藏药“解吉”的生药学研究进展

2023-06-27 00:19:08尕让甲赵志礼倪梁红银巴
中国民族民间医药·上半月 2023年4期
关键词:基原秦艽麻花

尕让甲 赵志礼 倪梁红 银巴

【摘 要】

藏医药学具有悠久的发展历史及丰富的科学与藏族文化内涵。但由于种种原因,藏药品种整理及质量标准研究等工作尚不能适应藏医药学发展的需要。文章对传统藏药“解吉”进行本草学考证,梳理其主流品种,并就药材品质评价及DNA分子鉴定等方面的研究工作进展进行综述,以期为该药材的品种鉴定、质量标准的制定与完善等深入研究提供参考资料。

【关键词】

藏药;解吉;本草学考证;品质评价;DNA条形码

【中图分类号】R281   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517(2023)07-0052-06

Pharmacognostical Research Progress on Tibetan Herb Jie-Ji

Kelsang Gyab Ala1, 2 ZHAO Zhili1* NI Lianghong1 Yumpa2

1. Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai 201203, China;

2. Men Tsee Khang, Tibetan Medical Hospital of Tibet Autonomous Region, Lhasa 850000, China

Abstract:

Jie-Ji, a common Tibetan herb, is recorded in ‘The Four Medical Tantras (the 8th century AD) and traditionally used for the treatment of Chi-Ba disease. Here, a textual research on the herb was conducted. In addition, we summarized the research progress on it in the quality evaluation and species identification using DNA barcoding.

Keywords:

Tibetan Herb; Jie-Ji; Herbal Textual Research; Quality Evaluation; DNA Barcoding

“解吉”(),常用藏藥之一,公元8世纪的藏医药典籍《四部医典》中就有记载,可清腑热,治疗“赤巴病”[1]。品种及植物来源多样,传统上有“解吉那保”(具深蓝色花的)与“解吉嘎保”(具黄白色花的)两个品种之分[2]。另据文献[3-6]报道,其来源涉及龙胆科Gentianaceae龙胆属Gentiana秦艽组(Sect. Cruciata)多种植物。花、根或全草入药,可治疗风湿性关节炎及黄疸型肝炎等症。本文就传统藏药“解吉”的本草学考证、药材的品质评价及物种DNA分子鉴定等方面的研究进展进行综述,以期为该药材的品种鉴定、质量标准的制定与完善等深入研究提供参考资料。

1 本草学考证与基原植物

1.1 古代文献中“解吉”的形态描述 公元17世纪中期,藏医药学家第司·桑杰嘉措留存的藏药彩绘图谱80幅唐卡中,第27幅收载了“解吉”(图1),从左往右的第2图和第3图分别是“解吉嘎保”与“解吉那保”。图中可清晰看出藏药“解吉”基原植物具有秦艽组植物的特征:叶对生,基生叶莲座状;主根粗大;且具两类花序(花密集呈头状,或疏松排列),花色两种(黄白色或深蓝色)等。公元18世纪的《晶珠本草》中对“解吉”的记载:“本品分为白、黑两种。《图鉴》中说:‘白花秦艽生长在草山坡。叶厚,长,青色,光滑;茎红色;花白色;种子黑色状如铁砂……黑花秦艽……形状如白花秦艽,而叶略大,花白色光泽不显,叶茎平铺地面,生长在平滩。”[2]以上文献所描述的特征,用现代植物学术语表述:草本;主根粗大;具发达的莲座状叶丛,叶脉数条,茎生叶对生;合瓣花,花黄白色或深蓝色;种子多数,细小。植物多生长在草坡及草滩。这些特征与龙胆科龙胆属秦艽组植物十分吻合。

