人参叶葡萄籽胶囊抗氧化活性研究

姜波，李云涛，郭建敏，任瑞涛，曲悦

哈尔滨怡康药业有限公司（哈尔滨 150000）

衰老是生命过程中正常的生理现象，国内外学者从细胞分子水平探索生物衰老机制，提出自由基的衰老学说[1-3]，已发现有100多种疾病与自由基脂质过氧化损伤有关，如动脉粥样硬化、心血管疾病、糖尿病、白内障等常见老年病[4-5]。过量的自由基是引起体内细胞、组织、器官的损伤，也是使机体生锈、导致衰老和疾病的根源[6-7]。利用外来抗氧化物的补充，帮助人体降低过多的自由基，免除不安全的自由基毒素对细胞、器官的破坏，预防衰老及消除疾病，成为现代社会的趋势和时尚。

中医对人体衰老的认识源远流长，其中肾虚致衰之说为大多数学者公认，肾虚致衰是肾元之阳气和肾藏之精气亏损，虚少，五脏气血津液生化无源导致的诸多衰老病态和衰老过程[8-9]。

人参叶葡萄籽胶囊是哈尔滨怡康药业生产的一款保健食品，以我国传统中医理论为组方指导，其中人参叶提取物具大补元气、复脉固脱、补脾益肺之功，大豆提取物可补充人体肾经循行的腰胯、下肢等部位的气血不足，并能引人参叶功能下行，葡萄籽提取物可通透经络，生发人体生命潜能，改善人体疲劳、乏力、虚火烧烁等，再配以鲑鱼籽补充人体阳气运行必要的物质基础。此次试验利用动物试验对人参叶葡萄籽胶囊的抗氧化功效进行验证，考证中医原理组方的有效性及安全性。

1 材料与方法

1.1 样品

人参叶葡萄籽胶囊（生产批号20210301，哈尔滨怡康药业有限公司）。

1.2 试验动物

选用中国医学科学院试验动物研究所繁殖的昆明种健康清洁级10月龄老龄雌性小鼠40只，按血清丙二醛水平随机分成4组。

1.3 剂量

试验设人体推荐量的5，10和30倍为低、中和高剂量组。受试物用纯化水配制。每日1次经口给予，连续灌胃55 d后测各项指标。同时设空白对照组。

1.4 仪器与试剂

755分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；ALC-110电子天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；RF-5310PC型荧光分光光度计（日本岛津公司）；TG16台式离心机（长沙英泰仪器有限公司）；恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）；SOD试剂盒；MDA试剂盒；GSH-Px试剂盒；氯仿、甲醇等，均为分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司。

1.5 试验方法

1.5.1 心肌脂褐质的含量测定

取心肌，称重。加入氯仿甲醇混合溶液，用匀浆器在45 ℃水浴中匀化制成匀浆。加入蒸馏水，离心后小心吸去水层，将下层氯仿甲醇溶液取出，向其中加入0.2 mL甲醇振荡混匀，使之清澈透明，置紫外灯下照射30 s，测定荧光强度。按式（1）计算心肌脂褐质含量（μg/g组织），若受试物组心肌脂褐质含量明显低于空白对照组，且有显著性差异（P＜0.05），可判定该受试物有降低心肌脂褐质含量的作用。

1.5.2 抗氧化酶活力测定

1.5.2.1 血清超氧化物歧化酶（SOD）活力测定

由小鼠眼内眦静脉丛取血0.5 mL，按3 000 r/min离心10 min后按表1操作。SOD活力（U/mL）按式（2）计算。

表1 血清超氧化物歧化酶（SOD）活力测定中试剂用量

1.5.2.2 全血中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力测定

由小鼠眼内眦静脉丛取血10 μL，加蒸馏水至1 mL，配成1∶99（V/V）的溶血液后按表2及表3操作。GSH-Px活力（U/mL）按式（3）计算

表2 酶促反应中试剂用量

表3 显色反应中试剂用量

GSH-Px活力单位（U/mL全血）=[lg（A非酶管-A空白管）-lg（A样品管-A空白管）]/（3 min×0.004 mL） （3）

1.5.3 数据处理

用SPSS软件进行数据处理。

2 结果与讨论

2.1 人参叶葡萄籽胶囊对老龄雌性小鼠体重的影响

由表4可见，老龄雌性小鼠给予人参叶葡萄籽胶囊前初始体重与给药55 d后体重在各剂量组与空白对照组间相比较，无显著性差异（P＞0.05），即人参叶葡萄籽胶囊对老龄雌性小鼠体重无不良影响。

