏膜充血；顺铂组和升阳益胃汤组上述肺组织病变较模型组减轻，肺组织肿胀不明显，肺泡囊及上皮细胞结构基本清晰；而升阳益胃汤+740 Y-P组上述肺组织病变较升阳益胃汤组加重，较740 Y-P组减轻。见图1。

2.6 各组肺癌大鼠肺组织ICAM-1 和MMP-9 mRNA水平比较

与对照组比较，模型组肺组织ICAM-1和MMP-9 mRNA水平升高（P＜0.05）；与模型组比较，740 YP组肺组织ICAM-1和MMP-9 mRNA水平升高（P＜0.05），而顺铂组和升阳益胃汤组肺组织ICAM-1 和MMP-9 mRNA 水平降低（P＜0.05），其中升阳益胃汤组肺组织ICAM-1和MMP-9 mRNA水平较顺铂组降低（P＜0.05）；与740 Y-P 组比较，升阳益胃汤+740 Y-P 组肺组织ICAM-1 和MMP-9 mRNA 水平降低（P＜0.05）。见表5。

Tab.5 Comparison of ICAM-1 mRNA and MMP-9 mRNA levels in lung tissue of rats between the six groups表5 各组大鼠肺组织ICAM-1 mRNA和MMP-9 mRNA水平比较（n=12，±s）

Tab.5 Comparison of ICAM-1 mRNA and MMP-9 mRNA levels in lung tissue of rats between the six groups表5 各组大鼠肺组织ICAM-1 mRNA和MMP-9 mRNA水平比较（n=12，±s）

＊＊P＜0.01；a与对照组比较，b与模型组比较，c与顺铂组比较，d与740 Y-P组比较，均P＜0.05。

组别对照组模型组顺铂组升阳益胃汤组740 Y-P组升阳益胃汤+740 Y-P组F ICAM-1 mRNA 1.00±0.00 2.15±0.31a 1.72±0.20b 1.36±0.18bc 3.20±0.35b 2.34±0.30d 115.551＊＊MMP-9 mRNA 1.00±0.00 2.38±0.29a 1.79±0.24b 1.45±0.21bc 3.56±0.38b 2.50±0.33d 134.376＊＊

2.7 各组肺癌大鼠肺组织PI3K/Akt/NF-κB 通路相关蛋白表达比较

与对照组比较，模型组肺组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 比值和核NF-κB p65 蛋白水平升高（P＜0.05）；与模型组比较，740 Y-P 组肺组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值和核NF-κB p65蛋白水平升高（P＜0.05），而顺铂组和升阳益胃汤组肺组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 比值和核NF-κB p65 蛋白水平降低（P＜0.05），且升阳益胃汤组肺组织上述指标水平与顺铂组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；与740 Y-P 组比较，升阳益胃汤+740 Y-P 组肺组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt 比值和核NF-κB p65 蛋白水平降低（P＜0.05）。见图2、表6。

Fig.2 Western blot result of PI3K/Akt/NF-κB pathway in lung tissue of rats in each group图2 各组大鼠肺组织PI3K/Akt/NF-κB通路蛋白印迹图

Tab.6 Comparison of p-PI3K/PI3K，p-Akt/Akt ratio and nuclear NF-κB p65 protein level in lung tissue of rats between the six groups表6 各组大鼠肺组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值和核NF-κB p65蛋白水平比较 （n=12，±s）

Tab.6 Comparison of p-PI3K/PI3K，p-Akt/Akt ratio and nuclear NF-κB p65 protein level in lung tissue of rats between the six groups表6 各组大鼠肺组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt比值和核NF-κB p65蛋白水平比较 （n=12，±s）

＊＊P＜0.01；a与对照组比较，b与模型组比较，c与顺铂组比较，d与740 Y-P组比较，P＜0.05。

组别对照组模型组顺铂组升阳益胃汤组740 Y-P组升阳益胃汤+740 Y-P组F p-PI3K/PI3K 0.20±0.04 0.51±0.07a 0.40±0.06b 0.38±0.05b 0.70±0.08b 0.54±0.06d 91.720＊＊p-Akt/Akt 0.15±0.03 0.42±0.06a 0.31±0.05b 0.30±0.05b 0.62±0.07b 0.47±0.06d 105.187＊＊核NF-κB p65/Lamin B1 0.12±0.02 0.35±0.05a 0.27±0.04b 0.24±0.04b 0.56±0.08b 0.41±0.05d 110.736＊＊

3 讨论

手术、放疗、化疗、分子靶向治疗等在肺癌治疗中均发挥着重要作用，但存在器官功能受损、耐药、肿瘤复发和转移等不良反应，患者生存期仍处于较低水平［15-16］。因此，提高患者免疫力对延长患者生存期、抑制肿瘤生长和改善生存质量具有积极意义。

