血清长基因间非编码RNA00511、微RNA-515-5p在子宫内膜癌中表达与临床病理特征及预后的关系

王丽娟，吴文，林秀芬

作者单位：1海南医学院第二附属医院妇产科，海南 海口 571100；

2文昌市人民医院妇产科，海南 文昌 570000

子宫内膜癌在妇科癌症中较为常见，其发病年龄逐渐趋于年轻化［1］。子宫内膜癌根据临床病理特征可分为低风险或中等风险类别，低级别、早期的子宫内膜样子宫内膜癌病人总体预后良好，然而仍有部分病人会出现局部或远处复发，这些病例的早期识别仍具有挑战性［2］。长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）及微RNA（microRNA，miRNA）均是不编码蛋白质的RNA，参与子宫内膜癌的发生发展［3］。长基因间非编码RNA00511（long intergenic non-coding RNA 00511，LINC00511）是一种lncRNA，在多种肿瘤发生发展中异常高表达［4-5］。前期生物信息学网站分析发现LINC00511 与微RNA-515-5p（microRNA-515-5p，miR-515-5p）存在靶向结合位点，因此本研究通过检测子宫内膜癌病人血清LINC00511 与miR-515-5p 表达水平，探讨二者与临床病理特征及预后的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集海南医学院第二附属医院2017年3月至2019年2月住院行手术治疗的子宫内膜癌病人（子宫内膜癌组）82 例，病人年龄范围为20~72 岁，年龄（60.10±9.72）岁。收集整理子宫内膜癌组年龄、绝经状态、病理类型、组织分化程度、肿瘤长径、肌层浸润深度、淋巴结转移、临床分期、手术方式、术后是否进行辅助放化疗等临床资料。同时收集子宫内膜不典型增生病人（不典型增生组）67例及健康体检者（对照组）79例，不典型增生组年龄范围为21~73 岁，年龄（60.25±8.89）岁；对照组年龄范围为20~75岁，年龄（60.79±8.92）岁。

纳入标准：①子宫内膜癌和子宫内膜不典型增生分别符合其诊断标准［6-7］，均经病理证实；②研究对象年龄均>18 周岁，资料完整且配合度高；③首次确诊，所有病人术前未进行放化疗及其他抗肿瘤治疗；④病人或其近亲属知情同意，符合《世界医学协会赫尔辛基宣言》相关要求。排除标准：①有肝肾等脏器实质性病变者；②伴有呼吸系统疾病、急慢性感染性疾病及自身免疫系统缺陷性疾病者；③伴有除子宫内膜外的第二原发恶性肿瘤者。

1.2 方法

1.2.1 实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（qRTPCR）检测血清LINC00511、miR-515-5p 表达水平采集研究对象确诊后24 h 内肘静脉血样，静置后离心15 min（离心转速为3 000 r/min）收集血清，保存至−80 ℃冰箱。取出冻存的血清按照Trizol 试剂盒（上海研谨生物科技有限公司）说明书操作分离提取血清总RNA，并采用反转录试剂盒（北京伊塔生物科技有限公司）反转录合成cDNA，于qRT-PCR 仪上进行反应，并进行CT 值（循环阈值）分析，LINC00511、miR-515-5p 相对表达量计算公式为2−ΔΔCt，内参分别为GAPDH、U6，引物经软件设计后由上海生工生物工程有限公司合成，引物序列见表1。qRT-PCR 反应总体系为20 µL，反应程序设置为：95 ℃、5 min；95 ℃、15 s，60 ℃、60 s，40个循环。

表1 qRT-PCR引物序列

1.2.2 随访自术后起开始随访82 例子宫内膜癌病人，病人均未失访，随访率为100%，随访内容包括了解病人疾病复发及生存情况。随访截止日期为2022年2月，终点为随访结束（3年）或病人死亡。

1.3 统计学方法数据采用SPSS 25.0 软件包分析。计量资料服从正态分布以表示，组间比较采用独立样本t检验，三组比较采用单因素方差分析，进一步组间两两比较采用SNK-q检验；采用Pearson 相关分析子宫内膜癌病人血清LINC00511与miR-515-5p 表达水平的相关性；采用Kaplan-Mei⁃er 法分析子宫内膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p 表达水平与预后的关系，生存率比较采用log-rank 检验；多因素Cox 回归分析影响子宫内膜癌病人预后的因素。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组血清LINC00511、miR-515-5p 表达水平比较子宫内膜癌组血清LINC00511表达水平明显高于不典型增生组、对照组，miR-515-5p 表达水平明显低于不典型增生组、对照组（P<0.05）。不典型增生组血清LINC00511 表达水平明显高于对照组，miR-515-5p 表达水平明显低于对照组（P<0.05）。见表2。

表2 各组血清LINC00511、miR-515-5p表达水平比较/

表2 各组血清LINC00511、miR-515-5p表达水平比较/

注：①与对照组比较，P<0.05。②与不典型增生组比较，P<0.05。

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2.2 子宫内膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p表达水平与临床病理特征的关系不同年龄、绝经状态、病理类型、组织分化程度、肿瘤长径、手术方式、术后辅助放化疗的子宫内膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p 表达水平比较，差异无统计学意义（P>0.05）。肌层浸润深度≥1/2、有淋巴结转移、临床分期Ⅲ~Ⅳ期的子宫内膜癌病人血清LINC00511 表达水平明显较高，miR-515-5p 表达水平明显较低（P<0.05）。见表3。

