苗药芮博期的质量标准研究

周佳妮 徐玉辉 覃爱桃 杨德泉

【摘 要】 目的：研究苗药芮博期药材的质量标准。方法：采用薄层色谱法对芮博期药材进行定性鉴别；按《中国药典》2020年版方法检测水分、总灰分；采用液相色谱法测定芮博期药材中血根碱的含量。结果：薄层色谱斑点清晰，苗药芮博期药材中盐酸血根碱和白屈菜红碱分离效果好；水分平均值9.88%，总灰分平均值6.87%；盐酸血根碱在0.1450～0.7033mg/mL浓度范围内线性良好（r=0.9998），平均加样回收率（n=3）结果为96.00%、95.71%、99.23%。结论：研究建立的质量标准方法可用于苗药芮博期的质量控制和质量评价。

【关键词】苗药；芮博期；显微鉴别；含量测定；盐酸血根碱

【中图分类号】R29 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2023）11-0024-05

Abstract：Objective Study on the quality standard of Miao medicine Eomecon Chionantha.Methods Thin layer chromatography（TLC）was used to identifyEomecon Chionantha;Water content and total ash were detected according to themethod of Chinese Pharmacopoeia 2020 edition;The content of sanguine in Eomecon Chionantha was determined by liquid chromatography.Results TLC spots were clear，and the separation effect of hemagarine hydrochloride and chelidonine from Eomecon Chionantha was good;The average moisture content was 9.88% and total ash content was 6.87%;The linearity was good in the concentration range of 0.1450-0.7033mg/mL（r=0.9998），The averagerecoveries（n=3）were 96.00%，95.71% and 99.23%.Conclusion The quality standard method established in this study can be used for the quality control and quality evaluation of seedling medicine Eomecon Chionantha.

Keywords：Miao Nationality Herbal;Eomecon Chionantha;Microscopic Identification;Content Determination;Sanguinarine Hydrochloride

苗藥芮博期［1］，为罂粟科植物血水草Eomecon Chionantha Hance的全草。《湘西苗药汇编》载名一口血，苗语名阿乎采［2］。苗族医药理论认为：芮博期性冷味苦，具有清热解毒、活血止痛、止血功效。主治目赤肿痛、咽喉疼痛、口腔溃疡、疔疮肿毒、毒蛇咬伤、癣疮、湿疹、跌打损伤、腰疼、咳血。芮博期含血根碱、白屈菜红碱、β-香树脂醇乙酸脂、博落回碱等成分［3-5］。药理研究［6］表明，芮博期具有抗菌抑菌和杀钉灭螺功能作用；血根碱具有抗菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、改善肝功能及诱导细胞凋亡、杀虫等作用［7-20］；白屈菜红碱具有抑菌、抗炎、抗肿瘤、抗化学性大鼠肝纤维化作用及减轻糖尿病大鼠肾缺血再灌注远程心肌损伤、改善心肌功能作用［21-31］；血根碱对肝脏、心脏等具有一定的毒性，血根碱和白屈菜红碱对HBsAg、HBeAg和HBV DNA复制具有较高的抑制活性，但细胞毒性较高［32-33］。刘年猛等［34］报道了其生药学研究。芮博期药材，目前尚无质量标准。为合理、安全、有效应用民族药，笔者研究了芮博期药材质量标准，报道如下。

1 仪器、试药和样品

1.1 仪器 尼康显微镜Nikon SMZ745T TCA-5.0C；RMZ126RT型石腊切片机［徕卡显微系统（上海）有限公司］；OLYMPUS电动显微镜BX61（日本）；液相色谱仪Agilent 1260Ⅱ，色谱柱Agilent C18（250mm ×4.6mm×5μm，编号 588905-902Agilent公司）；岛津LC-20AT，色谱柱YMC C18（250mm×4.6mm×5μm，编号HS12S05-2546WT，YMC公司）；ML304-T 电子天平；RE-52A旋转蒸发仪；202 型电热恒温干燥箱；YB-Z真空恒温干燥箱；ZOOMWO超纯水机；超声波振荡器；双槽层析缸。

1.2 试药和样品 硅胶G薄层板：10cm×20cm，德国化工技术（上海）有限公司产品、青岛海洋化工厂分厂产品。FAA固定液、TO型生物透明剂、无水乙醇、乙醇、二甲苯、中性树脂、切片石腊、番红、亮绿、水合氯醛溶液、甲苯、甲醇、磷酸氢二铵、硝酸铵为分析纯，甲醇为色谱纯，水为自制超纯水。

