IL-6在甲状腺乳头状癌合并桥本甲状腺炎的淋巴结转移中的临床研究

褚茜茜 王 晖 马世红 王小龙 艾志龙

1.上海市徐汇区中心医院普外科，上海 200031；2.复旦大学附属中山医院普外科，上海 200032

随着甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma，PTC）和桥本甲状腺炎（Hashimoto thyroiditis，HT）发病率的上升[1]，PTC 并发HT 在临床上也逐渐增多。目前国内外许多学者已经试图从病因、免疫学等多个检测手段深入探索两者之间的联系[2-3]。有研究发现PTC 常伴有不同程度的甲状腺炎的表现，HT 中的某些免疫炎症因子可能对PTC 的淋巴结转移起到一定的限制作用[4-5]，也有研究揭示HT 中有大量的T 细胞、肥大细胞以及巨噬细胞等浸润，这些细胞中既有能分泌并破坏甲状腺正常组织形成非典型性增生结节的细胞因子，又有能促进正常组织癌变的细胞因子[6-7]。然而临床各执己见，对于两者之间关系的阐述至今都缺乏足够的循证。本研究通过免疫组化的方法比较白介素-6（interleukin-6，IL-6）在PTC 合并HT 淋巴结转移阳性及阴性患者在年龄、性别、肿瘤大小、包膜有无侵犯、临床分期，以及正常甲状腺组织、癌旁HT 组织、癌组织等方面的异同，初步探讨IL-6 在HT 及PTC 中的表达情况。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取上海市徐汇区中心医院（我院）2019 年11 月至2021 年10 月住院行甲状腺手术患者80 例，所有入组患者临床资料的收集均得到我院医学伦理委员会批准。其中40 例为PTC 合并HT 有淋巴结转移患者（A 组），男8 例，女32 例，年龄21 ～58 岁，平均（38.33±4.15）岁，平均病程5.28 年，根据美国癌症联合会（AJCC）分期[8]方法：年龄≤55 岁者17 例，＞55 岁者23 例；肿瘤大小≤2 cm 者26 例，＞2 cm者14例；包膜有侵犯者26例，无侵犯者14例；TNM 临床分期Ⅰ～Ⅱ期27 例，Ⅲ～Ⅳ期13 例。另40 例为PTC 合并HT 无淋巴结转移患者（B 组），男7 例，女33 例，年龄19 ～59 岁，平均（39.13±4.09）岁，平均病程4.88 年，根据AJCC 分期方法：年龄≤55 岁者18 例，＞55 岁者22 例；肿瘤大小≤2 cm 者27 例，＞2 cm者13 例；包膜有侵犯者24 例，无侵犯者16 例；TNM 临床分期Ⅰ～Ⅱ期37 例，Ⅲ～Ⅳ期3 例。所有患者术前均无放疗或化疗史。两组患者一般资料（性别、年龄、病程、肿瘤大小、包膜有无侵犯、临床分期）比较，差异无统计学意义（P＞ 0.05），具有可比性。

1.2 方法

采用免疫组化ElivisionTM Plus 法检测患者正常甲状腺组织、癌旁HT 组织、癌组织标本IL-6 的表达。鼠抗人IL-6 购自Abcam 公司，所有标本经甲醛固定，石蜡包埋，4 μm 厚度连续切片，严格按照试剂盒说明做常规HE 染色及免疫组化染色，切片脱蜡水化，高温抗原修复两次，3% H2O2孵育，阻断剂阻断，加入一抗（浓度1 ∶200），4℃孵育过夜，二抗37℃孵育30 min，DAB 显色、脱水、透明、封片，观察。

1.3 观察指标及评价标准

随机选择5 个以上高倍镜视野，若胞质内发现淡黄色至棕褐色的颗粒物质，则为标记为阳性，计算阳性细胞占细胞总数的百分率，按照阳性细胞百分率计分，＜5%计为0 分，5%～25%计为1 分，26% ～50% 计 为2 分，51% ～75% 计 为3 分，＞75%计为4 分；显色强度对照色卡，以大多数阳性细胞呈现的颜色进行计分，未显色计为0 分，淡黄色计为1 分，棕黄色计为2 分，棕褐色计为3 分，将阳性细胞百分率和显色强度两者的计分相加，0 ～2 分为阴性（-），≥3 分为阳性（+）[9]。

