血清NT-proBNP、CHE、miR-155表达水平预测多器官功能障碍综合征患者预后的价值

和亚丽

多器官功能障碍综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)是由创伤、感染、休克等所致的临床综合征,发病机制复杂;MODS一旦发生,病情难以有效控制[1]。MODS病情诊断、监测及预后评估是临床危重病医学研究的重点,现阶段主要采用急性生理与慢性健康量表(APACHE Ⅱ)评分综合评估病情严重程度及预后,但该评分系统主要是评价患者生理指标变化,难以有效评价局部病变情况[2]。胆碱酯酶(CHE)为糖蛋白,经肝脏合成,在机体内以多种同工酶形式存在,合成后可立即释放入血,故血清CHE水平可反映其合成速率,与有机磷中毒、肝实质细胞损伤等疾病病情相关。微小RNA(miRNA)可在转录后调节基因表达水平,miR-155是维持免疫功能正常所必须的miRNA分子,可调节活化T细胞细胞因子分泌,在不同疾病中表达异常;MODS感染、休克发生时可能存在CHE、miR-155改变[3]。B型钠尿肽N末端产物(NT-proBNP)随心室容量负荷升高而增加。申丁丁等[4]研究提出,NT-proBNP作为多肽类神经激素可能参与MODS的发生、进展过程。本研究分析血清NT-proBNP、CHE、miRNA-155(miR-155)表达水平联合检测对MODS患者预后的评估价值,旨在为临床预测MODS患者预后提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2019年3月—2022年3月收治的MODS患者86例,根据治疗28 d后预后结局分为预后良好组(生存,61例)和预后不良组(病死,25例)。预后良好组男37例,女24例;年龄44～64(54.04±4.58)岁;原发疾病:急性重症胰腺炎21例,重症肺炎28例,创伤所致的失血性休克5例,大面积烧伤3例,感染所致的感染性休克4例;基础疾病:高血压31例,冠心病20例,糖尿病12例,陈旧性脑血管病8例。预后不良组男14例,女11例;年龄44～63(53.92±4.51)岁;原发疾病:急性重症胰腺炎6例,重症肺炎10例,创伤所致的失血性休克4例,大面积烧伤4例,感染所致的感染性休克1例;基础疾病:高血压13例,冠心病11例,糖尿病7例,陈旧性脑血管病5例。2组一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经我院医学伦理委员会审批通过。

1.2 入选标准 纳入标准:(1)符合《多器官功能障碍综合征诊断标准的多中心临床研究》标准[5];(2)年龄<65岁;(3)签订知情同意书,健在本人或死亡者亲属可提供预后或随访资料。排除标准:(1)存在急性心肌梗死;(2)伴有血液系统疾病;(3)存在血栓性疾病史、肿瘤病史;(4)存在活动性肺结核、急慢性肝炎等脏器病变;(5)预计生存期<7 d;(6)放弃治疗。

1.3 方法

1.3.1 治疗方法 MODS患者均给予吸氧、化痰等常规处理,衰竭脏器给予综合疗法,并根据患者个体情况进行对症治疗,密切关注病情,避免其他脏器衰竭。(1)烧伤:给予抗感染、补液、创伤面等常规、支持治疗;(2)感染性休克:及时纠正酸中毒、补充血容量,必要时给予升压药物、激素类药物;(3)急性重症胰腺炎:进行胃肠减压、禁食等治疗,评估手术适应证,切除坏死胰腺组织或病变组织;(4)失血性休克:及时清理创面,进行吸氧、输血、快速滴注平衡盐溶液等。

1.3.1 血清指标检测 受检者分别于治疗前和治疗7 d后采集4 mL外周静脉血,离心(3 000 r/min,15 min)留取上清液,以丁酰硫代胆碱法测定血清CHE水平,以酶联免疫吸附法检测血清NT-proBNP水平。

1.3.2 miR-155检测 采取TRIzol一步法提取外周静脉血总RNA,检测总RNA吸光度值(紫外分光光度计),提取高纯度RNA(吸光度值1.8～2.0)。采取RT-PCR检测,总体积25 μL,miR-155引物序列由上海生工生物有限公司合成。miR-155上下游引物各0.5μL,9.5 μL ddH2O,12.5 μL SYBR Green MIX,cDNA模板2 μL。PCR反应条件为:95 ℃ 15 min预变性,95 ℃ 15 s变性,60 ℃ 60 s退火与延伸,共35个循环。以2-△△Ct法计算miR-155相对表达量。

1.3.3 APACHE Ⅱ评分量表 包括年龄(计0～6分)、急性生理学(计0～60分)、慢性健康状况(计2～5分)3个维度,共计71分,>15分为重症,分值越高提示病情越严重,死亡率越高[6]。

1.4 观察指标 (1)比较2组血清NT-proBNP、CHE、miR-155水平及APACHE Ⅱ评分。(2)分析血清各指标水平与APACHE Ⅱ评分的相关性。(3)分析影响MODS患者预后的因素。(4)分析血清NT-proBNP、CHE、miR-155表达水平高低对MODS患者预后的影响。

2 结果

2.1 2组血清指标水平和APACHE Ⅱ评分比较 治疗前和治疗7 d后,预后不良组血清NT-proBNP、miR-155表达水平及APACHE Ⅱ评分均高于预后良好组,CHE水平低于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组血清指标水平及APACHE Ⅱ评分比较

