Tricellulin与IL-13Rα2在结直肠癌中的表达及相关性分析

张文路 高立娟 戴国栋 徐春燕

1.滨州医学院附属医院呼吸与危重症医学科，山东滨州 256603；2.滨州医学院附属医院消化内科，山东滨州 256603

寻找调控结直肠癌侵袭转移的关键因子是改善结直肠癌患者预后的基础。Tricellulin 主要定位于上皮细胞的三细胞间紧密连接处，维持三细胞间紧密连接处的形态和屏障功能[1-2]。白介素（interleukin，IL）-13 是溃疡性结肠炎转变为结直肠癌的关键效应因子，IL-13Rα2 作为IL-13 的特异性受体，已被证实促进结直肠癌细胞转移[3]。在溃疡性结肠炎中IL-13Rα2 可能参与Tricellulin 的表达调控[4]。然而，在结直肠癌中IL-13Rα2 与Tricellulin 表达关系目前尚不明确。

本研究拟通过免疫组化法分别检测Ticellulin与IL-13Rα2 在早期与晚期结直肠癌中的表达，分析IL-13Rα2 与Tricellulin 的表达相关性，并初步观察肿瘤不同分化程度中Tricellulin 核表达的情况，以期阐明Tricellulin 与IL-13Rα2 在结直肠癌中的表达及相关性，为结直肠癌患者的靶向治疗提供一些新的思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取滨州医学院附属医院2020 年1—7 月收治的42 例结直肠癌患者术后的石蜡组织标本。纳入标准：均有完整的病历资料，术前均接受CT、MRI 或B 超检查明确有无局部或远处转移，可以进行TNM 分期。排除标准：无法进行TNM 分期的结直肠癌患者的术后标本。本研究遵照伦理的相关规定执行，并接受医学伦理委员会的监督和指导。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化 石蜡包埋组织连续切片，将组织切片烘烤、脱蜡、修复、灭活内源性过氧化物酶、封闭，然后将一抗[IL-13Rα2 蛋白兔多克隆抗体（ABclonal，A2043，1 ∶50）、Tricellulin 蛋白兔多克隆抗体（ABclonal，A8909，1 ∶50）]分别滴加于样本上，过夜。滴加二抗，先后滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素、DAB 溶液，显微镜下控制显色时间。复染、分化、返蓝，中性树胶封片。显微镜下观察，蓝色为细胞核，IL-13Rα2 或Tricellulin 阳性表达为棕黄色。

1.2.2 免疫组化染色结果分析 利用赛维尔图像分析系统自动读取照片，分别分析计算出测量区域内弱阳、中阳、强阳性的阳性细胞比率。并对着色强度进行积分：阴性无着色，计0 分；弱阳性淡黄色，计1 分；中阳性棕黄色，计2 分；强阳性棕褐色计3 分。最终以组织化学评分（histochemistry score，H-score）法对阳性细胞强度进行综合评价，H-score= ∑（pi×i），式中pi 表示阳性细胞比率；i 代表着色强度。H-score 为0 ～300，数据越大说明综合阳性强度越强[5-6]。

1.3 统计学方法

应用SPSS 20.0 统计学软件进行数据分析。两组正态分布的计量资料用均数±标准差（s）表示，采用t检验，计数资料用例数（n）表示，采用χ2检验。采用Pearson 相关性分析分析IL-13Rα2 与Tricellulin 在结直肠癌组织中的表达相关性。P＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床病理特征

本研究中，男28 例，女14 例。肿瘤突破黏膜肌层但未累及固有肌层2 例，侵犯固有肌层11 例，穿透固有肌层28 例，穿透脏层腹膜1 例，无肿瘤直接侵犯或附着于邻近器官或结构病例。术后病理发现淋巴结转移20 例。结合术后肝脏肿瘤病理及影像学、超声检查，存在远处转移7 例。综上，13 例患者TNM 分期为Ⅰ期，9 例患者为Ⅱ期，13 例患者为Ⅲ期，7 例患者为Ⅳ期。此外，癌组织为高分化、高- 中分化、中分化共33 例，中- 低、低分化共9 例。