表3 子宫内膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p表达水平与临床病理特征的关系/

表3 子宫内膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p表达水平与临床病理特征的关系/

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2.3 子宫内膜癌病人血清LINC00511 与miR-515-5p表达水平的相关性Pearson相关分析结果显示，子宫内膜癌病人血清LINC00511 与miR-515-5p 表达水平呈负相关（r=−0.48，P<0.05）。见图1。

图1 子宫内膜癌病人血清LINC00511与miR-515-5p表达水平的相关性

2.4 子宫内膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p表达水平与预后的关系以子宫内膜癌病人血清LINC00511（2.59）、miR-515-5p（0.43）表达水平的中位数为临界值，将子宫内膜癌病人分为LINC00511高表达42 例，LINC00511 低表达40 例；miR-515-5p高表达41 例，miR-515-5p 低表达41 例。采用Ka⁃plan-Meier 法分析子宫内膜癌病人血清LINC00511、miR-515-5p 表达水平与预后的关系，结果显示，子宫内膜癌病人血清LINC00511 高表达病人3 年生存率（29/42，69.05%）低于LINC00511 低表达病人（37/40，92.50%）（χ2=7.16，P<0.05）；miR-515-5p 高表达病人3 年生存率（39/41，95.12%）高于miR-515-5p 低表达病人（27/41，65.85%）（χ2=11.18，P<0.05）。

2.5 子宫内膜癌病人预后的影响因素分析将子宫内膜癌病人3 年内是否死亡作为因变量，将LINC00511、miR-515-5p、年龄、肌层浸润深度、淋巴结转移、临床分期、手术方式、术后辅助放化疗作为自变量进行多因素Cox 回归分析，结果显示，LINC00511、临床分期是子宫内膜癌病人3年内死亡的独立危险因素（P<0.05），miR-515-5p 是子宫内膜癌病人3年内死亡的保护因素（P<0.05）。见表4。

表4 子宫内膜癌病人预后的多因素Cox回归分析

3 讨论

子宫内膜癌多数为腺癌，且最常见的为子宫内膜样腺癌，其主要影响绝经后妇女，低于45 岁以下的女性中并不常见［8-9］。本研究确诊的82 例子宫内膜癌病人中，子宫内膜样腺癌占74.39%（61/82），绝经后女性占73.17%（60/82），与既往文献基本一致。尽管目前外科治疗使许多早期子宫内膜癌病人预后良好，但晚期或出现转移病人的5 年生存率仍呈降低趋势［10-11］。寻找子宫内膜癌发生发展中关键基因的表达异常，是近些年来子宫内膜癌研究的热点。

LINC00511 被广泛证实为一种促癌基因，可通过高表达诱导癌细胞增殖、迁移及侵袭等许多恶性生物学行为，且与癌症预后有关［12-15］。但对于LINC00511 在子宫内膜癌中的研究仍未见相关报道。本研究结果显示，LINC00511 在子宫内膜癌中显著高表达，且肌层浸润较深、发生淋巴结转移、临床分期越高的病人LINC00511表达上升越明显。提示LINC00511 在子宫内膜癌中发挥促癌基因作用，其可能通过高表达参与子宫内膜癌的发生发展，但目前具体机制尚不明确，推测可能与其促进肿瘤细胞恶性增殖有关。此外，本研究中子宫内膜癌病人血清miR-515-5p 低表达，且与LINC00511 呈显著负相关。Qiao 等［16］研究结果显示，LINC00673 可充当miR-515-5p 的海绵来上调微管亲和调控蛋白激酶4表达，进而在乳腺癌中发挥促癌作用。基于既往研究结果，推测LINC00511 在子宫内膜癌中发挥促癌作用可能是通过调控miR-515-5p 及相关蛋白表达而实现的，有待今后基础研究证实。部分研究［17-18］显示，治疗方式、临床分期、淋巴结转移、肌层浸润深度等均有可能是影响子宫内膜癌病人预后的因素，而本研究结果中仅LINC00511、miR-515-5p、临床分期与3 年生存率有关，且是影响子宫内膜癌病人预后的独立因素。表明LINC00511、miR-515-5p的检测水平异常可提示子宫内膜癌病人不良预后，二者有可能成为评估病人预后的生物标志物。与既往研究的差异可能与研究纳入样本量、地域、纳入样本时因纳入排除标准而产生的选择偏倚等因素有关，今后将仅进一步纳入更多样本量进行验证。

综上，子宫内膜癌病人血清LINC00511高表达，miR-515-5p 低表达，二者与肌层浸润深度、淋巴结转移、临床分期及预后有关。LINC00511、miR-515-5p 可能成为新的子宫内膜癌肿瘤标志物，但在子宫内膜癌诊断、治疗及预后评估中的具体临床应用价值仍有待大样本研究验证。且本研究随访时间相对较短，需深入研究得出更为准确的结论。