急性缺血性脑卒中患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平与病情及预后的关系*

尹 波,田 虹,张艳芳,刘旭生,郭顺红,赵美群

华北石油管理局总医院康复中医科,河北沧州 062552

急性缺血性脑卒中(AIS)是一种脑血管病变,其起病急,易造成神经功能损伤,患者预后差[1-2]。因此,寻找与AIS发病有关的因素,并及时进行干预,对于改善AIS患者预后有积极意义。既往研究认为,AIS的发生发展与自噬、长链非编码RNA(LncRNA)、氧化应激、凝血异常、炎症等相关[3-4]。研究发现,LncRNA叉头盒D3反义RNA1(LncRNA FOXD3-AS1)在AIS的脑缺血/再灌注模型中呈高表达,LncRNA FOXD3-AS1可能是治疗AIS的潜在靶点[5]。但LncRNA FOXD3-AS1在AIS患者中的表达水平及其与AIS发生风险、严重程度、预后的关系尚不明确。因此,本研究通过测定LncRNA FOXD3-AS1在AIS患者血清中的水平,分析其与AIS发生风险、疾病严重程度、预后的关系,旨在为临床诊断、评估AIS患者神经功能损伤程度及预测预后提供新思路。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2020年6月至2022年3月于本院就诊的AIS患者92例为AIS组,男54例,女38例;年龄47～76岁,平均(63.91±11.87)岁;按入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分[6]将AIS患者分为轻度组(NIHSS评分≤4分,42例)、中重度组(NIHSS评分>4分,50例)。纳入标准:(1)符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》[7]中AIS判定标准,经MRI、CT证实;(2)首次发病,发病10 h内入院。排除标准:(1)合并痛风、急慢性感染者;(2)合并脑出血、肾功能不全者;(3)合并心源性栓塞、冠心病等心功能不全者;(4)合并动静脉畸形、其他神经系统病变者;(5)合并血液类疾病、免疫系统疾病、肿瘤者;(6)失访者。另纳入同期本院体检健康者92例为对照组,男51例,女41例;年龄47～76岁,平均(61.23±11.67)岁。收集所有受试者总胆固醇(TC)、血小板计数、舒张压、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、吸烟史、甘油三酯(TG)、收缩压、平均血小板体积、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、尿酸等资料。本研究获得本院伦理委员会批准,受试者或其家属签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1标本收集 收集AIS患者入院后及体检健康者体检当日4～5 mL空腹外周静脉血,静置30 min,4 800 r/min离心5 min,分离血清,分装,保存于-70 ℃低温冰箱中待测。

1.2.2实时荧光定量PCR(qPCR)法测定血清LncRNA FOXD3-AS1水平 解冻血清,首先,以TRIzol试剂(批号15596018,北京同立海源生物科技有限公司)提取标本总RNA;利用反转录试剂(批号CDNA-200 rxn,美国Molecular Innovations公司)合成cDNA,应用qPCR试剂(批号QPK-201,日本TOYOBO公司)、qPCR仪(型号PikoReal,美国Thermo Scientific公司)扩增cDNA,收集检测结果。qPCR仪参数:97.4 ℃ 8 min;96 ℃ 30 s,58.2 ℃ 20 s,62.4 ℃ 15 s,40个循环。LncRNA FOXD3-AS1检测以β-actin为内参,其中β-actin上游引物序列为5′-ACCGAGCGCGGCTACAG-3′,下游引物序列为5′-CTTAATGTCACGCACGATTTCC-3′;LncRNA FOXD3-AS1上游引物序列为5′-GGTGGAGGAGGCGAGCATG-3′,下游引物序列为5′-AGCCGACAGACAGGGATTGG-3′。北京同立海源生物科技有限公司负责引物合成。以2-ΔΔCt法计算LncRNA FOXD3-AS1相对表达水平。

1.2.3酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平 按人TNF-α ELISA试剂盒(批号SEKH-0047,北京索莱宝科技有限公司)说明书配制TNF-α的标准样品溶液,解冻血清,并在酶标仪(型号SAF-680T,上海巴玖实业有限公司)波长450 nm处,测定TNF-α标准品溶液及血清的吸光度,绘制TNF-α的标准回归曲线,结合TNF-α的标准方程,计算血清TNF-α水平。

1.3随访 所有AIS患者出院后均随访3个月,利用改良Rankin量表(mRS)评分[8]对AIS患者进行生活能力评估,依据mRS评分将其分为预后良好组(mRS评分<3分,48例)、预后不良组(mRS评分≥3分,44例)。

2 结 果

2.1两组临床资料比较 与对照组比较,AIS组患者HDL-C水平降低(P<0.05),TG、尿酸水平升高(P<0.05);两组性别、年龄、TC、血小板计数、舒张压、吸烟史、收缩压、平均血小板体积、LDL-C比较,差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 两组临床资料比较(n/n或

2.2两组血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平比较 与对照组比较,AIS组患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平升高(P<0.05)。见表2。

表2 两组血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平比较

2.3多因素Logistic回归分析AIS发生的危险因素 以AIS是否发生为因变量,以TG、尿酸、HDL-C、LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α为自变量,行多因素Logistic回归分析,结果显示,高水平TG、尿酸、LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α是AIS发生的独立危险因素(P<0.05)。见表3。

表3 多因素Logistic回归分析AIS发生的危险因素

2.4AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平与TG、尿酸的相关性分析 Pearson相关分析结果显示,AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平与TG、尿酸均呈正相关(P<0.05),见表4;AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平与TNF-α呈正相关(r=0.586,P<0.001),见图1。