1.2 现代文献中“解吉”基原植物的分类学名称 1991年出版的《藏药志》[4]记载,“解吉嘎保”为麻花艽Gentiana straminea Maxim.、西藏秦艽G. tibetica King ex Hook. f.、黄管秦艽G. officinalis H. Smith;“解吉那保”为小秦艽G. dahurica Fisch.、粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.、长梗秦艽G. waltonii Burk.和全萼秦艽G. lhassica Burk.,也提到了青海地区的一种代用品,即龙胆属多枝组的六叶龙胆G. hexaphylla Maxim. ex Kusnez.。1996年出版的《中国藏药》[7]中,“解吉嘎保”为麻花艽G. straminea Maxim.和粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.;“解吉那保”为大叶秦艽G. macrophylla Pall.和小秦艽G. dahurica Fisch.。实际上青藏高原不产大叶秦艽此植物;另外,粗茎秦艽的花为蓝紫色,将其归入“解吉嘎保”似不妥当。2010年赵志礼等[6]基于民族植物学考察及标本分类学鉴定,梳理了“解吉”的10种基原植物,均隶属于龙胆科龙胆属秦艽组(图2)。2018年嘎务编著的《藏药晶镜本草》第二版[3]中,“解吉嘎保”为麻花艽G. straminea Maxim.和粗壮秦艽G. robusta King ex Hook. f.;“解吉那保”为粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.、西藏秦艽G. tibrtica King ex Hook. f.及长梗秦艽G. waltonii Burk.。“解吉那保”中,粗茎秦艽与长梗秦艽均开蓝色花,而西藏秦艽开黄白色花,将其归为一类,与传统品种的界定不一致。

由此可见,“解吉”基原植物的主流品种,主要来源于龙胆科龙胆属秦艽组多种植物。同时,曾出现一些代用品,涉及龙胆科龙胆属不同组的植物;亦出现物种鉴定不准确的问题。

2 生药学鉴定与品质评价

《中华人民共和国卫生部药品标准》藏药(第一册)[8]收录了“秦艽花”(解吉嘎保),基原为麻花艽G. straminea Maxim.;并附有药材性状及显微鉴定特征等。顾成玉等[9]应用形态学、薄层色谱法及高效液相色谱法对藏药“解吉那保”的两种基原植物全萼秦艽G. lhassica Burk.与长梗秦艽G. waltonii Burk.进行性状观察、定性鉴别及龙胆苦苷含量测定,为品种鉴定及质量标准的制定提供科学依据。赵志礼等[10]对“解吉那保”基原植物之一管花秦艽G. siphonantha Maxim. ex Kusnez.进行了药材性状、组织学特征观察及薄层色谱鉴定。

王妍妍等[11]应用HPLC技术,构建了“解吉那保”基原植物之一粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.药材的化学指纹谱,为该药材质量评价与控制提供方法。李清峰等[12]建立了四川若尔盖产道地藏药材“解吉嘎保”基原之一麻花艽G. straminea Maxim.高效液相色谱指纹图谱(图3),反映了该地区产麻花艽的化学背景特征,可为道地药材评价及相关中藏药品种鉴定提供基础资料。Wu等[13]应用液相色谱-质谱联用技术,鉴定麻花艽G. straminea Maxim.及其混淆品,结果显示,7-O-(4″-O-glucosyl) coumaroyl-loganic acid和7-O-coumaroyl-loganic acid可有望成为麻花艽的化学成分标记。陈静[14]应用HPLC法测定藏药“解吉嘎保”(白花秦艽,基原:麻花艽G. straminea Maxim.)不同部位中龙胆苦苷的含量,结果表明,花中龙胆苦苷的含量明显高于茎,与藏医临床用药部位选择相符,所建立的测定方法可用于藏药白花秦艽的质量控制。陈静等[15]采用HPLC法测定藏药“解吉那保”(基原:粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.)不同部位龙胆苦苷的含量,结果显示,不同部位龙胆苦苷的含量差异显著,花中的含量远高于根中的含量。所建立的测定方法可用于藏药“解吉那保”的药用部位筛选与药材质量控制。但文中实验样品采集地点拉萨不产此植物,其植物来源值得商榷。

徐燕等[16]基于UPLC-ESI-HRMSn法评价远红外干燥、真空干燥、冷冻干燥、阴干、烘干、“发汗”干燥对粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.品质的影响。结果显示,不同干燥方法样品的獐牙菜苦苷差异不显著,龙胆苦苷、马钱苷酸、獐牙菜苷、木犀草素、异牡荆素、芹菜素和山柰酚差异明显。“发汗”干燥具有与冷冻干燥相似的品质,且品质最好,其次是烘干干燥和远红外干燥,阴干干燥的样品品质最差。李源等[17]应用UPLC-Q-Orbitrap HRMS法同时测定粗茎秦艽根炮制前后龍胆苦苷、马钱苷酸、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷、木犀草素、异牡荆素、芹菜素及山柰酚8种化学成分的含量变化。结果显示:药材经清炒、酒炙后环烯醚萜类含量均明显升高,且清炒后龙胆苦苷和马钱苷酸含量具有统计学差异。黄酮类在清炒和酒炙后含量变化不大。2类成分总的含量变化为环烯醚萜类成分含量清炒>酒炙>生品;黄酮类成分含量生品>酒炙>清炒。为探究传统的“搓揉捶打”初加工方法对藏药“解吉嘎保”质量的影响,扎西桑珠等[18]测定了不同初加工方法药材样品中马钱苷酸含量。结果显示,经“搓揉捶打”的“解吉嘎保”中马钱苷酸含量是未经加工的2倍。但文中未明确注明其实验样品的拉丁学名。