2.2 Tricellulin和IL-13Rα2蛋白在早期与晚期结直肠癌中的表达与患者临床病理特征的关系

与TNM 分期较早（Ⅰ/Ⅱ期）的患者比较，结直肠癌TNM 分期较晚（Ⅲ/Ⅳ期）的患者中Tricellulin和IL-13Rα2 的H-Score 评分较高（P＜ 0.05）。在不同性别、肿瘤直径、肿瘤分化程度癌组织中，Tricellulin 和IL-13Rα2 蛋白表达差异无统计学意义（P＞ 0.05）。见表1、图1。另外，在分化程度较低的癌组织中Tricellulin 出现异常核表达，而在分化程度较高的癌组织中细胞核内很少出现Tricellulin 表达（P＜ 0.05）。见表2、图2。

表1 结直肠癌患者的临床病理特征及Tricellulin、IL-13Rα2的表达（x ± s）

表2 不同分化程度结直肠癌中Tricellulin核表达情况

图1 Tricellulin 与IL-13Rα2 在结直肠癌TNM 分期中的表达（免疫组化，200×）

图2 不同分化程度结直肠癌组织中Tricellulin 的表达（免疫组化，400×）

2.3 IL-13Rα2与Tricellulin在结直肠癌组织中的表达相关性

Pearson 相关性分析显示，结直肠癌组织中IL-13Rα2 与Tricellulin 的表达呈正相关（P＜ 0.05），见图3。

3 讨论

Tricellulin 是紧密连接的重要组成部分，在调节上皮屏障功能中起着关键作用[7]。紧密连接蛋白的表达减少和过表达破坏了上皮屏障的内稳态，促进肿瘤进展[8]。近年来，Tricellulin 表达水平与肿瘤患者预后之间的关系一直存在争议。有报道显示，患者不良预后与胃癌、肝内胆管癌、肝母细胞瘤中Tricellulin 的低表达相关，认为Tricellulin 通过加强紧密连接增强细胞间黏附能力，抑制癌细胞转移[9-10]。相反，在原发性肝癌中Tricellulin 过表达与较短的总生存期相关[11]。在本研究中发现Tricellulin 在晚期结直肠癌中表达增加。

另外，本研究发现在分化程度较差的癌组织中Tricellulin 出现异常核表达，Tricellulin 的核移位可能导致细胞间黏附作用下降，促进结直肠癌转移，但仍需更深层次的细胞生物学实验对其进行进一步验证。有研究发现，Tricellulin 异常核表达促进胰腺癌转移[12-13]。

IL-13Rα2 在结肠癌等多种人类肿瘤中均有过表达[14]，是潜在的治疗靶点。研究显示IL-13Rα2 过表达与结直肠癌患者预后不良有明显的相关性[15]。本研究同样证实IL-13Rα2 在晚期结直肠癌中表达增加。

研究报道，在溃疡性结肠炎中IL-13 与IL-13Rα2 结合，通过调控ERK1/2 等通路使Tricellulin 表达下调[4]。在胰腺癌恶性进展中，Tricellulin 的 核 定 位 可 能 与MAPK 和PKC 通路有关[12-13]。另外，IL-13 与IL13Rα2 结合能够触发若干分子招募到IL-13Rα2-FAM120A复合体上，如ERK1/2 等，促进结直肠癌侵袭转移[12]。由上述 推测IL-13/IL-13Rα2 可能 通过某种信号通路如ERK1/2 调控结直肠癌细胞内Tricellulin 的表达及核定位。遗憾的是，本研究虽首次发现结直肠癌组织中IL-13Rα2 与Tricellulin 的表达存在正相关，但其具体机制仍需进一步探索。

综上，本研究揭示Tricellulin 与IL-13Rα2 在晚期结直肠癌组织中表达明显增加。低分化结直肠癌组织中存在Tricellulin 异常的核表达。IL-13Rα2 与Tricellulin 的表达存在正相关。