陈爱华,田应苹,单晓鸾,薛飞,肖丽娇,杨云贤
(1.乳山市海洋发展局,山东 威海 264500;2.贵州大学动物科学学院,贵州 贵阳 550025;3.播州区农业农村局,贵州 遵义 563100)
鱼类血液指标,可反映鱼体免疫、健康、疾病、营养、代谢以及环境适应等方面的状况。很多学者通过鱼类血液生理生化的各种指标,研究鱼类生长发育的最佳饲养方法、饲料的营养成分比以及濒危物种的保护。徐端红等[1]研究发现,10%脂肪水平饲料中,添加1 g/kg L-肉碱,可改善鲤机体组成,降低脂质过氧化水平。在饲料中添加0.1%乳化剂,可以提高建鲤对饲料的利用率,使建鲤保持较高的饲料蛋白质水平,进而影响其体内的蛋白质代谢[2]。Hisnawi 等[3]研究枯草芽孢杆菌饲料添加剂对鲤血液参数、血清参数和细胞因子水平的影响时发现,枯草芽孢杆菌对改善鲤健康状况有一定作用。彭英海等[4]通过对比池塘鲤和稻田鲤的肌肉成分,发现采用稻田养殖模式的鲤,品质更佳。
近年来,都匀市为了拓宽农民增收致富渠道,充分利用稻鱼资源,发展资源节约和环境友好型渔业循环经济,把稻田养鱼新技术示范推广,作为近几年的主推技术,引导农民加大投入,提高稻田养鱼的大面积综合生产能力。现于2021 年4月,对都匀稻田鲤血液常规生化指标进行检测分析,并与禾花鲤、麦溪鲤相对应的血液生化指标进行比较,拟为都匀稻田鲤养殖的健康发展,提供基础数据。
试验稻田鲤来自贵州省都匀市匀东镇,平均体质量(250±10)g,平均体长(18.5±3.0)cm,无病无伤、体格健壮,运回贵州大学水产实验室2 m3养殖缸内暂养。暂养期间,及时清除稻田鲤排泄物,每个养殖缸放置1 个曝气石,换水必须使用曝气1 d 以上的水。试验器具包括毛巾、5 mL 注射器、采血管、冰块、泡沫箱(保温)、一次性橡胶手套、酒精棉、镊子。试剂为千分之一抗凝剂、乙醇。
检测了都匀稻田鲤丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、球蛋白(GLB)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)8 项血液生化指标,与潘正坤等[5]研究的禾花鲤(30~50 g)和麦溪鲤(80~100 g)相对应的血液生化指标进行比较分析。
1.3.1 样本采集
随机选取6 尾鱼,做标记,用5 mL 的注射器,在其尾静脉处抽取2 mL 以上血液,加入到加了抗凝剂的采血管内,放入加冰块的泡沫箱保存。
1.3.2 指标测定
血液检测试剂盒来自南京建成工程研究所,使用方法根据说明书。试剂盒分别为:
(1)白蛋白(ALB)测定试剂盒(带标准:溴甲酚绿法)(微板法);
(2)免疫球蛋白(G)(IgG)测试盒;
(3)直接胆红素(D-BIL)试剂盒(化学氧化法)(微板法);
(4)总胆红素(T-BIL)试剂盒(化学氧化法)(微板法);
(5)天门冬氨酸氨基转移酶(谷草转氨酶/AST/GOT)测试盒(微板法);
(6)丙氨酸氨基转移酶(谷丙转氨酶/ALT/GPT)测试盒(赖氏法)微板法;
(7)总蛋白(TP)测定试剂盒(带标准:考马斯亮蓝法)。