3 遗传背景分析及DNA分子鉴定

3.1 全基因组测序 全基因组序列可为药材基原植物的鉴定提供极为丰富的信息及多样的候选片段,并为相关生物工程技术的开发等奠定坚实基础。Li等[19]报道了对小秦艽G. dahurica Fisch.全基因组序列的测定结果,其总长度为1416.54 Mb。

3.2 叶绿体基因组测序 倪梁红等[20, 21]测定了麻花艽G. straminea Maxim.、粗壮秦艽G. robusta King ex Hook. f.及粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.的叶绿体全基因组序列,并比较其结构特征及筛选热点变异区。董博然等[22]报道了长梗秦艽G. waltonii Burk.和全萼秦艽G. lhassica Burk.的叶绿体全基因组序列,并开发出可用于鉴定此两个近缘物种的特异性引物PCR分子标记方法。高娜娜等[23]测定了西藏秦艽G. tibrtica King ex Hook. f.叶绿体全基因组序列,并基于相关序列分析筛选分子标记,鉴定西藏秦艽及其近缘物种粗茎秦艽与粗壮秦艽。Zhou等[24]测定了小秦艽G. dahurica Fisch.,管花秦艽G. siphonantha Maxim. ex Kusnez.及黄管秦艽G. officinalis H. Smith的叶绿体全基因组序列,结合已报道的秦艽组物种叶绿体基因组序列,进一步筛选物种DNA分子鉴定标记。Fu等[25]测定了龙胆科龙胆亚族(subtribe Gentianinae)6属41种植物的叶绿体全基因组序列,分析其结构特点及导致部分基因缺失的原因,探讨了龙胆亚族内的系统发育关系。

3.3 线粒体基因组测序 尕让甲等[26]最近报道了粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.及麻花艽G. straminea Maxim.的线粒体全基因组序列,其长度分别为:368,808 bp,410,086 bp。

3.4 转录组分析 植物转录组序列同样含有丰富的遗传学信息,可从整体水平了解细胞中基因表达情况及其调控规律,全面揭示生物个体基因在特定时期和特定组织中的表达情况。倪梁红等[27]首次以“解吉那保”基原植物之一长梗秦艽G. waltonii Burk.与“解吉嘎保”基原植物之一粗壮秦艽G. robusta King ex Hook. f.为本组模式植物,分别构建其根、茎、叶、花转录组数据库,挖掘参与编码环烯醚萜苷类合成途径中的24个关键酶,且在不同部位中的表达存在差异;还发现多个SSR、SNP和InDel位点。康恒等[28,29]分别测定了“解吉那保”基原植物粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.及全萼秦艽G. lhassica Burk.的转录组序列,并进行了相关关键基因的qRT-PCR验证分析。杨晓等[30]则探究了粗茎秦艽种子萌发过程中的转录组信息及关键因子。