1.4 统计学方法

运用SPSS 18.0 统计学软件进行分析，呈正态分布的计量资料用均数±标准差（s）表示，每两组间试验结果差异采用独立样本t检验；计数资料以[n（%）]表示，采用χ2检验、Fisher 确切概率法（双侧）检验。P＜ 0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组化染色结果

IL-6 免疫组化染色阳性主要在细胞膜或细胞浆中，呈淡黄色至棕褐色的颗粒状染色，两组患者的正常甲状腺上皮组织，IL-6 呈弱阳性染色，表达分布在细胞膜中，A 组的表达阳性率为5.00%（2/40），B 组的表达阳性率为5.00%（2/40）（图1A、2A）；IL-6 在癌旁HT 组织中的表达分布在细胞浆中（图1B、2B），呈阳性染色（淡黄色至棕黄色），A 组的表达阳性率为75.00%（30/40），B 组的表达阳性率为52.50%（21/40），A 组癌旁HT 组织IL-6 表达高于B 组，差异有统计学意义（χ2=4.381，P=0.036）；IL-6 在癌组织中的表达分布在细胞浆中（图1C、2C），呈阳性染色（棕黄色至棕褐色），细胞间质未见阳性染色，A 组的表达阳性率为95.00%（38/40），B 组的表达阳性率为80.00%（32/40），A组癌组织IL-6 表达高于B 组，差异有统计学意义（χ2=6.275，P=0.012）。

图1 免疫组化检测A 组患者IL-6 蛋白表达（40×）

图2 免疫组化检测B 组患者IL-6 蛋白表达（40×）

2.2 两组IL-6表达与临床病理指标关系

IL-6 在PTC 合并HT 的癌组织中的表达与患者的性别和年龄无关（P＞ 0.05），与肿瘤大小、淋巴结转移及临床分期有关（P＜ 0.05），见表1。IL-6在两组患者的癌旁HT 组织中的表达阳性率有明显差异，A 组高于B 组，差异有统计学意义（P＜ 0.05）；IL-6 在两组患者的癌组织中的表达阳性率有明显差异，A 组高于B 组，差异有统计学意义（P＜ 0.05），见表2。

表1 IL-6在PTC合并HT患者甲状腺癌组织中的阳性率比较

表2 IL-6在A、B组患者不同组织中表达水平的比较

3 讨论

PTC 是最常见的内分泌系统恶性肿瘤，其发生却涉及很多机制，其中细胞因子使得免疫功能紊乱而致病的机制一直受到学者的关注。IL-6 是机体内重要的细胞因子亚型之一，其作为一种多效性细胞因子，参与机体内多种疾病发生过程，有证据表明，IL-6 在过敏性荨麻疹、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、克罗恩病等疾病中水平明显升高；在亚急性甲状腺炎、Graves’病、胺碘酮诱发的甲状腺毒症等自身免疫性甲状腺疾病中也显著升高。很多学者通过比较甲状腺内静脉血和外周静脉血IL-6 含量，证实内分泌细胞会分泌和合成IL-6[11]，有研究发现HT 的女性血清中IL-6 水平有所增加，IL-6可以调节甲状腺细胞的分化，在甲状腺疾病中表达增强，诱导单核细胞趋化因子蛋白-1 在滤泡上皮细胞中产生，其参与多种内分泌疾病的发生发展[10]，在与淋巴细胞浸润程度及甲状腺细胞中的表达呈正相关。段宇等[11]还发现甲状腺表面含有IL-6等细胞因子受体，此类受体可通过抗原抗体复合物的形式，由gp130 介导传递信号，证明该信号通路与甲状腺癌相关，说明IL-6 促进了肿瘤的发生发展。现已发现，亚急性甲状腺炎、Graves’病和甲状腺功能亢进患者外周血中IL-6 含量均有异常变化，有学者在对自身免疫性甲状腺疾病进行IL-6 mRNA 表达的测定时还发现滤泡细胞中有表达IL-6 mRNA 的阳性细胞，且IL-6 mRNA 表达较强的细胞与免疫细胞聚集的部位恰好是甲状腺病理损伤程度较严重的部分，提示IL-6 mRNA 的表达与病理损伤和免疫细胞活化之间有正相关性联系。以上观点说明，在正常生理条件下甲状腺滤泡上皮细胞产生少量IL-6，但在肿瘤及炎症刺激下，滤泡细胞受淋巴细胞及其他调节因子的影响，可以异常产生IL-6。