图1 AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平与TNF-α的相关性分析

表4 AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平与TG、尿酸的相关性

2.5血清LncRNA FOXD3-AS1水平与AIS发生风险的关系 以是否患AIS为因变量,以血清LncRNA FOXD3-AS1水平四分位数分组为自变量,血清LncRNA FOXD3-AS1四分位数分组采用哑变量处理,以血清LncRNA FOXD3-AS1第一分位数为参照组,进行多因素Logistic回归分析。结果显示,随血清LncRNA FOXD3-AS1水平升高,AIS发生风险的OR增加。见表5。

表5 血清LncRNA FOXD3-AS1水平与AIS发生风险的关系

2.6不同严重程度的AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平比较 与轻度组比较,中重度组AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平升高(P<0.05),见表6。

表6 不同严重程度的AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平比较

2.7不同预后的AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平比较 与预后良好组比较,预后不良组AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平升高(P<0.05),见表7。

表7 不同预后的AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1、TNF-α水平比较

3 讨 论

AIS是一种神经功能缺损疾病,发生率逐年升高,发病机制复杂,若未能及时采取救治措施将导致偏瘫,甚至死亡,严重威胁患者生活质量和生命安全[9]。因此,寻找与AIS病理变化相关,且可评估AIS患者病情严重程度及预后的指标,对及时制订治疗方案,提高AIS患者生存质量至关重要。

LncRNA是一类不能编码蛋白质的RNA分子,可调控自噬,调节氧化应激,参与信号转导,影响炎症反应过程,与急性心肌梗死、AIS等病理发展等有关[10-12]。研究发现,敲低LncRNA FOXD3-AS1可通过上调miR-150-5p表达,进而抑制细胞凋亡,从而抑制缺氧诱导的心肌细胞损伤[13];另外,LncRNA FOXD3-AS1在心肌细胞缺血/再灌注轴中水平升高,其可能通过促进自噬,调节核因子-κB(NF-κB)信号通路进而加重心肌细胞缺血/再灌注损伤[14]。本研究中,AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平较高,提示LncRNA FOXD3-AS1可能与AIS发生发展相关,推测LncRNA FOXD3-AS1可能通过调节自噬、影响NF-κB信号通路进而影响AIS病变过程,但其机制仍需深入探讨。此外,本研究显示,高水平LncRNA FOXD3-AS1是影响AIS发生的独立危险因素,且随着血清LncRNA FOXD3-AS1水平升高,AIS发生风险随之增加,临床应及时监控患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平,预防AIS发生。

AIS引发的神经缺损与AIS患者预后及高病死率关系密切[15-16]。本研究通过比较中重度组与轻度组AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平,结果显示,中重度神经功能缺损患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平较高,提示LncRNA FOXD3-AS1可能与AIS疾病严重程度相关,LncRNA FOXD3-AS1有望成为评估AIS患者神经功能缺损程度的辅助指标。进一步研究发现,预后不良的AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平高于预后良好者,提示LncRNA FOXD3-AS1可能与AIS患者预后密切相关,LncRNA FOXD3-AS1可作为判断AIS患者预后的潜在指标。

AIS患者体内存在代谢异常,本研究AIS患者HDL-C水平降低,TG、尿酸水平升高,与李露露等[15]研究相符,且高水平TG、尿酸是AIS发生的独立危险因素,提示AIS患者存在血脂、尿酸异常,临床应及时监控TG、尿酸水平,防治AIS。进一步分析显示,AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平与TG、尿酸均呈正相关,提示LncRNA FOXD3-AS1可能与血脂、尿酸共同影响AIS疾病进展。

TNF-α是一种炎症因子,在缺血缺氧时,其水平升高,损伤神经细胞[17-18]。研究发现,TNF-α在AIS患者血清中水平升高,TNF-α可能在AIS发生发展中发挥促炎作用[19-20]。本研究中,AIS患者血清TNF-α水平升高,与步霄等[19]研究结果一致,且高水平TNF-α是AIS发生的独立危险因素,AIS患者血清TNF-α水平与TG、尿酸呈正相关,提示TNF-α可能与TG、尿酸协同参与AIS病变过程。进一步研究显示,中重度神经功能缺损患者血清TNF-α水平较高,且预后不良的AIS患者血清TNF-α水平高于预后良好者,表明TNF-α可能与AIS疾病严重程度及预后相关,测定血清TNF-α水平有助于评估AIS患者神经功能缺损程度及预后情况。此外,TONG等[14]研究认为,LncRNA FOXD3-AS1通过影响NF-κB信号通路,进而升高TNF-α水平,故本研究分析了AIS患者血清LncRNA FOXD3-AS1水平与TNF-α的相关性,结果显示,LncRNA FOXD3-AS1水平与TNF-α呈正相关,提示LncRNA FOXD3-AS1可能与TNF-α共同影响AIS病变进程,推测LncRNA FOXD3-AS1通过调节NF-κB信号通路,进而促进TNF-α释放,加强炎症反应,从而在AIS中起促进作用,但其机制有待进一步探究。

综上所述,LncRNA FOXD3-AS1在AIS患者血清中水平升高,与TNF-α呈正相关,其水平越高,AIS发生风险越高,且LncRNA FOXD3-AS1与AIS严重程度、预后密切相关。本研究为临床诊治AIS,评估AIS患者病情、预后提供了新靶点,但本研究未深入探讨LncRNA FOXD3-AS1在AIS中的作用机制及其预测AIS患者预后的价值,且样本量较少,后期将扩大样本从多角度进行深入研究。