安乃近残留溶剂甲醇气相色谱检测方法

张晓灿，康 倩，李焕君，王莉莉，王 丽，马凤霞，刘晓莲，马宁宁

（河北冀衡药业股份有限公司，河北 衡水 053000）

0 引 言

安乃近（Metamizole sodium） 为老牌解热镇痛类原料药，由于其疗效好，使用方便，价格低廉，在医学上发挥了重大作用。可用于头痛、神经痛、偏头痛、肌肉痛、关节痛和痛经等症状；如出现高热，可用于解热，安乃近极易溶于水，作用较为迅速，解热镇痛作用强而快，在解热镇痛类药中是为数不多的既能口服又可注射的品种；还可以用于滴鼻，尤其小儿鼻腔内毛细血管丰富，药液接触面大，易于吸收，使用时药效快，作用强。

安乃近合成工艺一般以吡唑酮为基础原料，经甲基化反应制得安替比林，再经亚硝化还原成4-氨基安替比林，然后经甲酰化和甲基化得4-甲氨基安替比林，最后经缩合反应得到安乃近。生产过程中用到的甲醇会残留到安乃近中，但各国药典均没有关于安乃近残留溶剂甲醇的检测方法的报道，按照国际制药指南ICHQ3C，甲醇属于对人体有害的有机溶剂，故应对残留溶剂给予控制，本实验开发了安乃近残留溶剂甲醇的定量检测方法，为安乃近生产提供重要的理论依据，同时也达到了提高安乃近质量的目的。

1 实验部分

1.1 仪器及试剂

1.1.1 仪 器

QUINIX124-1CN 分析天平，赛多利斯。

Clarus 580 气相色谱仪，PE 气相色谱仪。

SPN-300 高纯度氮气发生器，北京中惠普分析技术研究所。

SPH-300 高纯度氢气发生器，北京中惠普分析技术研究所。

SPB-3 全自动空气源，北京中惠普分析技术研究所。

1.1.2 试 剂

N,N-二甲基甲酰胺，天津大茂。

安乃近，河北冀衡药业股份有限公司。

甲醇，默克。

1.2 色谱条件

色谱柱，Agilent DB-WAX，30 m×0.32 mm×0.50 μm。

载气。

氮气。

检测器，FID。

柱温，起始温度55 ℃，以每分钟3 ℃的速率升温至80 ℃，然后以5.0 ℃的速率升温至140 ℃保持5 min。

检测器温度，230 ℃。

进样器温度，200 ℃。

流速，20 mL/min。

进样量，1.0 μl。

量程，1。

载气流速，3。

计算方法，外标法。

2 结果与讨论

2.1 定性分析

2.1.1 溶液配制

标准溶液：精密称取0.05 g 甲醇于100 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。

供试试液：精密称取2 个0.5 g 样品分别于10 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀。

2.1.2 操作步骤

分别吸取标准溶液1.0 μL，重复进样5 次；分别吸取样品溶液1.0μL 进样。

计算式如下：

式中：As样品溶液中甲醇的峰面积；Ar 标准溶液中甲醇的峰面积；Wr 配制标准溶液称取甲醇的质量；Ws 称取样品的质量。

2.2 气相色谱方法学考察

2.2.1 检测方法的系统适用性

对照液：精密称取甲醇0.05 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。

取对照溶液1.0 μL 重复进样6 次，记录色谱图，6 次结果的平均值为77 353.5，RSD 为1.55%，＜5.0%，符合规定。系统适用性检测结果见表1。

表1 系统适用性检测结果Table 1 Testing result of system suitability test

2.2.2 检测方法的专属性

吸取DMF1.0 μL 进样，记录色谱图。与系统适用性中的溶液1 进行比较。从溶剂图谱未检测到甲醇，对甲醇的测定没有影响，专属性符合规定。

2.3 甲醇检测限和定量限的测定

2.3.1 定量限

吸取系统适用性项下对照液1.0 mL 于10 mL量瓶中，用DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为定量限的储备液；吸取定量限储备液0.8 mL 于50 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀。吸取1.0 μL 重复进样6 次，记录色谱图。