化疗药在抗肿瘤时会损害患者的免疫力，而中药复方制剂可通过调节机体免疫细胞及细胞因子的含量和活性，增强机体免疫监视，减弱肿瘤细胞的免疫逃逸，进而达到抑瘤效果。例如，益气化痰方可升高非小细胞肺癌患者外周血CD3+、CD4+占比及CD3+/CD4+比值，调节机体细胞免疫力［17］；益气健脾方能减缓晚期肺癌化疗患者T 淋巴细胞的下降速度，提高患者免疫力，减轻化疗的不良反应［18］。升阳益胃汤方剂中黄芪、人参、半夏、白术、茯苓、甘草均为治疗肺癌中药复方中的常用中药。黄芪、人参是扶正补益之要药，具有抗肺癌、肝癌、胃癌等恶性肿瘤的作用，作用机制可能主要与提高机体免疫力有关［19］；白术可通过调节肿瘤微环境和调控机体免疫力，发挥抗肿瘤活性［20］；茯苓中的茯苓多糖能够增强肺癌对化疗的敏感性，同时减少放化疗引起的不良反应，其作用机制可能与增强免疫因子表达，调节机体免疫有关［21］。基于此，笔者推测升阳益胃汤可能通过调节机体免疫力达到治疗肺癌的效果。

T 淋巴细胞分为辅助性T 细胞（如CD4+）、抑制性T 细胞（如CD8+）和毒性T 细胞（CTL），其中CD4+和CD8+在癌症治疗中发挥重要作用［22］。本研究采用含致癌物质的碘化油诱导肺癌模型，发现升阳益胃汤可升高肺癌大鼠CD3+、CD4+占比和CD4+/CD8+比值，降低CD8+占比，并且上调血清IgG、IgA、IgM水平和脾、胸腺指数，表明升阳益胃汤能够提高肺癌大鼠免疫力。此外，IL-6、TNF-α是肿瘤炎症反应的关键标志物，通常与肿瘤细胞的迁移、侵袭有关。在本研究中，模型组大鼠血清IL-6和TNF-α水平较对照组升高，表明肺癌大鼠体内存在严重的炎症反应；而升阳益胃汤能有效抑制炎性因子水平，表明升阳益胃汤可有效抑制肺癌大鼠体内炎症反应，提示升阳益胃汤可通过调节免疫力和炎症反应，从而在肺癌大鼠中发挥肿瘤抑制作用。

PI3K/Akt 信号通路在T细胞发育中具有关键作用，可调节CD4+/CD8+T 细胞分化比，而NF-κB 的活性受PI3K/Akt 通路的影响［23］。研究表明，PI3K/Akt/NF-κB 通路参与肺癌的发生、发展［24］。另有报道显示，黄芩素可通过抑制PI3K/Akt/NF-κB通路来增加A549肺腺癌细胞对顺铂的敏感性［25］；下调颅内动脉瘤中PI3K/Akt/NF-κB 信号通路活性可维持Th17/Treg平衡［26］。PI3K活化可诱导Akt磷酸化，Akt可降解IκB，促使NF-κB 核转位，启动其靶基因表达，促进细胞存活；而NF-κB 的活化可上调ICAM-1 表达并诱导MMP-9表达，从而促进肿瘤免疫逃逸［27］。本研究结果显示，肺癌大鼠肺组织中PI3K/Akt/NF-κB通路相关蛋白水平升高，并伴随着ICAM-1 mRNA和MMP-9 mRNA水平升高，表明肺癌大鼠PI3K/Akt/NF-κB 信号通路被激活。给予升阳益胃汤干预后，肺癌大鼠肺组织PI3K/Akt/NF-κB 相关蛋白表达降低，ICAM-1 mRNA和MMP-9 mRNA水平降低，并且在使用PI3K 激活剂740 Y-P 的基础上，加用升阳益胃汤干预可明显抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路，下调ICAM-1 和MMP-9 水平，增强肺癌大鼠免疫力，提示升阳益胃汤可能通过抑制PI3K/Akt/NF-κB 信号通路活化而发挥免疫调节作用。

综上所述，升阳益胃汤可增强肺癌大鼠T 淋巴细胞免疫力，抑制肿瘤免疫逃逸，其机制可能与抑制PI3K/Akt/NF-κB 信号通路活化有关。本研究为升阳益胃汤应用于肺癌治疗提供了新的理论依据。然而，肺癌的发生、发展过程涉及多种通路，升阳益胃汤对肺癌的治疗作用是否与其他机制有关，有待进一步探讨。此外，升阳益胃汤是否会影响肺癌细胞的增殖及浸润，也是下一步研究的重点方向。