耳积液中白细胞介素-8、降钙素原水平及外周血T淋巴细胞亚群水平与分泌性中耳炎患者病程的关系

姚 晨，黄 鑫，李 征，李 钢

(1.南阳市第一人民医院耳鼻咽喉科,河南 南阳 473000;2.南阳市第一人民医院胃肠外科,河南 南阳 473000)

分泌性中耳炎患者多表现为耳鸣、耳闷、耳痛、听力下降等症状,且多数为急性自限过程。急性分泌性中耳炎如未得到及时治疗,易发展为慢性分泌性中耳炎,引发鼓室硬化、中耳粘连、听骨坏死等,甚至会有致聋风险,严重威胁患者的健康[1-2]。持久不愈的分泌性中耳炎是致聋的常见因素,因此,急性分泌性中耳炎早期筛查具有重要意义。分泌性中耳炎的病因复杂,发病机制尚未完全明确,尽管临床已有免疫异常、感染、咽鼓管功能不良等多个病因假说,但仍未从根源上解释该疾病的发生及进展机制。近年来,有研究指出,免疫调节因子、炎症因子等与分泌性中耳炎的发生、发展有关,即免疫功能异常与中耳局部炎症损害会导致分泌性中耳炎的发生[3]。但免疫调节因子、炎症因子与分泌性中耳炎病程的关系及免疫调节因子与炎症因子之间是否有关联性仍需探究,这对于临床治疗时能否通过纠正机体免疫功能失调来缓解局部炎症损害及早期筛查指标的选择具有重要意义。白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、降钙素原(procalcitonin,PCT)是临床常见的炎症因子,可以促进炎症反应的发生。T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+是反映机体免疫功能的重要指标,CD4+/CD8+水平高低与免疫系统损伤有密切关系[4]。基于此,本研究旨在探讨分泌性中耳炎患者耳积液中IL-8、PCT水平及外周血T淋巴细胞亚群水平与病程的关系,以期为分泌性中耳炎的临床治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2020年1月至2021年7月南阳市第一人民医院收治的分泌性中耳炎患者为研究对象。病例纳入标准:(1)符合《耳鼻咽喉头颈外科学(第9版)》[5]中分泌性中耳炎相关诊断标准,且经听力检查、鼓气耳镜等确诊;(2)患者经鼓膜穿刺术抽出耳积液可证实为中耳炎;(3)单侧发病;(4)就诊前未接受相关抗炎、免疫治疗。排除标准:(1)合并血液系统疾病者;(2)合并肝肾等器官功能不全者;(3)合并全身性感染疾病者;(4)先天性中耳、外耳道等发育畸形者;(5)合并恶性肿瘤者;(6)合并其他耳科疾病者。本研究共纳入分泌性中耳炎患者98例,根据分泌性中耳炎病程[6]将患者分为急性组(病程<8周,n=58)和慢性组(病程≥8周,n=40)。急性组:男31例,女27例;年龄28～55(42.14±5.21)岁;体质量指数19.12～27.01(23.15±1.32) kg·m-2;病程4.00(3.00,4.00)周。慢性组:男21例,女19例;年龄27～55(42.71±5.83)岁;体质量指数19.05～26.97(23.67±1.91) kg·m-2;病程11.00(11.00,12.00)周。2组患者的性别、年龄、体质量指数比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本研究经南阳市第一人民医院医学伦理委员会批准,所有患者均签署知情同意书。

1.2 观察指标

(1)耳积液中IL-8、PCT水平:于患者就诊时,在局部麻醉下行耳内镜(上海伊沐医疗器械有限公司)经鼓膜穿刺,抽取0.3 mL中耳积液,置于无菌试管内,并保存于-20 ℃冰箱内待检。采用酶联免疫吸附试验测定试验检测2组患者耳积液中IL-8水平,酶联免疫吸附试验测定试剂盒购自美国eBioscience公司,严格按照试剂和说明书进行操作。采用乳胶免疫比浊法检测患者耳积液中PCT水平,乳胶免疫比浊法试剂盒购自重庆中原生物技术有限公司,严格按照试剂盒说明书进行操作。(2)外周血T淋巴细胞亚群水平:于患者就诊时,抽取患者空腹肘静脉血5 mL,置于抗凝管中,充分混匀,使用流式细胞仪(美国BD公司)检测CD4+、CD8+水平,并计算CD4+/CD8+比值。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 2组患者耳积液中IL-8、PCT水平比较

