PD-L1在浸润性肺腺癌各亚型中的表达及其与预后的关系

陶珍珍 贺敏超 冯灵杰

肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)是肺癌的主要病理类型,LUAD的治疗以放疗、化疗及手术治疗为主,但患者的总体生存率无明显改善[1]。近年来随着人们对肿瘤细胞免疫逃逸机制、肿瘤与免疫细胞相互作用的深入了解,抗肿瘤治疗已进入免疫治疗新时代。程序性死亡分子-1配体(PD-L1)作为抑制性免疫检查点,可对细胞毒T细胞免疫活性进行抑制,对机体免疫应答过程进行抑制,在免疫逃逸及肿瘤发生、发展中发挥重要作用[2-3]。有研究指出,PD-L1在多种恶性肿瘤组织中的表达高于正常组织,且PD-L1高表达与肺癌分期、淋巴结转移及预后具有一定关系[4]。鉴于此,本研究将探讨PD-L1在浸润性LUAD各亚型中的表达情况及其与预后的关系,以期为浸润性LUAD患者的预后的评估提供参考。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2017年9月至2019年8月于焦煤集团中央医院治疗的135例浸润性LUAD患者临床资料。本研究获医学伦理委员会批准。患者中男性75例,女性60例;年龄32～78岁,平均年龄(60.38±3.64)岁;肿瘤TNM分期:Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期各有19例、47例、39例、30例。

1.2 入选标准

纳入标准:①患者临床资料较为完整;②均经病理检查确诊为浸润性LUAD。排除标准:①合并严重心脑血管疾病;②合并其他原发或多发肿瘤;③精神或行为异常,无法积极配合诊治。

1.3 方法

1.3.1 试剂 Abcam科技有限公司提供兔抗人PD-L1单克隆抗体(ab213524)。

1.3.2 免疫组化方法 石蜡标本连续3 μm切片,并向烤箱(60℃)中置入烘烤3 h,取出后进行二甲苯脱蜡处理,递减梯度酒精水化,蒸馏水冲洗,PBS洗3次,2次/min;向有EDTA碱性修复液的高压锅中置入切片,抗原修复3 min,室温冷却20 min,暴露抗原,蒸馏水冲洗,PBS洗3次,2次/min,滴加非免疫羊血清封闭抗原,PBS洗3次,2次/min,并分别滴加一抗,室温孵育60 min,向切片滴加通用型二抗,室温孵育20 min,DAB溶液显示3～5 min,苏木精复染,常规酒精梯度脱水,二甲苯固定,并向烤箱(60 ℃)置入烘烤20 min,中性树胶封片,于显微镜下观察表达情况,采用PBS代替一抗做阴性对照,采用已知阳性做对照。

1.3.3 结果判断标准[5]PD-L1以细胞膜或细胞质呈棕褐色或棕黄色颗粒判断为阳性,以肿瘤细胞中PD-L1阳性细胞所占比例≥50%判断为阳性,反之为阴性。

1.4 评价指标

(1)分析PD-L1在浸润性LUAD各亚型中的表达情况。(2)随访2年,每3个月随访1次,随访方式包括电话随访及电子病历等方式,统计患者2年总生存率(OS),分析PD-L1与浸润性LUAD患者预后的关系。

1.5 统计学方法

采用SPSS 22.0软件分析数据,计数资料以百分数和例数表示,用χ2检验;多因素分析采用Logistic回归方法,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PD-L1在浸润性LUAD各亚型中的表达情况

135例浸润性LUAD患者中腺泡型、贴壁型、乳头型、微乳头型、实体型各有92例、14例、10例、9例、10例。腺泡型、贴壁型、乳头型、微乳头型、实体型病理亚型的PD-L1阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05);实体型的浸润性LUAD患者中PD-L1阳性表达率最高。见表1。

表1 PD-L1在浸润性LUAD各亚型中的表达情况(例,%)

2.2 PD-L1与浸润性LUAD患者预后的关系

随访2年,135例浸润性LUAD患者中2年存活患者有78例,2年OS为57.78%(78/135)。PD-L1阳性患者生存率为26.83%(11/41),低于PD-L1阴性患者的71.28%(67/94),差异有统计学意义(χ2=23.119,P=0.000)。

2.3 PD-L1与浸润性LUAD患者预后的关系

采用Logistic回归分析显示,PD-L1为影响浸润性LUAD患者预后的独立危险因素(P<0.05且OR≥1)。见表2。

表2 PD-L1与浸润性LUAD患者预后的关系

3 讨论

在浸润性LUAD的发生、发展中,免疫逃逸机制发挥重要作用,但目前关于PD-1/PD-L1信号通路的具体机制尚未完全明晰。PD-L1属于Ⅰ型跨膜糖蛋白,PD-L1基因定位于9号染色体上,能够被IFN-γ等细胞因子诱导表达,在产生肿瘤免疫应答中起到重要作用[6-7]。PD-1为PD-L1受体,活化的PD-1结合PD-L1会导致活化T细胞凋亡及周期阻滞,导致肿瘤细胞免疫逃逸,促使肿瘤细胞凋亡减少,导致肿瘤发生、发展[8-9]。

本次研究分析PD-L1在浸润性LUAD各亚型中的表达情况及其与预后的关系,发现不同病理亚型的PD-L1阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中实体型的浸润性LUAD患者中PD-L1阳性表达率最高。提示出实体型的浸润性LUAD患者可能是免疫治疗的潜在人群。PD-L1为PD-1主要配体,由Cd274基因编码,PD-L1表达于巨噬细胞、B细胞及T细胞等,也可在多种肿瘤细胞表面表达,PD-L1可与PD-1配体结合,促使肿瘤细胞逃避免疫清除[10-11]。肺癌的生物学行为及其发展、转归过程十分复杂,肿瘤免疫微环境在肺癌的发生、发展及转移中发挥了重要作用[12-13]。PD-L1表达于肿瘤浸润免疫细胞表面,参与肿瘤细胞免疫逃逸机制,且有研究指出,肿瘤浸润免疫细胞数量是判断患者预后的重要因子[14-15]。本次研究结果显示,随访2年,135例浸润性LUAD患者中存活患者有78例,2年OS为57.78%(78/135);PD-L1阳性患者生存率低于PD-L1阴性患者,采用Logistic回归分析显示,PD-L1为影响浸润性LUAD患者预后的独立危险因素(P<0.05且OR≥1)。提示出浸润性LUAD患者中PD-L1阳性表达时,患者预后不良,病死率较高,可通过测定PD-L1表达情况为浸润性LUAD患者的治疗提供指导,对患者预后进行评估。但本次研究中仅纳入135例浸润性LUAD患者,样本量小,且为回顾性分析研究,还有待临床深入分析研究PD-L1在浸润性LUAD各亚型中的表达情况及其与预后的关系,以更好地指导浸润性LUAD患者的临床治疗及预后预测。

综上所述,PD-L1在实体型浸润性LUAD中呈阳性表达,且PD-L1阳性表达是造成浸润性LUAD患者不良预后的危险因素,可作为浸润性LUAD患者的免疫治疗及预后评估的重要参考。