miRNA-34a联合miRNA-4530在乳腺癌中的表达及其对新辅助化疗疗效的预测

张 静 石义鹭 王 妍 张 洋 欧瑞津 闫 敏 王晓宇 孙 平

1.牡丹江医学院解剖教研室，黑龙江牡丹江 157000；2.牡丹江医学院附属红旗医院，黑龙江牡丹江 157000；3.牡丹江医学院病原教研室，黑龙江牡丹江 157000；4.牡丹江医学院基础医学院，黑龙江牡丹江 157000

尽管目前已有一些分子标志物可用于预测乳腺癌新辅助化疗疗效，但因价格昂贵而临床应用受限[1-2]。因此，临床急需准确、创伤小、可重复、并方便检测的新型标志物[3-4]。本研究探讨循环血miRNA-34a、miRNA-4530 水平与乳腺癌患者新辅助化疗效果的关系，以验证前期研究结果，为后续研究提供基础。并分析循环血miRNA-34a 水平、miRNA-4530 水平、miRNA-34a 联合miRNA-4530对乳腺癌新辅助化疗疗效的预测效能。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2020 年1—12 月经牡丹江医学院附属红旗医院就诊的70 例进行新辅助化疗的原发性乳腺癌患者，依据新辅助化疗疗效将完全缓解（complete remission，CR）和部分缓解（partial remission，PR）划分为敏感组，疾病进展（disease progression，PD）和稳定（stablize disease，SD）划分为耐药组，每组各35 例。敏感组患者年龄35 ～65 岁，平均（52.45±8.69）岁；病理分期：Ⅱ期20 例，Ⅲ期15 例；分子分型：Luminal A 型13 例，Luminal B 型10 例，人表皮生长因子受体-2（human epidermal growth factor receptor-2， HER-2）过表达型8 例，三阴型4 例。耐药组患者年龄36 ～66 岁，平均（52.85±8.46）岁；病理分期：Ⅱ期21 例，Ⅲ期14 例；分子分型：Luminal A 型14 例，Luminal B 型11 例，HER-2 过表达型7 例，三阴型3 例。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＞ 0.05），具有可比性。本研究通过医院医学伦理委员会批准，患者均知情同意。

纳入标准：均由病理检查确诊；临床分期为Ⅱ、Ⅲ期；年龄≥18 岁；预计患者生存期≥8 周，预计新辅助化疗周期为6 ～8 周。排除标准：既往接受过新辅助化疗者；合并有其他组织器官恶性肿瘤者。

1.2 方法

1.2.1 循环血miRNA-34a、miRNA-4530 的检测 分别于开始化疗前，第1 个、第2 个化疗周期结束，化疗结束时，所有患者抽取空腹肘正中静脉血液5 ～10 ml，真空采血管收集，室温静置30 min 后，4℃下1600 r/min 离心10 min 获得血浆，放置于-80℃备用。利用RT-RNA 法检测循环血miRNA-34a、miRNA-4530 表达。

1.2.2 循环血miRNA-34a、miRNA-4530 水平与乳腺癌患者新辅助化疗效果的关系 根据前述分组，利用SPSS 20.0 统计学软件，对敏感组和耐药组患者循环血miRNA-34a、miRNA-4530 水平进行对比分析，以验证前期研究结果，为后续研究提供基础。

1.2.3 循环血miRNA-34a、miRNA-4530 水平预测乳腺癌新辅助化疗疗效的效能 根据前述检测结果，利用SPSS 20.0 统计学软件，采用受试者工作曲线（receiver operating curve， ROC）分析循环血miRNA-34a水平、miRNA-4530 水平、miRNA-34a 联合miRNA-4530预测乳腺癌新辅助化疗疗效的效能[4]。

1.3 疗效评定标准

根据实体瘤疗效评估标准（solid tumor response evaluation criteria， RECIST），对所有纳入研究中的采用主流药物蒽环类+紫杉类（anthracyclines+taxoids，EC-T）化疗6 ～8 周期的乳腺癌患者进行评估。所有靶病灶完全消失为CR；靶病灶直径之和比基线水平减少至少30% 为PR；以整个研究过程中所有测量的靶病灶直径之和的最小值为参照，靶病灶直径之和相对增加至少20% 或出现一个或多个新病灶视为PD；靶病灶减小的程度未达到PR，增加的程度也未达到PD 水平，介于两者之间视为SD[5]。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0 统计学软件进行数据处理，计量资料用均数±标准差（s）表示，采用t检验及方差分析，计数资料用[n（%）]表示，采用χ2检验，P＜ 0.05 为差异有统计学意义。预测效能的分析使用ROC 曲线分析敏感度与特异度。

2 结果

2.1 不同病理分期、分子分型患者的循环血miRNA-34a、miRNA-4530的检测结果比较

病理分期Ⅱ期患者的循环血miRNA-34a、miRNA-4530 表达水平均高于Ⅲ期患者，差异有统计学意义（P＜ 0.05），分子分型Luminal A 型、Luminal B 型、HER-2 过表达型、三阴型患者的循环血miRNA-34a、miRNA-4530 表达水平均逐渐降低，差异有统计学意义（P＜ 0.05）。见表1。