慢性组患者耳积液中IL-8、PCT水平均显著高于急性组,差异有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 2组患者耳积液中IL-8、PCT水平比较Tab.1 Comparison of IL-8 and PCT levels in ear effusion of patients between the two groups

2.2 2组患者外周血中T淋巴细胞亚群水平比较

慢性组患者外周血中CD4+、CD4+/CD8+水平均显著低于急性组,CD8+水平显著高于急性组,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

表2 2组患者外周血中T淋巴细胞亚群水平比较Tab.2 Comparison of peripheral blood T lymphocyte subsets levels of patients between the two groups

2.3 分泌性中耳炎患者耳积液中IL-8、PCT水平及T淋巴细胞亚群水平与病程的相关性

Spearman相关分析显示,分泌性中耳炎患者耳积液中IL-8、PCT水平与病程呈正相关(r=0.373、0.534,P<0.05);分泌性中耳炎患者外周血中CD4+、CD4+/CD8+水平与病程呈负相关(r=-0.465、-0.617,P<0.05),外周血中CD8+水平与病程呈正相关(r=0.505,P<0.05)。

2.4 分泌性中耳炎患者耳积液中IL-8、PCT水平与外周血T淋巴细胞亚群的相关性

Pearson相关分析显示,分泌性中耳炎患者耳积液中IL-8水平与外周血CD4+、CD4+/CD8+水平呈负相关(r=-0.370、-0.475,P<0.05),与CD8+水平呈正相关(r=0.434,P<0.05)。分泌性中耳炎患者耳积液中PCT水平与外周血CD4+、CD4+/CD8+水平呈负相关(r=-0.379、-0.477,P<0.05),与CD8+水平呈正相关(r=0.419,P<0.05)。

3 讨论

目前,有关分泌性中耳炎的发病机制尚未明确,临床多认为是感染、免疫反应、咽鼓管阻塞及环境因素等相互作用导致的复杂病理过程[7]。分泌性中耳炎作为典型的炎症疾病,炎症因子水平的变化对于临床诊断与治疗仍具有重要的参考价值[8]。PCT是降钙素的前体,也是对全身炎症活跃程度较敏感的指标,在感染性疾病的诊断中广泛应用[9]。正常生理状态下,人体中PCT的含量极低,一旦机体发生细菌感染所致的全身炎症反应,细胞内毒素刺激下的中性粒细胞及胰腺、肝脏等器官均会产生PCT,导致PCT水平异常升高[10]。分泌性中耳炎属于中耳非化脓性炎症,当该疾病发生时,耳积液中PCT水平会异常升高[11]。IL-8是趋化因子家族的一员,多由单核细胞、内皮细胞、成纤维细胞等产生,可以激活、吸引中性粒细胞,与中性粒细胞接触后可促使其形态发生变化,定向游走至反应部位并释放一系列活性产物,诱发局部炎症反应[12]。IL-8还可以活化巨噬细胞,并与巨噬细胞表面的受体结合,使细胞变性,释放过氧化物、溶酶体,引发中耳黏膜水肿,破坏黏液-纤毛输送系统,导致积液潴留于中耳腔内,加快分泌性中耳炎的发生、发展[13]。

本研究结果显示,慢性组患者耳积液中IL-8、PCT水平均显著高于急性组,且耳积液中IL-8、PCT水平与病程呈正相关。分析其原因可能为:与急性分泌性中耳炎相比,慢性分泌性中耳炎病程较长,患者鼓室黏膜及咽鼓管纤毛上皮受到耳积液影响的时间较长,病情更严重,机体的应激状态也更显著,使得患者耳积液中炎症因子PCT、IL-8水平较高。因此,临床可考虑通过检测耳积液中PCT、IL-8水平诊断分泌性中耳炎以及判断病情程度,以便为针对性治疗方案的制定提供参考。