试验数据采用Excel 进行处理,结果用(平均值±标准差)表示。
都匀稻田鲤与禾花鲤、麦溪鲤血液生化指标比较见表1。
表1 都匀稻田鲤与禾花鲤、麦溪鲤血液生化指标比较
由表1 可见,都匀稻田鲤的AST、ALT 平均值均低于禾花鲤和麦溪鲤,而麦溪鲤的AST、ALT 平均值低于禾花鲤,这就说明禾花鲤2 种酶的活性强于麦溪鲤和都匀稻田鲤,麦溪鲤酶活性高于都匀稻田鲤。TP、ALB 平均值大小依次为:都匀稻田鲤、禾花鲤、麦溪鲤;3 种鲤的GLB 平均值大小依次为:禾花鲤、都匀稻田鲤、麦溪鲤。
都匀稻田鲤的TBIL 均高于其他2 种鲤,禾花鲤TBIL 高于麦溪鲤;都匀稻田鲤DBIL 平均值小于禾花鲤和麦溪鲤,平均值最大的是麦溪鲤,其次是禾花鲤,平均值最小的是都匀稻田鲤;都匀稻田鲤的IBIL 平均值小于麦溪鲤和禾花鲤,平均值最大的是禾花鲤。都匀稻田鲤的胆红素指标稳定,表明稻田鲤在养殖的过程中鱼体并未受到严重损伤,所以炎症代谢并不强烈。
都匀稻田鲤与其他鱼血液生化指标的对比见表2。
表2 都匀稻田鲤与其他鱼血液生化指标的对比
ALT、AST 这2 种酶是动物组织细胞中的重要转氨酶,主要参与机体内氨基的转运,在肝细胞和心肌细胞的数量最多,它们在血清中的活力,是反映肝脏和心脏受损伤程度的重要指标之一[6-11]。鱼机体没有受到损伤或疾病时,血清中的ALT、AST含量低。若是鱼体受损,细胞内的ALT、AST 大量进入血液,所以当检测指标中这2 种转移酶过高时,说明鱼机体健康异常,ALT、AST 2 种转氨酶在血清中的变化,可以反映肝脏等组织器官的功能状况,这2 种转氨酶,是如今评定鱼体内肝脏是否健康的最具特异性和最广泛应用的生化指标[10]。程辉辉等[12]在研究黄颡鱼患柱形病时发现,其血液中ALT、AST活性显著高于健康鱼。
由表2 可见,ALT 的活性从大到小依次为:微山湖鲤[13]、黑鲷[15]、都匀稻田鲤、长吻[10]、鲇[14]、;AST 活性从大到小依次为:微山湖鲤[13]、都匀稻田鲤、鲇[14][16]、长吻[10]、黑鲷[15],表明不同种类鱼的ALT、AST 活性存在较大的差异。
饥饿对鱼类的血清酶也有一定影响,而不同鱼类在饥饿情况下,酶的变化也不同。陈晓耘等[17]研究发现,饥饿后的南方鲶血清AST 和ALT 低于饥饿前水平,但在饥饿后,鲤AST 和ALT 浓度却增加。肌体受伤或患病时,酶类指标也会发生变化。米瑞芙等[18]研究发现,患败血症的鲢,AST 显著增高;黄琪琰等[19]研究患溶血性腹水病异育银鲫时发现,其AST 和ALT 明显高于正常鱼。
在鱼体血浆中,蛋白质含量最多的是ALB 和GLB,ALB 在肝脏中合成,血清中ALB 和GLB 的比值是一定的[13]。蛋白质无论对人还是动物体,都有着巨大的作用:(1)维持正常血浆胶体渗透压;(2)运输物质;(3)免疫功能;(4)修补作用:在人和动物体内,血浆蛋白质会参与组织蛋白的代谢,并组织蛋白质保持平衡;(5)缓冲作用:维持血浆pH 值恒定[13]。