2.2 血清NT-proBNP、miR-155表达水平与APACHE Ⅱ评分的相关性分析 治疗前和治疗7 d后,血清NT-proBNP、miR-155表达水平均与APACHE Ⅱ评分呈正相关,血清CHE水平均与APACHE Ⅱ评分呈负相关,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 血清NT-proBNP、miR-155表达水平与APACHE Ⅱ评分的相关性分析

2.3 影响MODS患者预后的Logistic回归分析 以MODS患者预后为因变量,将患者治疗前和治疗7 d后血清NT-proBNP、CHE、miR-155水平作为自变量,对自变量进行赋值(以86例的平均值为界:≤平均值=1,>平均值=2)。Logistic回归分析显示,治疗前血清NT-proBNP>1 800.87 pg/mL、miR-155>1.35和治疗7 d后血清NT-proBNP>1 669.92 pg/mL、miR-155>1.10是MODS患者病死的危险因素;治疗前血清CHE>4 317.40 U/L和治疗7 d后血清CHE>4 367.20 U/L是MODS患者病死的保护因素。见表3、表4。

表3 自变量赋值方法

表4 影响MODS患者预后的Logistic回归分析

2.4 不同血清指标水平对MODS患者病死的相对危险度分析 以治疗前和7 d后MODS患者血清NT-proBNP、CHE、miR-155水平平均值为界分为高水平、低水平。结果显示,治疗前,血清NT-proBNP、CHE、miR-155高水平患者病死的危险度是低水平的2.343、0.330、2.419倍(P<0.05);治疗7 d后,血清NT-proBNP、CHE、miR-155高水平患者病死的危险度是低水平的2.571、0.219、3.319倍(P<0.05)。见表5。

表5 不同血清NT-proBNP、CHE、miR-155水平MODS患者的病死危险度分析

3 讨论

miRNA已在炎症性肠病、急性心肌梗死、肾脏疾病等疾病中作为诊断、监测的生物标志物[7-9]。miR-155可调节机体Th1、Th2细胞因子分泌,促进CD4+T淋巴细胞分化,并靶向调控B细胞产生抗体,调控免疫功能,在机体急性炎症反应中发挥重要作用[10-12]。

本研究结果显示,治疗前和治疗7 d后,预后不良组血清miR-155表达水平及APACHE Ⅱ评分较高,而预后良好组治疗7 d后血清miR-155评分明显降低,提示血清miR-155水平与MODS患者病情变化密切相关。miR-155升高可促使机体效应性T细胞、特异性抗体、炎症因子产生,故治疗后miR-155表达水平有所降低。治疗前和治疗7 d后,预后不良组血清CHE水平较低。进一步Logistic回归分析显示,治疗前血清CHE>4 317.40 U/L和治疗7 d后血清CHE>4 367.20 U/L是MODS患者病死的保护因素。表明血清CHE水平升高有利于MODS患者预后。MODS患者多存在毛细血管突发性高渗透,血管内血浆渗透至组织间隙,故血清CHE表达量降低[13-15]。肺部感染是诱发MODS的重要原因,本研究中40例MODS患者原发疾病为重症肺炎,肺损伤发生时,肺血管受低氧、酸中毒、高碳酸血症等刺激而收缩,增大了血管阻力、右心负荷,心功能代偿失调,引起NT-proBNP大量合成。治疗前血清NT-proBNP>1 800.87 pg/mL和治疗7 d后血清NT-proBNP>1 669.92 pg/mL是MODS患者病死的危险因素。MODS患者血清NT-proBNP水平升高可能与循环中的心肌抑制因子异常表达有关。白介素-1β、肿瘤坏死因子-α等抑制因子引起心肌细胞炎性损伤,抑制心肌收缩功能,减弱心肌收缩力及射血能力,增加心室壁张力,进而提高NT-proBNP水平[16-18]。

相关性分析显示,血清NT-proBNP、miR-155表达水平与APACHE Ⅱ评分呈正相关,CHE水平与APACHE Ⅱ评分呈负相关。提示血清NT-proBNP、miR-155水平升高和CHE水平降低时,可能伴随MODS患者多器官衰竭,病死风险较高。究其原因,miR-155参与MODS患者炎症反应,其水平升高促使机体炎性级联反应加重;血清NT-proBNP水平升高可能与炎性因子对心肌的抑制作用有关,导致心肌收缩及射血能力减弱,促使NT-proBNP分泌增加。为拮抗炎症反应、病原菌入侵,机体免疫系统与迷走神经递质乙酰胆碱协作形成胆碱能抗炎通路,大量消耗CHE,引起血清CHE水平明显下降[19]。本研究以治疗前和治疗7 d后MODS患者血清NT-proBNP、CHE、miR-155表达水平的平均值作为分界点,创新性进行危险度分析,得出治疗前,血清NT-proBNP、CHE、miR-155高水平患者病死的危险度是低水平的2.343、0.330、2.419倍,治疗7 d后,血清NT-proBNP、CHE、miR-155高水平患者病死的危险度是低水平的2.571、0.219、3.319倍,可见血清NT-proBNP、CHE、miR-155检测对临床诊断、干预MODS具有积极意义。

综上所述,血清NT-proBNP、CHE、miR-155水平与MODS患者病情严重程度有关,各项血清指标联合检测对患者预后的预测价值较高,有助于MODS的早期诊断及临床干预,具有一定临床推广价值。