对照品均购自中国食品药品检定研究院，盐酸血根碱（批号510001-201101，纯度99.3%），白屈菜红碱（批号111718-201402），均40℃、P2O5真空干燥24h。芮博期药材10批采自湘西土家族苗族自治州吉首市乾州街道社塘坡村和凤凰县禾库镇米良村，经湘西自治州食品药品检验所杨德泉主任药师鉴定为罂粟科植物血水草Eomecon Chionantha Hance的全草。

2 方法与结果

2.1 性状鉴别 根及根茎呈细圆柱形，弯曲或扭曲，长20～50cm，直径1～6mm，少分枝，表面皱缩，棕褐色，有细纵纹，近基生叶，端头大节密，长2～3cm， 直径4～8mm，残存叶柄或叶柄痕，被棕褐色鳞叶，具细须根，稍扁黑褐色。其他根茎部分节间长，节上具细须根或根痕、芽或芽痕，有时可见残存鳞叶。易折断，断面不平坦，米黄色，具棕黄色斑点，排列成环状，气微，味苦而微麻（如图1）。

2.2 显微鉴别

2.2.1 根茎的横切面 呈圆形或椭圆形，由表皮、皮层、内皮层、维管束组成，表皮细胞形态不规则，较小，细胞壁稍增厚。皮层由众多薄壁细胞组成， 薄壁细胞中含淀粉粒。内皮层明显，外韧型维管束数个， 韧皮部窄，形成层不明显，木质部圆形，导管较多，近圆形，直径10～60μm皮层髓部中均有乳管分布（如图2）。

2.2.2 薄层色谱鉴别 取芮博期粉末（过3号筛）1g，加乙醇50mL，超声处理1h，滤过，滤液作为供试品溶液。另取盐酸血根碱、白屈菜红碱对照品，分别加无水乙醇制成0.2mg/mL的对照品溶液；再分别取盐酸血根碱和白屈菜红碱对照品溶液，按（1∶1）比例混合，制成0.1mg/mL的盐酸血根碱和白屈菜红碱混合对照品溶液。吸取芮博期供试品溶液、盐酸血根碱对照品溶液、白屈菜红碱对照品溶液各5μL，盐酸血根碱和白屈菜红碱混合对照品溶液5μL点样于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-甲醇（15∶1）为展开剂，在展开槽中，放置一小杯氨水，预平衡30min，展开，取出，晾干，在365nm紫外灯光下检视。供试品色谱图中，供试品溶液所显斑点的位置与颜色与对照品溶液在相对应的位置上所显颜色斑点和荧光斑点相同（如图3）。

2.3 检查

2.3.1 水分 取芮博期药材样品10份，每份约2g，照水分测定法（《中国药典2020年版四部》通则0832）测定，如表1所示，10批芮博期药材水分含量为9.03%～10.93%，平均值9.88%，按平均值的120%设置水分限度，为11.86%，建议水分限度订为：应不得过12.00%。

2.3.2 总灰分 取芮博期药材粉末（过3号筛）10份，每份约2 g，照灰分测定法（《中国药典2020年版 四部》通则2302）测定。如表2所示，10批芮博期药材的总灰分含量为6.62%～7.17%，平均值为6.87%，按平均值的120%设置总灰分限度，为8.2%，建议总灰分限度订为：应不得过9.0%。

2.4 含量测定

2.4.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸血根碱对照品5.68mg，于20mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度作为对照品溶液，其浓度为0.284mg/mL。

2.4.2 供试品溶液的制备 精密称取本品粉末（过3号筛）约2g，置150mL具塞锥形瓶中，加乙醇100mL，超声提取1 h，滤过，将滤液转置100mL鸡心瓶中，在55℃水浴中旋转蒸发，减压浓缩至乙醇挥尽后，用甲醇适量使溶解，转移定容至100mL量瓶中，摇匀，经0.22μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.4.3 色谱条件与系统适用性试验

2.4.3.1 色谱条件 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇（A）-0.028mol/L （NH4）2HPO4（用磷酸调pH7.5）（B），梯度洗脱（0～28min，5%～100%A）；检测波长320nm；流速1.0mL/min；进样量10μL。

2.4.3.2 系统适用性试验 取“2.4.1”项下溶液，按“2.4.3.1”色谱条件测定，盐酸血根碱色谱峰的理论板数为576993，分离度为12.3，均符合要求。取“2.4.2”项下溶液测定，供试品色谱中，在与对照品色谱峰相应位置上检出色谱峰。对照品、供试品色谱图。如图4、图5所示。