有研究指出,分泌性中耳炎的发生与机体免疫反应有关,其中T淋巴细胞参与分泌性中耳炎发生、发展过程[14]。T淋巴细胞可根据其表面表达的膜分子类型及生物学差异分为不同的亚群,CD4+、CD8+是T淋巴细胞发挥免疫调节作用的重要组成部分[15]。CD4+可以识别并结合人类主要组织相容性复合体Ⅱ类分子,产生多种细胞因子以辅助T细胞参与免疫过程,并能辅助B细胞产生抗体,从而正向推动免疫功能[16]。CD8分子可以辅助T细胞受体识别抗原,并参与T细胞活化信号的传导。活化的CD8+可以抑制T细胞参与抗病毒、抗肿瘤免疫等,并产生穿孔素、粒酶等细胞毒性物质[17]。CD8+与CD4+相互制约,CD4+/CD8+水平可反映免疫失衡方向,其水平降低说明机体免疫功能低下。本研究结果显示,慢性组患者外周血中CD4+、CD4+/CD8+水平均显著低于急性组,CD8+水平显著高于急性组;此外,分泌性中耳炎患者外周血中CD4+、CD4+/CD8+水平与病程呈负相关,外周血CD8+水平与病程呈正相关。分析原因可能在于:分泌性中耳炎患者体内的炎症反应会刺激免疫功能应激反应,促使机体加快T细胞增殖与相关抗体合成,从而导致急性分泌性中耳炎患者外周血中CD4+、CD4+/CD8+水平升高[18]。随着病程延长,急性分泌性中耳炎会逐渐发展为慢性分泌性中耳炎,导致患者的免疫功能受损,从而造成CD4+、CD4+/CD8+水平降低,CD8+水平升高趋势。因此,建议临床可对分泌性中耳炎患者的T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平进行检测,以便明确患者免疫功能受损程度,从而采取对症治疗,改善患者的免疫功能,促进患者康复。

有研究表明,分泌性中耳炎患者耳积液中可检出前列腺素、细菌特异性抗体、免疫复合物,提示该疾病是免疫介导和炎症感染的过程[19]。本研究进一步对分泌性中耳炎患者的耳积液中IL-8、PCT水平与外周血T淋巴细胞亚群的关系进行探究,Pearson相关分析结果显示,分泌性中耳炎患者耳积液中IL-8、PCT水平与外周血CD4+、CD4+/CD8+水平呈负相关,与 CD8+呈正相关。分析原因在于:分泌性中耳炎发生时,细菌或病毒感染等会导致中耳腔局部微环境变化,破坏中耳独立的防御系统,降低中耳的免疫功能,导致CD4+、CD4+/CD8+水平降低,CD8+水平升高[20]。而免疫功能的降低会导致炎症反应加重,IL-8、PCT等炎症细胞大量聚集于中耳,进而刺激局部黏膜增生、损伤,加重中耳防御系统的损伤,形成恶性循环[21]。因此,当分泌性中耳炎由急性进展为慢性时,耳积液中IL-8、PCT水平会异常升高,导致炎症反应加重,进一步损伤患者的免疫功能,造成CD4+、CD4+/CD8+水平降低,CD8+水平升高。

4 结论

分泌性中耳炎患者耳积液中IL-8、PCT水平及与外周血中CD8+水平病程呈正相关,外周血中CD4+、CD4+/CD8+水平与病程呈负相关;此外,患者耳积液中IL-8、PCT水平与外周血CD4+、CD4+/CD8+水平呈负相关,与 CD8+水平呈正相关。建议临床可通过检测分泌性中耳炎患者耳积液中IL-8、PCT水平及外周血CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平来判断该疾病的进展程度,此外,治疗过程中除针对性抗炎治疗外,还应重视患者的免疫失衡情况,采取有效措施纠正患者的免疫功能,从而阻碍疾病进展,改善患者的预后。但本研究也存在一定的局限性,主要研究对象为成人,未探究儿童分泌性中耳炎患者的炎症因子及T淋巴细胞亚群变化,且本研究仅探究IL-8、PCT变化,未探究更多炎症因子水平与T淋巴细胞亚群的关系,未来可对此进行深入探究。