活性调节蛋白、高迁移率族蛋白1在真菌感染性鼻-鼻窦炎患者中表达水平及与T淋巴细胞亚群相关性

王 伟, 赵姗姗, 张 明, 季 民

1.潍坊医学院,山东 潍坊 261053;2.同济大学附属东方医院胶州医院 耳鼻咽喉头颈外科,山东 青岛 266300

真菌感染性鼻-鼻窦炎是真菌在鼻腔、鼻窦内引起的一种特异性感染性疾病,主要表现为单侧鼻塞、流脓涕、鼻涕带血或有恶臭[1-2]。活性调节蛋白(regulated upon activation normal T-cell expressed and secreted,RANTES)是CC趋化因子家族成员,受T细胞调控、表达及分泌。高迁移率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1)是一种保守的非组蛋白DNA结合蛋白,参与炎症的发生病理过程。有研究报道,RANTES、HMGB1多在鼻上皮细胞中呈高表达,参与鼻窦炎的发病[3-4]。免疫功能失衡及炎症因子大量释放是慢性鼻窦炎的重要诱因[5-6]。本研究旨在探讨RANTES、HMGB1在真菌感染性鼻-鼻窦炎中的表达水平及其与T淋巴细胞亚群的相关性。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取自2020年4月至2022年5月同济大学附属东方医院胶州医院收治的120例真菌感染性鼻-鼻窦炎患者为研究对象,并将其纳入B组。纳入标准：符合真菌感染性鼻-鼻窦炎相关诊断标准[7];经CT扫描诊断为慢性鼻-鼻窦炎;保守治疗效果不理想。排除标准：哮喘免疫性疾病;既往鼻窦部手术史;恶性肿瘤;相关呼吸道疾病。另选取同期40例健康体检者纳入A组。A组中,男性23例,女性17例;年龄20～61岁,平均年龄(40.5±16.4)岁。B组中,男性60例,女性60例;年龄21～62岁,平均年龄(41.5±16.4)岁;病程3～13个月,平均病程(8.0±4.0)个月;鼻腔黏膜Lund-Kennedy鼻内镜评分法评估患者的临床症状,轻度72例,中度27例,重度21例。两组研究对象性别、年龄比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准。所有研究对象均知情并签署同意书。

1.2 研究方法 抽取所有研究对象空腹静脉血4 ml,200 r/min离心15 min,离心半径5 cm,于-60℃冰箱内保存备用。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测RANTES水平。采用酶联免疫吸附法检测血清HMGB1水平,将待检血清标本置于室温中,配置标准品,清洗并拍干酶标板,依次加入标准液、样本、检测抗体,封板,震荡均匀后置于室温中孵育2 h,洗板,加入酶标记物,震荡,置于室温中孵育45 min,加入终止液终止反应,于450 nm处测吸光值,计算HMGB1水平。取两管洁净试管做抗凝处理,分别将20 μl的CD4+、CD8+单克隆抗体导入试管,室温37℃孵育30 min,加入融血剂溶血,2 000 r/min离心2 min,弃上清液,洗涤,加入固定剂150 μl,将0.5 ml的PBS混合均匀制备为悬液,应用流式细胞仪检测CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平。

2 结果

2.1 两组血清RANTES、HMGB1、T淋巴细胞亚群水平比较 B组RANTES、HMGB1、CD4+、CD4+/CD8+水平高于A组,CD8+水平低于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

2.2 B组不同严重程度患者血清RANTES、HMGB1、T淋巴细胞亚群水平比较 中度与重度患者RANTES、HMGB1、CD4+、CD4+/CD8+水平高于轻度患者,CD8+低于轻度患者,差异有统计学意义(P<0.05)。重度患者RANTES、HMGB1、CD4+、CD4+/CD8+水平高于中度患者,CD8+水平低于轻度患者,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.3 多因素Logistic回归分析结果 将真菌感染性鼻-鼻窦炎作为因变量,将RANTES、HMGB1、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+作为自变量纳入多因素Logistic回归分析。结果显示,RANTES、HMGB1、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+是真菌感染性鼻-鼻窦炎发生的独立危险因素(P<0.05)。见表3。

2.4 血清RANTES、HMGB1表达与T淋巴细胞亚群水平相关性 RANTES、HMGB1表达与CD4+、CD4+/CD8+水平呈正相关(P<0.05),与CD8+水平呈负相关(P<0.05)。见表4。

表1 两组血清RANTES、HMGB1、T淋巴细胞亚群水平比较

表2 B组中不同严重程度患者的T淋巴细胞亚群水平比较

表3 多因素Logistic回归分析结果

3 讨论

真菌感染性鼻-鼻窦炎是临床常见的侵袭性疾病,病程较长,且不易根治,极易复发[8-9],患者易出现头疼、发热、消化功能与睡眠质量下降等症状,若未及时治疗,会增加眼部、肺部并发症的发生风险,甚至死亡[10-11]。RANTES是血管平滑肌细胞、T淋巴细胞、血小板分泌的一种趋化因子[12-13]。

表4 血清RANTES、HMGB1表达与T淋巴细胞亚群水平相关性

T淋巴细胞亚群是机体细胞免疫指标。有研究报道,机体免疫功能与疾病严重程度密切相关,高水平的CD69、RANTES是慢性鼻-鼻窦炎患者鼻息肉的独立危险因素[14]。本研究发现,RANTES在真菌感染性鼻-鼻窦炎患者中呈高表达。这提示,RANTES在鼻上皮细胞的炎症浸润中起到重要作用,其诱导T细胞结合产生生物学效应,参与免疫应答调节,促进炎症的发展。

HMGB1是一种促炎性细胞因子,广泛存在于生物体各细胞中,与晚期糖基化、Toll样受体结合,促进炎症因子分泌[15]。HMGB1在炎症反应中作为一种警报信号,能够激活免疫细胞,刺激免疫细胞迁移,促进识别细菌产物,抑制凋亡细胞的吞噬作用,进而维持炎症反应[16]。有研究报道,HMGB1可诱导内皮细胞活化,增加炎症细胞的存活,引起组织细胞损伤,导致炎症发生[17]。本研究发现,HMGB1在真菌感染性鼻-鼻窦炎患者中呈高表达,提示HMGB1参与炎性反应的发生发展,与既往研究[18]结果一致。

T淋巴细胞亚群是检测机体细胞免疫的指标,能够对机体多种疾病进行诊断,并根据其病机进行分析,有利于患者预后[19-20]。本研究中,CD4+、CD4+/CD8+在真菌感染性鼻-鼻窦炎患者中随病情严重程度呈上升趋势,CD8+呈下降趋势,提示真菌感染性鼻-鼻窦炎患者细胞免疫失衡,免疫功能降低[21]。本研究还发现,RANTES及HMGB1表达与CD4+、CD4+/CD8+水平呈正相关,与CD8+水平呈负相关,且RANTES、HMGB1、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+是真菌感染性鼻-鼻窦炎发生的独立危险因素,提示其可作为诊断真菌感染性鼻-鼻窦炎患者的生物标志物。

综上所述,RANTES、HMGB1在真菌感染性鼻-鼻窦炎中呈高表达,与CD4+、CD4+/CD8+呈正相关、与CD8+呈负相关,能够在一定程度上起预测真菌感染性鼻-鼻窦炎病情的作用。