表4 人参叶葡萄籽胶囊对老龄雌性小鼠体重的影响（±SD）

表4 人参叶葡萄籽胶囊对老龄雌性小鼠体重的影响（±SD）

组别动物数/只初始体重试验后体重体重/gP值体重/gP值空白对照组1046.8±1.447.4±1.6 0.1 g/(kg·Bw) 1046.3±1.3 0.419 47.3±1.4 0.837 0.2 g/(kg·Bw) 1047.0±1.0 0.776 47.6±1.6 0.847 0.6 g/(kg·Bw) 1047.0±1.1 0.734 47.5±1.5 0.932

2.2 人参叶葡萄籽胶囊对老龄雌性小鼠心肌脂褐质的影响

由表5可见，经口给予老龄雌性小鼠人参叶葡萄籽胶囊55 d后，其心肌脂褐质在0.2 g/（kg·Bw）组、0.6 g/（kg·Bw）组与空白对照组相比较，有显著性差异（P＜0.05），即人参叶葡萄籽胶囊在0.2 g/（kg·Bw）组和0.6 g/（kg·Bw）组均能降低老龄雌性小鼠心肌脂褐质含量。

表5 人参叶葡萄籽胶囊对老龄雌性小鼠心肌脂褐质的影响（±SD）

表5 人参叶葡萄籽胶囊对老龄雌性小鼠心肌脂褐质的影响（±SD）

组别动物数/只心肌脂褐素/(μg·g-1) P值空白对照组100.64±0.04 0.1 g/(kg·Bw) 100.61±0.030.105 0.2 g/(kg·Bw) 100.60±0.04*0.046 0.6 g/(kg·Bw) 100.59±0.04*0.029注: *代表与空白对照组相比较有显著性差异。

2.3 人参叶葡萄籽胶囊对老龄雌性小鼠血清SOD活力的影响

由表6可见，经口给予老龄雌性小鼠人参叶葡萄籽胶囊55 d后，各剂量组血清SOD活力与空白对照组相比较，无显著性差异（P＞0.05），即人参叶葡萄籽胶囊对老龄雌性小鼠的血清SOD活力无影响。

表6 人参叶葡萄籽胶囊对老龄雌性小鼠血清SOD活力的影响（±SD）

组别动物数/只 血清SOD活力/(U·mL-1) P值空白对照组10274.0±19.1 0.1 g/(kg·Bw) 10278.6±23.90.640 0.2 g/(kg·Bw) 10277.1±19.50.724 0.6 g/(kg·Bw) 10279.0±16.00.534

2.4 人参叶葡萄籽胶囊对老龄雌性小鼠全血中谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响

由表7可见，经口给予老龄雌性小鼠人参叶葡萄籽胶囊55 d后，其全血中谷胱甘肽过氧化物酶活力在0.2 g/（kg·Bw）组、0.6 g/（kg·Bw）组与空白对照组相比较，有显著性差异（P＜0.05），即人参叶葡萄籽胶囊在0.2 g/（kg·Bw）组和0.6 g/（kg·Bw）组均能提高老龄雌性小鼠全血中谷胱甘肽过氧化物酶活力。

表7 人参叶葡萄籽胶囊对老龄雌性小鼠全血中谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响（±SD）

表7 人参叶葡萄籽胶囊对老龄雌性小鼠全血中谷胱甘肽过氧化物酶活力的影响（±SD）

组别动物数/只 GSH-PX/(U·mL-1全血) P值空白对照组1050.3±1.1 0.1 g/(kg·Bw) 1051.2±2.40.070 0.2 g/(kg·Bw) 1053.2±2.8*0.007 0.6 g/(kg·Bw) 1054.5±4.3*0.008注: *代表与空白对照组相比较有显著性差异。

3 结论

综上，经口给予老龄雌性小鼠人参叶葡萄籽胶囊55 d后，与空白对照组相比较，产品可在0.2 g/（kg·Bw）和0.6 g/（kg·Bw）组降低心肌脂褐质含量，提高全血中谷胱甘肽过氧化物酶活力，且对小鼠体重增长无不良影响。人参叶葡萄籽胶囊以中医理论为基础组方，研究验证了人参叶葡萄籽胶囊的抗氧化功能，并为类似产品的开发提供参考依据。