表1 不同病理分期、分子分型患者的循环血miRNA-34a、miRNA-4530的检测结果比较（x ± s）

2.2 两组循环血miRNA-34a、miRNA-4530水平比较

敏感组患者的循环血miRNA-34a、miRNA-4530表达水平均高于耐药组，差异有统计学意义（P＜ 0.05），见表2。

表2 两组循环血miRNA-34a、miRNA-4530水平比较（x ± s）

2.3 循环血miRNA-34a、miRNA-4530水平预测乳腺癌新辅助化疗疗效的效能分析

循环血miRNA-34a、miRNA-4530 表达水平联合检测预测乳腺癌新辅助化疗疗效的敏感度、特异度高于单独检测，差异有统计学意义（P＜ 0.05），见表3。

表3 循环血miRNA-34a、miRNA-4530水平预测乳腺癌新辅助化疗疗效的效能分析

3 讨论

检测外周血miRNA 采样简单、价格低廉、可连续动态监测[6-7]。已有研究证实，循环血miRNA-34a表达水平的变化能对新辅助化疗的疗效进行准确地预测，但具有较长的敏感时间，需要到化疗的第二个周期[8]。此外，循环血miRNA-4530 也可作为预测化学治疗反应性的标志物，但诊断效能较低[9]。理论上讲，将循环血miRNA-34a 和miRNA-4530联合作为跟踪和预测乳腺癌新辅助化疗反应性的标志物，则可避免单一miRNAs 预测效能低下，增加其预测敏感度和特异度[10]。如能实现这一研究目标，则会将新的可能性提供给乳腺癌新辅助化疗疗效预测，将提给乳腺癌的临床治疗供更进一步的依据，减少患者不必要的治疗，为乳腺癌患者争取手术及有效治疗的机会。

有研究[11]通过分析乳腺癌患者的血清miRNA-34 水平，并在新辅助化疗前、化疗第2 个周期、化疗结束时重复检测，发现化疗前，乳腺癌患者的血清miRNA-34 表达水平明显高于健康志愿者；化疗前、化疗第2 个周期、化疗结束时，治疗有效组和无效组患者的血清miRNA-34 水平之间的差异均无统计学意义；治疗反应和血清miR-34表达水平变化关系密切；化疗第2 周期、化疗结束时，治疗有效组患者的血清miR-34 水平均低于化疗前，但无效组变化不明显。ROC 曲线显示，血清miRNA-34 表达水平的变化能对新辅助化疗的疗效进行准确地预测。但是应该注意，在乳腺癌新辅助化疗疗效的预测中，循环血miRNA-34 水平在化疗第2 周期后才有统计学意义。新辅助化疗治疗乳腺癌患者的化疗周期为3 周，化疗2 个周期为6 周，而通常情况下，患者化疗周期为4 ～6 个。可以看出，在新辅助化疗疗效的预测中，虽然外周血miRNA-34 表达水平变化能够将准确依据提供出来，但是单一依靠miRNA-34 具有较晚的表现时间，这就对其临床应用造成了一定程度的限制[12]。

随后，有研究通过分析78 例Ⅱ～Ⅲ期接受新辅助化疗的乳腺癌患者，结果表明，ROC 曲线分析结果显示，曲线下面积为0.662，具有一定的预测价值[13-14]。此外，也有研究证实[15-16]，miRNA-4530 通过靶向乳腺癌细胞中的血管生成抑制蛋白1（vasohibin 1，VASH1促进血管生成，对乳腺癌生物活性起到影响。由此可见，外周血miRNA-4530 水平也可作为对乳腺癌新辅助化疗疗效进行预测的指标之一，但其预测效能较低，AUC 仅为0.662。

目前关于miRNAs 预测乳腺癌新辅助化疗疗效的研究中，已有多项研究联合≥2 个miRNAs 进行预测，其目的是避免单一miRNAs 预测效能低下，增加其预测敏感度和特异度[17-18]。本研究结果表明，病理分期Ⅱ期患者的循环血miRNA-34a、miRNA-4530 表达水平均高于Ⅲ期患者，差异有统计学意义（P＜ 0.05），分子分型Luminal A 型、Luminal B 型、HER-2 过表达型、三阴型患者的循环血miRNA-34a、miRNA-4530 表达水平均逐渐降低，差异有统计学意义（P＜ 0.05）。敏感组患者的循环血miRNA-34a、miRNA-4530 表达水平均高于耐药组，差异有统计学意义（P＜ 0.05）。循环血miRNA-34a、miRNA-4530 表达水平联合检测预测乳腺癌新辅助化疗疗效的灵敏度、特异度高于单独检测，差异有统计学意义（P＜ 0.05），证实联合检测价值高。

不足之处在于样本数量较少、观察时间较短，造成研究结果可能存在偏差，今后应该扩大样本量、延长随访时间，进行进一步深入细致的研究。

综上所述，乳腺癌中的miRNA-34a联合miRNA-4530表达预测新辅助化疗疗效的价值高，值得推广。