3.5 物种DNA分子标记 倪梁红等[31]测定了甘肃产龙胆属秦艽组粗茎秦艽、麻花艽、大叶秦艽、小秦艽、管花秦艽及黄管秦艽6种药用植物的核糖体ITS区及matK、rbcL、psbA-trnH等9个叶绿体DNA条形码序列,梳理种内基因型式样;进行基于大叶秦艽叶绿体DNA基因II型,小秦艽ITS区基因II型、III型、IV型序列鉴定相关物种的方法学研究;建立的DNA分子个性化鉴别方法可将甘肃产6个物种有效区分(图4)。熊波等[32]测定了粗壮秦艽、麻花艽、粗茎秦艽、长梗秦艽的核糖体ITS区序列及9个叶绿体片段序列,并对粗壮秦艽ITS区序列进行克隆测序及基因分型,形态学及DNA分子证据显示其可能为一杂交物种;在克隆序列中寻找稳定位点,多片段组合可鉴定粗壮秦艽及其近缘种。陆佳妮等[33]对线粒体片段序列在秦艽组植物中的物种鉴定意义进行了评价。分别测定秦艽组10个物种的线粒体 nad 1/b-c及 nad5/d-e序列。结果表明,nad1/b-c具有粗壮秦艽的稳定变异位点,同时对粗茎秦艽及西藏秦艽有一定物种分辨率;nad5/d-e序列相似度高,仅大叶秦艽、黄管秦艽及管花秦艽存在种内不同基因型。进而基于nad 1/b-c 物种分子标记,设计特异鉴定引物,建立粗壮秦艽特异性引物-PCR鉴定方法。罗焜等[34]广泛收集秦艽药材主产区不同基原和其常见混伪品共86个样品,分别测定其候选序列ITS,psbA-trnH,matK,rbcL和ITS2,分析结果显示,基于ITS2序列可成功鉴定秦艽药材及其混伪品。Liu等[35]测定了龙胆属6组30种(包括秦艽组8种)植物的rbcL、matK、trnH-psbA、ITS及ITS2序列,构建的DNA条形码可用于中药秦艽4种基原植物的鉴定。尕让甲等[36]构建了川甘产藏药解吉嘎保主流品种麻花艽基于叶绿体psbA-trnH、线粒体nad1 b/c、叶绿体rpl20-rps12三个片段的组合型DNA条形码。

3.6 DNA指纹分析与品种鉴定 王笠等[37]应用ISSR分子标记技术探讨了麻花艽的遗传多样性,并构建DNA指纹谱。基于28个居群83份样本的分析结果表明,麻花艽种群遗传多样性水平较高,其遗传变异主要存在于居群间,遗传特性与地理分布具有一定相关性。宗粉粉等[38]应用AFLP分子标记对粗茎秦艽20个居群163株个体构建DNA指纹谱。结果表明,粗茎秦艽种内遗传多样性丰富,物种内分为两大支,且居群间遗传距离与空间地理距离具有显著的正相关关系;同时,结合SSR与SNP标记,探讨了四川康定县居群的分化问题。

4 小结

守正创新,开展深入的藏医药文献考证、主流品种梳理等工作,其必要性及紧迫性不言而喻。尽管已有《四部医典》及《晶珠本草》等典籍的不同汉语译本,但如何深入解读藏医药典籍文献原著与考证等,仍然是瓶颈之一。因此,加强深入、高效的汉藏同行合作研究工作以及相关研究团队的建设尤为重要。

尚需开展的工作:①基原植物的分类学鉴定问题亟待解决。如在“解吉”相关研究中,无基原拉丁学名或名称误定[14,18]等。亦有一些相关工作,如对粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.及其近缘种粗壮秦艽G. robusta King ex Hook. f.及西藏秦艽G. tibetica King ex Hook. f.间的分类学鉴定工作[39]。秦艽组同域分布的近缘种间常发生杂交现象,并出现中间过渡类型,使种的界定及分类学鉴定工作更具挑战性,如管花秦艽G. siphonantha Maxim. ex Kusnez.及麻花艽G. straminea Maxim.间的杂交及基因渗入[40,41],粗壮秦艽G. robusta King ex Hook. f.的杂交起源与鉴定[32]等。同时,一些新物种的形成可能与杂交过程相关,如有报道从全萼秦艽G. lhassica Burk.中分出一新类群G. hoae P. C. Fu et S. L. Chen[42]。②开展深入的“解吉”藏药材市场品调研及品种鉴定。③文献典籍考证、应用现状与相关药效学研究相结合的解吉主流品种评价体系的建立。“解吉”来源涉及龙胆属秦艽组多种植物,已成共识。但具体为那些(个)种,有不同观点,如全萼秦艽G. lhassica Burk.,有归入“解吉那保”的,也有将其另列一品种“莪德哇”[43]。④加强“解吉”基原植物的规范化栽培工作,满足市场需求,并有助于保护野生种质资源。秦艽组植物多分布于青藏高原,生存环境严苛,一些是国产狭域特有种,野生种质资源的保护及开展就地栽培学研究工作刻不容缓。已有探讨“解吉”4种基原植物粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.、粗壮秦艽G. robusta King ex Hook. f.、麻花艽G. straminea Maxim.及西藏秦艽G. tibetica King ex Hook. f.种胚发育特性方面的基础性工作及粗茎秦艽G. crassicaulis Duthie ex Burk.種子生物学研究报道等[44,45]。

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(收稿日期:2022-08-05 编辑:陶希睿)

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