本研究应用免疫组化方法对PTC 合并HT 的80 例患者的病理切片进行了表达水平的检测，结果显示IL-6 在正常甲状腺组织少量表达，与之前学者观点一致[12]，在癌旁HT 组织中的表达水平较正常甲状腺组织明显增高，染色呈淡黄至棕黄色，在癌组织中的表达水平更高，染色呈棕黄至棕褐色，淋巴结转移患者的IL-6 水平较淋巴结未转移患者高，说明IL-6 可能促进了PTC 及HT 的发生发展，对淋巴结转移也有促进作用，但其具体在HT 与PTC 之间的相关性，不能证实。本研究对患者性别、年龄、肿瘤大小、包膜有无侵犯、临床分级进行了数据分析，发现IL-6 的表达与年龄和性别无关，其肿瘤大小、包膜有无侵犯、临床分期等方面比较，差异有统计学意义（P＜ 0.05），说明IL-6 促进了肿瘤的生长，并且对肿瘤侵犯也有促进作用，其与临床分期有正相关性。

IL-6 调节甲状腺的机制尚不明确，由于其可通过自分泌和旁分泌等方式趋化和激活自身反应性T细胞、B 细胞、角质形成细胞等，抑制垂体分泌促甲状腺激素，诱导细胞增殖、调节转录因子、调节包括甲状腺滤泡上皮细胞在内的多种细胞发育，加重自身免疫系统紊乱，故有人提出，IL-6 对甲状腺的效应，可能是通过中枢调节而发挥核心作用的细胞因子之一[13]。然而，又有学者阐述，IL-6 不减少垂体分泌促甲状腺激素及其mRNA 的含量，也不影响促甲状腺素释放激素的分泌，其只是诱导B 细胞增殖分化产生IgG 等抗体，抑制部分甲状腺细胞的分化功能[14]，因此，推断IL-6 作为一种促炎症因子，可能是通过某反应通路，创造一个潜在微环境，影响甲状腺细胞本身，达到调节目的，此观点与上述观点明显冲突，具体原因待进一步研究。国外有研究表明[15]，甲状腺细胞表面含有IL-6 受体，此受体可以以lL-6R/SlL-6R 的形式存在于血液循环中，当IL-6/IL-6R 或IL-6/SIL-6R 复合物形成后，可通过膜信号蛋白gpl30 介导，可引起IL-6 的信号传递，与国内学者观点类似。但Yamazaki 等[16]发现，甲状腺滤泡上皮细胞仅表达微量的IL-6R mRNA 基因，细胞液中含量更低，也就是说IL-6 的信号传导并不依赖于膜信号蛋白gpl30 介导的信号通路。目前，越来越多的学者投入IL-6 等炎症因子的深入研究中，然而对肿瘤相关的炎症诱导及细胞免疫却是众说纷纭，对于IL-6 调节甲状腺的机制均缺乏足够的证据。

综上所述，本研究初步探讨IL-6 在PTC 合并HT 及淋巴转移中的表达及临床意义，为进一步了解其信号通路在免疫性甲状腺疾病及甲状腺癌发生发展过程中的作用提供基础，为甲状腺免疫性疾病及肿瘤的基因发生、发展机制及寻找与两者相关性的新基因和精准治疗提供新思路。