2.4.4 线性关系 考察精密量取2.4.1项的对照品溶液5μL、10μL、15μL、20μL、25μL作为各级别浓度的对照品溶液。测定，以峰面积为纵坐标，浓度（mg/mL）为横坐标，进行线性回归，得回归方程为Y=19799X+129.98（R=0.9998，n=6）。表明样品在0.1450～0.7033mg/mL 的浓度范围内线性良好。

2.4.5 回收率试验 精密称定盐酸血根碱对照品14.43mg，置50mL容量瓶中，加甲醇至刻度，作为对照品溶液。按80%、100%、120%浓度分别加入盐酸血根碱对照品溶液，按2.4.2项方法制备供试液，各浓度平行制备3份，测得样品中回收率平均值（n=3）结果：盐酸血根碱为96.00%、95.71%、99.23%，RSD分别为1.11%、1.05%、1.43%。详见表3。

2.4.6 重复性试验 取同批均质样品连续取样6 份，每份约2g，按照2.4.2项制备供试品溶液，照2.4.3项测定每份样品含量，计算相对标准偏差（RSD），RSD为1.28%。

2.4.7 精密度试验 精取2.4.2项下供试品溶液各10μL，平行测定6次，记录峰面积，计算得RSD为0.41%。

2.4.8 耐用性试验 分别用液相色谱仪（1）Agilent 1260Ⅱ，色谱柱Agilent C18（250mm×4.6mm×5μm，编号 588905-902Agilent公司）和（2）LC-20AT，色谱柱YMC C18（250 mm×4.6 mm×5μm，编号HS12S05-2546WT， YMC公司），理论塔板数按盐酸血根碱计，均能达到5000以上，盐酸血根碱含量测定值RSD为 0.59%。结果表明，本方法耐用性良好。

2.4.9 稳定性试验 精密称取芮博期药材粉末（过3号筛）2.0614 g，按2.4.2项制备供试品溶液，照2.4.3项分别于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、16 h进行测定，记录峰面積，计算得RSD为0.42%，表明在16 h内基本稳定。

2.4.10 样品测定 精称10批芮博期药材粉末各2.0g，依2.4.2项下方法制备供试品溶液，按2.4.3项下方法测定，测得10批芮博期药材中盐酸血根碱的含量。同时测定样品水分。结果见表4。10批芮博期药材中盐酸血根碱含量为1.3370%～1.4187%，平均值为1.3884%，按平均值的80%设置含量限度，为1.11%，建议含量测定限度订为：本品按干燥品计算，含盐酸血根碱应不少于1.00%。

3 讨论

3.1 薄层色谱鉴别展开剂的选择 本研究考察了四种展开系统：①甲苯-甲醇-氨水（24∶1∶0.05）；②氯仿-二甲苯-甲醇-氨水（50∶10∶1∶0.1）；③氯仿-甲醇（15∶1）；④甲苯-甲醇（15∶1）。结果以④展开剂效果最佳，故选择甲苯-甲醇（15∶1）为芮博期药材中血根碱、白屈菜红碱同时鉴别的展开剂，建立薄层色谱鉴别方法。

3.2 指标性成分和梯度洗脱流动相比例的选择 血根碱的抗菌、抗炎、抗肿瘤、改善肝功能及杀虫等药理作用，与芮博期主治目赤肿痛、咽喉疼痛、口腔溃疡、疔疮肿毒、毒蛇咬伤、癣疮、湿疹等临床应用，具有相关性，故选择血根碱作为芮博期含量测定指标性成分。选择流动相为甲醇（A）0.028mol/L （NH4）2HPO4（用磷酸调pH 7.5），（B）梯度洗脱（0～28min，5%～100%A）的比例，盐酸血根碱峰形最佳，分离大于1.5。本方法重复性好，准确、简便、快速。

4 结论

芮博期是湘西苗族常用药物，本研究通过对芮博期药材的性状、显微、薄层色谱、水分和总灰分、含量测定等项目研究，建立了质量标准方法，该方法可用于苗药芮博期的质量控制和质量评价，为建立芮博期药材标准提供科学依据。血根碱的药理活性与苗医临床应用相符合，作为芮博期标准指标性成分，将该药质量评价模式与标准关联，为临床应用提供了科学理论支撑。

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（收稿日期：2022-10-18 编辑：刘 斌）