定量限重复性，甲醇面积平均值为190，面积RSD 为7.6%，＜10.0%；甲醇的信噪比均介于8～15，此时的浓度0.742 4 μg/mL 为甲醇定量限浓度。

2.3.2 检测限

精密称取甲醇0.05 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照液。吸取对照液1.0 mL 于10 mL 量瓶中，用DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为定量限的储备液；吸取定量限储备液0.8 mL 于50 mL 容量瓶中，用DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀，作为定量限溶液。吸取定量限溶液2.5 mL 于10 mL 容量瓶中，用DMF溶解并稀释至刻度，摇匀作为检测限溶液。吸取检测限溶液1.0 μL 注入气相色谱仪，记录色谱图，甲醇峰的信噪比为3.04，介于2～4，保留时间为1.810 min，此时的浓度0.19 ug/mL 为甲醇检测限浓度。

2.4 线性及线性范围的测定

在甲醇残留溶剂的定量限至甲醇残留溶剂限度的150%之间，相关系数R≥0.999，依次配制溶液，分别用DMF 配制成6 个不同浓度的溶液，甲醇 在 浓 度0.7424 ～721 μg/mL（LOQ- 限度 的150%） 具有良好的线性，线性方程为Y=171.24x+172.72，R2=0.999 8，R=0.999 9。甲醇标准溶液不同浓度峰面积见表2。

表2 甲醇标准溶液不同浓度峰面积Table 2 Table of different concentration peak areas of methanol standard solution

甲醇溶液线性关系如图1 所示。

图1 甲醇溶液线性关系Fig.1 Linear relationship of methanol solution

2.5 重复性的测定

吸取溶剂1.0 μL 注入气相色谱仪中，记录色谱图。

吸取检测限下的对照液1.0 μL，重复进样5次，记录色谱图。

甲醇对照的平均值为82 546.4，RSD 为0.94%，＜5.0%，符合规定。甲醇对照液重复性检测结果见表3。

表3 甲醇对照液重复性检测结果Table 3 Testing result of methanol standard solution repeatability test

取一批安乃近样品，称取6 个样，各0.5 g，分别于10 mL 容量瓶中，用DMF 稀释至刻度，摇匀。分别吸取1.0 μL，注入气相色谱仪中，记录色谱图。计算样品中检测到甲醇的平均值为40×10-6，RSD 为7.62%，＜10%，符合规定。安乃近样品的甲醇检测结果见表4。

表4 安乃近样品的甲醇检测结果Table 4 Methanol testing result of three samples of metamizole sodium samples

2.6 样品溶液稳定性

吸取1.0 μL DMF 注入气相色谱仪中，精密称取甲醇0.05 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

分别称取安乃近样品二个样，各0.5 g，分别于10 mL 容量瓶中，用DMF 稀释至刻度，摇匀。

分别吸取溶剂、对照溶液、样品溶液各1.0 μL，注入气相色谱仪中，记录色谱图。

标准溶液、样品溶液、溶剂分别在0、4、8 h进样，记录色谱图。

溶剂、样品溶液、标准溶液在0、4、8 h 比较稳定；对照溶液的RSD 为1.5%，样品中甲醇检测结果的RSD 为3.5%，＜5.0%，符合规定。

2.7 准确度的测定

在甲醇残留溶剂限度的80%、100%、120%3个水平项下。

（1） 空白溶剂，吸取1.0μL DMF 注入气相色谱仪中，空白溶剂中未检测到甲醇。

（2） 空白样品，精密称取安乃近0.5 g 于10 mL 量瓶中，用DMF 稀释至刻度，摇匀。吸取1.0 μL 注入气相色谱仪中，样品中未检测到甲醇。

（3） 标准储备液，精密称取甲醇对照0.25 g于50 mL 容量瓶中，用DMF 稀释至刻度，摇匀。

（4） 进一针样品+ 标准溶液（甲醇限度的80%、100%、120%3 个水平）。

（5） 进一针标准溶液(甲醇限度的80%、100%、120%3 个水平)。

分别吸取各溶液1.0 μL 注入气相色谱仪，进一针样品+标准溶液、标准溶液（相应杂质限度的80%、100%、120%3 个水平），每个浓度取3 次，分别进样，记录色谱图，以平均回收率做为甲醇测定的准确度，各组分定量的准确度应在92%～108%之间，RSD 不得＞10.0%。

然后用（4） -（2） /（5） - （1） 来计算各个残留溶剂的回收率。

注：（4）：样品+标准品（2）：样品（5）：标准品（1）：空白。

平均回收率100.27%介于90%～108%； RSD为0.84%＜10.0%，符合规定。分别检测甲醇残留溶剂的80%、100%、120%，样品加标准溶液80%、100%、120%中的甲醇，最后测得甲醇的平均回收率为100.27%，RSD 为0.84%，符合规定。

2.8 耐用性

精密称取甲醇0.046 1 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。吸取1.0 μL 标准溶液，重复进样5 次。

