泛素E3连接酶膜相关锌指蛋白2高表达与胃癌临床分期、侵袭性及预后的相关性

武伟龙 洪永贵 温艳艳

我国是胃癌的高发国,每年新增胃癌病例数已超过90万。胃癌具有较高的侵袭性及易转移性,故胃癌患者预后一般较差[1-2]。泛素-蛋白酶体系(ubiqutin proteasome system,UPS)是细胞内蛋白质降解的主要途径,关系到多种疾病的发生与发展[3]。泛素连接酶E3是UPS重要的组成成分,UPS关键蛋白E3异常可能与癌症的发生及发展有关[4]。泛素E3连接酶膜相关锌指蛋白2(membrane-associated RING CH2,MARCH2)是一种E3泛素连接酶,参与DNA修复、信号转导等生理活动[5]。为研究胃癌组织内MARCH2蛋白表达水平,及其与患者预后之间的关系,我院开展如下研究。

1 材料与方法

1.1 一般资料

胃癌组织及癌旁组织标本来自2019年8月至2021年7月间医院收治的96例行胃癌根治术治疗的患者。所有患者术前均未接受过其他抗癌相关治疗,病理标本经病理科医生鉴定为胃癌,其中病理组织类型:Ⅰ～Ⅱ级45例,Ⅲ～Ⅳ级51例;浸润深度:T1～T2 19例,T3～T4 77例;淋巴结转移37例,无淋巴结转移59例;AJCC TNM分期:Ⅰ～Ⅱ期40例,Ⅲ～Ⅳ期56例;肿瘤大小:<3 cm 23例,3～7 cm 39例,>7 cm 34例。96例患者术后生存资料均由随访获得,随访时间5～47个月,平均(34.51±6.16)个月。

1.2 免疫组织化学检测

检测试剂包括兔抗人MARCH2多克隆抗体(美国Abcam公司),SP免疫组化超敏染色试剂盒。

采用免疫组化SP法染色,高压抗原修复,使用1 mmol/L EDTA(PH=9.0)修复液,一抗为MARCH2(1∶100),严格试剂盒相关说明进行操作,MARCH2阳性片作为阳性对照组,PBS代替一抗作为阴性对照。

结果判定:每张切片随机观察5个具有代表意义的高倍镜,每个高倍镜视野计数150～200个细胞,采用免疫反应评分法,结合着色细胞占比与着色强度,表示蛋白表达水平。着色细胞占比计分规则:着色细胞占计数细胞百分率≤5%、>5%～25%、>25%～50%、>55%～75%、>75%～100%分别得0分、1分、2分、3分、4分。着色强度计分规则:未着色、淡黄色、黄色、棕色分别得0分、1分、2分、3分。总得分0分为阴性,1～4分为弱阳性(+)、5～8分为中等阳性(++)、9～12分为强阳性(+++)。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 胃癌组织与癌旁组织内MARCH2阳性表达情况比较

胃癌组织内MARCH2阳性表达率为72.92%,高于癌旁组织的8.33%,差异具有统计学意义(χ2=83.001,P<0.001),见表1。

表1 胃癌组织与癌旁组织内MARCH2阳性表达情况比较/例

2.2 胃癌组织内MARCH2表达情况与患者病理特征的关系

胃癌患者癌灶组织内MARCH2阳性表达与胃癌浸润深度以及淋巴结转移有关(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期以及分化程度无关(P>0.05),见表2。

表2 胃癌组织内MARCH2表达情况与患者病理特征的关系/例

2.3 高表达MARCH2与胃癌患者预后的关系分析

将胃癌组织内MARCH2 中、强阳性表达者纳为MARCH2强阳性表达组,其余患者纳为对照组。随访5～47个月,平均随访(34.51±6.16)个月,绘制生存曲线发现,强阳性组患者生存时间短于对照组,差异具有统计学意义(Rank=8.923,P=0.003)。见图1。

图1 不同MARCH2表达强度胃癌患者生存曲线

3 讨论

UPS是细胞内蛋白质降解的主要途径,在维持细胞功能及稳定性中起着重要作用[6-7]。MARCH2是MARCH家族的成员之一,具有E3连接酶活性的RING-CH结构域,MARCH蛋白可识别各种膜蛋白,尤其是免疫相关的细胞膜表面受体以及泛素化蛋白。作为包含2个跨膜段的MARCH家族成员,MARCH2主要位于细胞膜、内质网,能调节与其共位的膜蛋白,在控制膜蛋白转换中扮演重要角色[8-9]。Xia D等[10]研究发现,敲除结肠癌HCT116细胞系的HARCH2基因后,癌细胞体外增殖将被抑制,同时自噬及凋亡增强。提示MARCH2与癌症的发生及发展可能存在密切联系。

我院研究发现,与癌旁组织相比,胃癌组织内MARCH2阳性表达率明显上升,MARCH2染色主要着色于肿瘤细胞胞质或胞核,呈弥漫性棕色颗粒状。对比不同病理特征胃癌患者胃癌组织内MARCH2阳性表达情况发现,浸润深度T3～T4患者胃癌组织内MARCH2阳性表达率高于T1～T2者,且淋巴转移者胃癌组织内MARCH2阳性表达率高于无淋巴转移者。说明MARCH2与胃癌的浸润深度及淋巴结转移间存在密切联系[11]。但受到研究设计及研究条件的限制,本文并未对MARCH2在胃癌中的具体作用机制进行研究。但门慧[12]利用体外实验发现,沉默MARCH2后,胃癌BGC823细胞系体外增殖及侵袭能力明显下降。通过裸鼠尾静脉实验表明,沉默MARCH2后,癌细胞肺转移率下降,证实MARCH2是一个促癌基因。

此外,本研究对96例胃癌患者进行4年的随访发现,MARCH2高表达的胃癌患者生存时间明显短于对照组,说明MARCH2高表达还关系到患者预后。

综上所述,胃癌组织内MARCH2阳性表达率明显上升,且MARCH2阳性表达与肿瘤浸润深度及淋巴结转移间存在密切联系,MARCH2高表达者预后生存时间更短,提示MARCH2可能参与胃癌的发生及发展,但其具体作用机制尚待研究。