微柱凝胶技术检测血型IgG抗体效价及血清C反应蛋白、血红蛋白在新生儿ABO溶血病早期诊断中的价值分析

陈 平,葛利丽,赵莹莹

(1.淮安市第二人民医院检验科,江苏 淮安 223002;淮安市第二人民医院血液净化中心,江苏 淮安 223002)

新生儿ABO溶血病(ABO hemolytic disease of the newbor,ABO-HDN)指的是因母婴ABO血型不合引发的新生儿溶血症状,这种情况多发生于母亲O型血,婴儿则为A、B型血时。其具体致病机理为母体内产生与胎儿血型抗原不匹配的抗体,且抗体通过胎盘进入新生儿体内,进而引发婴儿免疫性溶血[1-4]。相关数据显示,我国ABO-HDN发病概率在0.8%左右,ABO-HDN患儿以不同程度黄疸、水肿以及贫血为典型特征,对机体健康存在一定影响[5]。光照、静脉注射免疫球蛋白等方式是减轻溶血的主要手段,部分病情严重患儿可能需要进行换血治疗。医务人员建议对ABO-HDN进行早期诊治,确保患儿能够获得较好的预后,截至目前,ABO-HDN诊断的公认标准仍需要以新生儿时期的检查为主[6]。但部分基层医院设备不完善,医务人员预防意识薄弱,可能在患儿表现出具体症状后才进行相应检查,容易延误病情,对患儿身体与家庭带来负担[7-8]。本研究拟从母血以及脐带血标本出发,通过对107例高风险人群母血中的免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)抗体效价以及脐血血清C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、血红蛋白(Hemoglobin,Hb)进行检测,分析其在早期ABO-HDN诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性收集2020年4月至2022年4月淮安市第二人民医院检验科收入的按时产检且正常分娩的107例孕妇(O型血且与丈夫ABO血型不合)临床资料。其中,孕妇年龄为20～40岁,平均(28.70±7.01)岁;分娩时孕周为36～41周,平均(38.34±1.70)周;产妇类型为经产妇29例,初产妇78例;新生儿性别为男60例,女47例;分娩方式为顺产61例,剖宫产46例。本研究符合《赫尔辛基宣言》内容。诊断标准:参照《新生儿疾病诊疗规范》[9]中关于ABO-HDN定义拟定诊断标准,即母婴血型不合,新生儿出生后黄疸出现过早且随病情加重,出生后新生儿外周静脉血溶血三项试验结果证实为ABO-HDN。溶血三项试验:于新生儿出生后3 d空腹状态下抽取外周静脉血,进行直接抗人球蛋白试验(Direct antiglobulin test,DAT)、游离与放射试验以及红细胞抗体散射试验。当DAT或游离与放射试验单项阳性时判断为疑似HDN,需根据患儿黄疸情况以及总胆红素确诊;当患儿DAT、游离与放射试验、红细胞抗体散射试验均为阳性存在2～3项阳性或者红细胞抗体散射试验单项阳性时可确诊为ABO-HDN。病例纳入标准:①孕期于本院按时产检且在本院生产;②母体为O型血,且存在与丈夫ABO不合情况;③分娩时孕周在36周以上(含36周);④单胎妊娠且分娩时未出现宫内窘迫、窒息等;⑤完成相应母血血型IgG抗体效价检测以及脐血血清检测,新生儿出生后进行三项溶血检查。排除标准:①新生儿除A、B、AB外其他血型,有其他同族免疫溶血;②新生儿合并其他感染疾病或存在败血症等血液系统疾病;③合并先天发育不良、先天心脏疾病、免疫功能异常等;④母体存在两个以上性伴侣;⑤临床资料缺失或检查结果不清晰。

1.2 检测方法

1.2.1 母血血型IgG抗体效价检测:采用微柱凝胶技术在分娩前对孕晚期产妇进行血清IgG抗-A(B)抗体效价检测,具体操作步骤如下:于清晨空腹状态下取受试者静脉血6 ml,3000 r/min离心15 min,取上层血清并加入样本释放剂,混合摇匀,37 ℃水浴30 min破坏血清内免疫球蛋白M抗体,将标本用0.9%氯化钠溶液倍比稀释(1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128、1∶256、1∶512),配置标准红细胞悬液加入抗人球蛋白检测卡,将倍比稀释后标本加入该卡,于37 ℃孵育15 min,取出后1500 r/min离心9 min。结果≥1∶64可拟定为HDN阳性。

1.2.2 脐血血清CRP、Hb检测:取新生儿脐带血3 ml,3000 r/min离心10 min,选全自动免疫及时检测分析仪(贝克曼库尔特有限公司,型号:UniCel DxI800)以乳胶增强透射免疫比浊法测CRP水平,试剂盒选仪器配套;选全自动血液分析仪(雷度米特医疗设备有限公司,型号:ABL90)以比色法测Hb水平。