鱼体中ALB、TP 等含量,可反映鱼体内蛋白质的吸收情况和代谢情况。当所测的ALB 和TP 含量增高,表示鱼体的吸收和代谢强度增加,有利于合成蛋白质以及氮的排出[6]。由表1、表2 可见,都匀稻田鲤ALB 和TP 均高于禾花鲤、麦溪鲤以及微山湖鲤,而相对于黑鲷、鮸,都匀稻田鲤的TP 和ALB低于这2 种鱼。都匀稻田鲤的ALB 和TP 平均值,与亲缘关系较近的禾花鲤、麦溪鲤以及微山湖鲤接近,而与黑鲷和2 种鱼相差较大。说明不同种类鱼的ALB 和TP 有明显差异,饥饿导致TP、ALB和GLB 下降。杨严鸥等[20]研究发现,黄颡鱼饥饿时,血清胆固醇、血清TP、ALB 和GLB 含量,呈逐渐下降趋势。
胆红素对鱼类机体抗氧化有着重要的生理作用,特别是其消除自由基和抑制脂质过氧化的能力,超过维生素E 和维生素C[7]。血液中的胆红素可分为IBIL 和DBIL,前者是胆红素进入血液后,会与血浆清蛋白或者α1球蛋白(以清蛋白为主)结合成溶解难度比较大的复合体,限制胆红素自由通过各种生物膜,减少游离的胆红素进入组织细胞,产生毒性作用,后者是IBIL 随着血液运输到肝脏,胆红素就迅速与清蛋白分离,进入肝细胞,与UDP-葡萄糖醛酸反应,生成葡萄糖醛酸胆红素,是肝脏解毒作用的一种方式[21]。TBIL 在血液中的含量,与红细胞破坏和肝细胞受损有关[8]。当鱼肝胆病变时,因肝脏的损伤,导致鱼体内的胆红素代谢途径被阻,导致鱼体内胆红素含量发生变化[22]。本试验中,3 种鲤胆红素的数值均较平稳,说明3 种鲤体并未受到严重损伤,炎症反应不强烈。
都匀稻田鲤取自贵州省黔南州都匀市匀东镇,禾花鲤来自广西清远连山壮族瑶族自治县示范农场稻田养鱼示范基地,麦溪鲤是肇庆碧波农业发展有限公司的池塘养殖品种,微山湖鲤选自山东省微山县微山湖渔场。4 种鲤养殖模式不同,都匀稻田鲤、禾花鲤是稻田养殖,而麦溪鲤、微山湖鲤为池塘养殖。
目前,大多池塘养殖,为追求高经济收益,采用高密度养殖,导致池塘鱼的活动空间减小,鱼体相互碰撞,造成其体表损伤,结果卖相不佳,收益下降。稻田鲤养殖密度比池塘养殖密度小,其活动空间大,以稻田里天然馈赠的大量微生物为食,可实现稻鱼双丰收。彭英海等[4]研究了3 个县稻田和池塘养殖鲤的肌肉营养成分,表明稻田养殖的鲤,营养成分和品质均优于池塘养殖鲤。
本试验中,稻田养殖的都匀稻田鲤各项指标均优于稻田养殖的禾花鲤,2 种稻田鲤的大部分生化指标值相差较大,来源地分别是贵州黔南和广西清远连山壮族瑶族自治县。贵州和广西分别处于中国的西南部和中国南部,两省相邻,但气候不同,贵州省属于亚热带湿润季风气候,气候温暖湿润,气温变化小,冬暖夏凉,雨热同季[23]。广西属于亚热带季风气候,气候温暖,热量丰富,雨水丰沛,干湿分明,季节变化明显,日照适中,日照时数冬少夏多。2 种稻田鲤血液生化指标值的差异,可能是生活环境、气候不同等因素造成,表明都匀环境气候适合稻田养殖,在稻田养殖方面有很好的发展前景。
血液生化指标对鱼类生理特征、代谢水平以及健康状况有着重要影响。这些生化指标水平的高低,会因为各种因素而改变,比如种类、食性以及生长环境等。生长环境不同,水环境因子的差别,可能造成其血液生化指标值不同;种类不同,血液生化指标也有明显的差异。