精密称取安乃近0.781 3-0.281 2=0.500 1 g、0.781 7-0.281 6=0.500 1 g 于不同10 mL 容量瓶中，用DMF 稀释至刻度，摇匀。

吸取溶剂、标准溶液、样品溶液各1.0 μL，检测器、进样器、色谱柱、载气流速、柱温在正常条件下，注入气相色谱仪中，记录色谱图，耐用性项下正常条件检测结果见表5。

表5 耐用性项下正常条件检测结果Table 5 Testing result of robustness test on normal condition

2.8.1 柱温58 ℃

吸取2.8 项下溶液各1.0 μL，在其他条件不变，柱温58 ℃条件下，注入气相色谱仪中，标准溶液重复进样5 次，记录色谱图，耐用性项下柱温58℃检测结果见表6。

2.8.2 柱温62 ℃

精密称取甲醇0.046 8 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。

精密称取安乃近0.500 1 g、0.500 0 g 于不同10 mL 容量瓶中，用DMF 稀释至刻度，摇匀。

分别吸取溶剂、标准溶液、样品溶液各1.0 μL，在其他条件不变，柱温62 ℃条件下，注入气相色谱仪中，标准溶液重复进样5 次，记录色谱图，耐用性项下柱温62 ℃检测结果见表7。

表7 耐用性项下柱温62 ℃检测结果Table 7 Robustness testing result of column temperature 62 ℃

由表7 可知，柱温在60、58 和62℃条件下，样品均未检测到甲醇，甲醇的RSD＜5.0%，符合规定。

2.8.3 进样口温度

进样口温度在200、195 和205 ℃条件下进行。

2.8.3.1 进样口195 ℃

分别吸取柱温62 ℃项下的溶剂、标准溶液、样品溶液各1.0 μL，在其他条件不变，进样口温度195 ℃条件下，注入气相色谱仪中，标准溶液重复进样5 次，记录色谱图，耐用性项下进样口195℃检测结果见表8。

表8 耐用性项下进样口195℃检测结果Table 8 Robustness testing result of injection port 195 ℃

2.8.3.2 进样口200 ℃（同柱温60 ℃）

精密称取甲醇0.046 1 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。

精密称取安乃近0.500 1 g、0.500 1 g 于不同10 mL容量瓶中，用DMF 稀释至刻度，摇匀。

分别吸取溶剂、标准溶液、样品溶液各1.0 μL，在正常条件下，注入气相色谱仪中，标准溶液重复进样5 次，记录色谱图，耐用性项下进样口200 ℃检测结果见表9。

表9 耐用性项下进样口200 ℃检测结果Table 9 Robustness testing result of injection port 200 ℃

2.8.3.3 进样口205 ℃

精密称取甲醇0.044 7 g 于100 mL 容量瓶中，用DMF 稀释至刻度，摇匀，作为标准溶液。

精密称取安乃近0.500 1 g、0.500 1 g 于不同10 mL 容量瓶中，用DMF 稀释至刻度，摇匀。

分别吸取溶剂、标准溶液、样品溶液各1.0 μL，在其他条件不变，进样口205 ℃条件下，注入气相色谱仪中，标准溶液重复进样5 次，记录色谱图，耐用性项下进样口205 ℃检测结果见表10。

表10 耐用性项下进样口205 ℃检测结果Table 10 Robustness testing result of injection port 205 ℃

由表10 可知，进样口温度在200 ℃、195 ℃和205 ℃条件下，样品中均为检测到甲醇，甲醇的RSD 为0，＜5.0%，符合规定。

2.9 3 批样品的测定

取3 批样品，按照2.1.1 项下描述的方法进行检测，3 批样品残留甲醇测定的结果分别为28×10-6，16×10-6，22×10-6。安乃近样品中残留甲醇含量检测结果见表11。

表11 安乃近样品中残留甲醇含量检测结果Table 11 Residual methanol content in the metamizole sodium samples

3 结 语

本文以DB-WAX 柱（30 m×0.32 mm×0.50 um），FID 检测器，在程序升温条件下进行检测安乃近残留溶剂甲醇的含量，具有操作简单、误差小，方便实验室操作的优点。使用DMF 作溶剂，溶剂峰与甲醇能很好的分离，该气相色谱法检测甲醇溶液线性关系良好，线性方程Y=171.24 x+172.72，R2=0.999 8，R=0.999 9。该方法能准确可靠的测定安乃近残留溶剂甲醇的含量，为提高安乃近产品的质量提供了保障。