2 结 果

2.1 107例新生儿静脉血溶血三项试验结果分析 在依据纳入排除规则选取的107例新生儿中,总共有50例确诊为ABO-HDN,发生率为46.73%。母婴血型为O-A型、O-B型、O-AB型的新生儿分别有49、46、12例,通过溶血三项试验结合临床体征确诊为ABO-HDN的分别有24例(54.55%)、22例(53.66%)、4例(23.53%)。见表1。

表1 107例新生儿静脉血溶血三项试验结果分析[例(%)]

2.2 两组受试者IgG抗体效价检测结果比较 根据新生儿出生后3～5 d外周静脉血溶血三项结果将其分为ABO-HDN组(50例)与无ABO-HDN组(57例)。两组IgG抗体效价检测结果比较有统计学差异,ABO-HDN组患儿IgG抗体效价≥1∶64的占比显著高于无ABO-HDN组受试者,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组受试者IgG抗体效价检测结果比较[例(%)]

2.3 两组血清CRP、Hb检测结果比较 ABO-HDN组脐血血清CRP水平显著高于无ABO-HDN组,Hb水平显著低于无ABO-HDN组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 两组血清CRP、Hb检测结果比较

2.4 相关指标诊断ABO-HDN的ROC曲线分析 对IgG抗体效价检测、血清CRP、Hb水平做ROC曲线分析可知,IgG抗体效价检测、血清CRP、Hb水平诊断ABO-HDN的AUC为0.861、0.868、0.910,截断值为1.500、0.305 mg/L、127.955 g/L,见表4。

表4 相关指标诊断ABO-HDN的ROC曲线分析

3 讨 论

ABO-HDN发生于胎儿时期,由于母亲与胎儿血型不合,胎儿拥有母体不具备的父源性血型抗原,当这种抗原经胎盘进入母体后,母体产生抵抗性血型IgG抗体,这种抗体与胎儿红细胞表面抗原结合后会被溶酶体破坏从而导致溶血[10]。截至目前,人类已知的400多种血型抗原中,有60多种可发生溶血反应,其中以ABO血型不合导致的HDN最为常见。据统计,约有20%的新生儿有ABO血型不合的情况[11-12]。黄疸是ABO-HDN的典型病症,与其他原因导致的黄疸相比,ABO-HDN引发的黄疸出现时间早且进展快,极易发展为高胆红素血症,严重危害新生儿健康[13-14]。临床治疗ABO-HDN方式较多,妊娠期血液抗体干预、宫内血管内输血等对降低溶血风险均有一定作用,但想要最大程度地改善ABO-HDN干预效果,还需要尽可能地实现对该病的早期诊断。

溶血三项实验是临床应用频率最高且最为精准的ABO-HDN诊断方案,但其多用于出生3～5 d胎儿,对部分病情进展较快患儿而言,由于其诊断较晚,在接受人工干预前患儿可能已经产生了不可逆的神经功能损害[15]。在本研究中,溶血三项实验结果显示,依据纳入排除规则选取的107例新生儿中,共有50例确诊为ABO-HDN,发生率为46.73%。母婴血型为O-A型、O-B型、O-AB型分别有49、46、12例,通过溶血三项试验结合临床体征确诊为ABO-HDN的分别有24例(54.55%)、22例(53.66%)、4例(23.53%)。本研究结果显示,ABO-HDN组、无ABO-HDN组IgG抗体效价检测结果有统计学差异,ABO-HDN组患儿IgG抗体效价≥1∶64的占比为88.00%显著高于无ABO-HDN组受试者的15.79%。这说明IgG抗体效价与ABO-HDN有紧密联系,原因为母体受到胎儿红细胞产生的外源性抗原刺激时可出现IgG升高,因此在多数情况下,IgG抗体效价升高意味着新生儿出现ABO-HDN的风险升高[16-17]。

此外,在本研究中,ABO-HDN组脐血血清CRP水平为(0.46±0.21)mg/L显著高于无ABO-HDN组,Hb水平为(110.62±18.37)g/L显著低于无ABO-HDN组,这说明脐血血清CRP水平与Hb水平同样与ABO-HDN发病有一定联系,这与刘娟等[8]研究所得结论一致。推测原因在于当胎儿出现ABO-HDN时,红细胞大量、迅速被破坏,红细胞破裂后Hb溢出至血液中,无法与合适珠蛋白结合从而变为游离的Hb,此时游离的Hb无法被检测到,因此在脐带血中检测的Hb水平会出现相应降低[18-19]。CRP作为临床常用炎症指标,多在机体感染、创伤时出现异常表达。目前关于CRP与ABO-HDN发病的关系尚未研究透彻,但有学者认为,当母体IgG抗体经胎盘进入胎儿血液循环时,单核-巨噬细胞系统开始工作,免疫与调节免疫功能被激发,CRP可以出现快速升高[20]。

综上所述,与无ABO-HDN新生儿相比,ABO-HDN患儿IgG抗体效价以及血清CRP、Hb存在异常表达,采用微柱凝胶技术检测血型IgG抗体效价以及检测脐血血清CRP、Hb对诊断早期ABO-HDN有一定临床参考价值。本研究不足之处在于纳入样本较少,且来源单一,未来还需开展大样本,多中心研究证实结论。