盐酸溴己新葡萄糖注射液中盐酸溴己新含量测定方法改进*

王婷婷，陈乃江

（江苏省连云港市食品药品检验检测中心，江苏 连云港 222006）

盐酸溴己新有较强的黏痰溶解作用，主要用于治疗慢性支气管炎及其他呼吸道疾病［1-2］。国内生产企业有石家庄四药有限公司和江西科伦药业有限公司，目前分别执行局颁标准YBH04412004 - 2016Z［3］和YBH10902004-2016Z［4］，均采用高效液相色谱法测定盐酸溴己新的含量。实际操作中，以2 种流动相体系测定盐酸溴己新时会发生粘针现象，重复性差，现行标准难执行［5］。为了更有效地控制产品质量，确保临床疗效，本研究中改进了盐酸溴己新的含量测定方法，并进行了方法学验证，以为盐酸溴己新葡萄糖注射液质量标准的完善提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

U3000型高效液相色谱仪（赛默飞世尔科技有限公司）；BP211D 型电子分析天平（德国赛多利斯公司，精度为十万分之一）；KH - 700DE 型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司，功率为700 W，频率为40 kHz）；Milli-Q型超纯水仪（德国默克密理博公司）。

1.2 试药

盐酸溴己新对照品（中国食品药品检定研究院，批号为100427-201903，含量为99.8%，规格为100 mg）；乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾、氢氧化钠均为分析纯，水为超纯水；盐酸溴己新葡萄糖注射液（石家庄四药有限公司，批号分别为1808023102，1809113102，1809113103；江西科伦药业有限公司，批号分别为B18051902，B18080804、B18080901），规格均为每瓶100 mL，含盐酸溴己新4 mg、葡萄糖5 g。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm，5µm）；流动相：磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾1.0 g，加900 mL 水使溶解，用0.5 mol/ mL 氢氧化钠溶液调节pH 至7.0，用水稀释至1 000 mL）-乙腈（20∶80，V/V）；流速：1.0 mL/min；柱温：40 ℃；检测波长：249 nm；进样量10µL。理论板数按盐酸溴己新峰计应不低于2 000。

2.2 溶液制备

取盐酸溴己新对照品20.89 mg，精密称定，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀，作为盐酸溴己新对照品贮备液（质量浓度为0.208 5 mg/ mL）。精密量取盐酸溴己新对照品贮备液适量，加甲醇定量稀释成每1 mL 含盐酸溴己新20.85 µg 的溶液，滤过，取续滤液，作为对照品溶液。精密量取样品5 mL，置10 mL容量瓶中，加流动相稀释成每1 mL含盐酸溴己新20µg的溶液，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。按处方工艺制备不含盐酸溴己新的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验：精密量取2.2 项下3 种溶液各适量，按2.1项下色谱条件进样测定。色谱图见图1。

1. 盐酸溴己新A. 对照品溶液 B，C. 供试品溶液（批号分别为1808023102，B18051902） D. 阴性对照品溶液图1 高效液相色谱图1.Bromhexine hydrochlorideA.Reference solution B，C.Test solution（batch numbers were 1808023102 and B18051902，respectively） D.Negative reference solutionFig.1 HPLC chromatograms

线性关系考察：分别精密吸取盐酸溴己新对照品贮备液（质量浓度为0.208 5 mg/ mL）适量，加甲醇稀释，得质量浓度分别为5.21，10.42，20.85，31.27，41.70，52.12，62.54，83.39 µg/ mL 的系列对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，以对照品溶液质量浓度（X，µg/mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=0.26X-0.102 3（r=0.999 9，n=8）。结果表明，盐酸溴己新质量浓度在5.21～83.39µg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取对照品溶液（质量浓度为20.85µg/mL）10 μL，按2.1 项下色谱条件重复进样测定6 次，记录峰面积。结果盐酸溴己新峰面积的RSD为0.81%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批（批号B18051902）样品，依法平行制备供试品溶液6 份，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算含量。结果盐酸溴己新平均含量为41.16µg/mL，RSD为1.03%（n=6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一批（批号B18051902）样品，依法制备供试品溶液，分别于0，2，4，8，12，16，24 h 时按2.1 项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果峰面积的RSD为0.98%（n= 7），表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好。

加样回收试验：精密量取9 份已知含量的样品（批号B18051902）5 mL，置20 mL容量瓶中，分为3组，每组分别精密加入对照品溶液（质量浓度52.12 μg / mL）2，4，6 mL，加流动相稀释并定容，摇匀，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算加样回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n=9）Tab.1 Results of the recovery test（n=9）

耐用性试验：选取不同型号的色谱柱［CAPCELL PAK C18柱（250 mm×4.6 mm，5µm），Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm，5µm），Waters Symmetry C18柱（250 mm × 4.6 mm，5 µm）］，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录色谱图。结果样品中的盐酸溴己新峰与其他峰分离完全，表明方法耐用性良好。

2.4 样品含量测定

分别取6 批样品，各2 份，依法制备供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录色谱图，并计算含量。结果见表2。

表2 盐酸溴己新含量测定结果（µg/mL，n=2）Tab.2 Results of the content determination of bromhexine hydro-chloride in samples（µg/mL，n=2）

3 讨论

标准YBH04412004-2016Z中，以甲醇-0.05 mol/L醋酸铵溶液（89∶11，V/V）为流动相，取供试品溶液于249 nm 波长处测定；标准YBH10902004- 2016Z 中，以甲醇-水-0.01 mol/mL三乙胺的甲醇溶液（95∶5∶1.5，V/V/V）为流动相，取供试品溶液于249 nm 波长处测定。但实际操作中发现，供试品溶液中的葡萄糖遇到流动相中的甲醇时会析晶，造成色谱峰鬼峰，重复进样时峰面积的RSD为17%，提示仪器精密度差。究其原因，供试品溶液和流动相中甲醇浓度过高，故本研究中改进局颁标准YBH04412004 - 2016Z 和YBH10902004 -2016Z中盐酸溴己新的含量测定方法。

查阅文献［6-10］，片剂、注射剂、滴丸剂、滴鼻剂、吸入粉雾剂等单一制剂中盐酸溴己新含量测定已有相关报道，但关于复方制剂盐酸溴己新葡萄糖注射液中盐酸溴己新含量尚无报道。曾采用原标准的色谱条件，将样品分别用流动相、水稀释2 倍后再次进样，结果供试品溶液的粘针现象未明显改善。分别考察了流动相甲醇- 水溶液、乙腈- 水溶液、乙腈- 磷酸盐缓冲液，发现乙腈洗脱能力强，出峰较快，流动相中不加磷酸盐时色谱峰理论板数达不到要求，定量不准确。故选择乙腈-磷酸盐缓冲液作为流动相。将供试品溶液用乙腈-磷酸盐缓冲液稀释1倍后进样，进一步减少葡萄糖的进样量，原方法存在问题是鬼峰和重复进样精密度差及粘针。更换流动相、稀释供试品溶液后，盐酸溴己新色谱峰的理论板数均大于2 000。

综上所述，改进后的方法操作简便、专属性强、重复性好、结果准确可靠，符合定量要求，可用于盐酸溴己新葡萄糖注射液的质量控制。