野生灵芝JXLZ-3菌株生物学特性研究

黄保成 胡秀月 韦娇君 王灿琴 韦仕岩 王晓国

（1 田林县科学技术情报研究所，广西 田林 533300；2 田林县经济作物站，广西 田林 533300；3 广西农业科学院微生物研究所，广西 南宁 530007）

灵芝Ganoderma lucidum，是一种珍贵的食药用真菌[1]，主要分布于我国的热带、亚热带地区，以海南省、贵州省、云南省分布种类最多[2-3]。灵芝在我国被视为宝贵的中药材，中医学家认为灵芝具有滋补强体、扶正固本、延年益寿等功效[4]，有着悠久的食用历史，可用于泡茶、泡酒、入菜等[5]。目前，我国栽培推广的灵芝品种较少，且部分品种因长年使用已出现减产、品质下降等退化现象。灵芝优良新品种选育已成为食用菌育种工作者的首要任务，而野生灵芝种质资源的挖掘是灵芝新品种选育的重要途径之一。因此采集具有优良性状的野生灵芝菌株[6]，并驯化栽培势在必行[7]。

笔者对一株野生灵芝进行生物学特性研究，探索该菌株菌丝最佳生长条件，为野生灵芝驯化栽培及种质创新提供数据支撑。

1 材料与方法

1.1 供试菌株及培养基

供试野生灵芝子实体于2019 年采自广西壮族自治区百色市靖西市湖润镇，经组织分离、纯化和鉴定，获得纯菌株，编号为JXLZ-3，保藏于广西农业科学院微生物研究所。供试培养基为PDA 培养基。该菌株人工栽培子实体见图1。

图1 人工栽培灵芝JXLZ-3子实体

1.2 试验方法

1.2.1 培养温度试验

将供试菌株接种于PDA 培养基（规格9 cm 平皿）中，于28 ℃恒温培养箱避光活化培养，待菌丝长满培养基后，用直径5 mm的打孔器从菌落边缘取大小相同的圆形菌块，转接于空白PDA 培养基上，然后分别置于15 ℃、20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃恒温培养箱内避光培养6 d。每个处理5个重复。

在培养过程中观察菌丝长势，采用“十”字交叉法测量菌落直径，计算菌丝平均生长速度。

菌丝平均生长速度=菌落半径（mm）∕培养天数（d）。

1.2.2 培养基pH试验

设置PDA 培养基pH 为4、5、6、7、8、9、10、11，高温灭菌后倒平板，接种后于28 ℃恒温培养箱避光培养7 d。每个处理5 个重复。接种、观察及测量方法同1.2.1。

1.2.3 培养基碳源试验

PDA 培养基分别加入等量的蔗糖、果糖、乳糖、麦芽糖、淀粉、葡萄糖，配制不同碳源培养基，高压灭菌后倒平板，接种后于28 ℃恒温培养箱避光培养7 d。每个处理5 个重复。接种、观察及测量方法同1.2.1。

1.2.4 培养基氮源试验

PDA 培养基中分别加入等量的酵母粉、牛肉膏、蛋白胨、硝酸铵、硫酸铵、尿素、硝酸钾，配制不同氮源培养基，高压灭菌后倒平板，接种后于28 ℃恒温培养箱避光培养7 d。每个处理5 个重复。接种、观察及测量方法同1.2.1。

1.3 数据分析

采用DPS 软件对以上单因素试验数据进行方差分析和差异显著性比较，用字母标记法表示。

2 结果与分析

2.1 培养温度对灵芝JXLZ-3 菌株菌丝生长的影响

由表1、图2 可知，培养温度为15～30 ℃时，灵芝JXLZ-3 菌株菌丝均能生长，温度为30 ℃，菌丝洁白浓密且整齐，长势最强，为菌丝最适生长温度。培养温度为20 ℃、25 ℃，菌丝长速（均指平均生长速度，下同）显著慢于30 ℃，长势也相对较弱；培养温度为15 ℃，菌丝长速较慢，稀疏细弱；35 ℃下培养6 d菌丝不萌发，但再在25 ℃下培养菌丝又可恢复生长。试验培养温度间菌丝长速均存在极显著差异。

表1 不同培养温度下灵芝JXLZ-3菌株菌丝长速

图2 不同培养温度灵芝JXLZ-3菌株菌落形态（培养6 d）

2.2 培养基pH对灵芝JXLZ-3菌株菌丝生长的影响

由表2、图3 可知，灵芝JXLZ-3 菌株菌丝在8 个pH 处理培养基上均可正常生长，其菌丝长速排序：pH 5>pH 4>pH 6>pH 7>pH 8>pH 10>pH 9>pH 11。pH 5 的培养基上，菌丝长速最快，洁白浓密且整齐，长势最强；pH 4 的培养基上，菌丝长速及长势次之，但该pH的培养基质地较软，不利于转接操作；pH 6、7、8的培养基上，菌丝长速随pH上升而下降，长势变弱；pH 9、10的培养基上，菌丝虽长速较慢，但洁白浓密且整齐，长势表现较佳；pH 11的培养基上，菌丝长速最慢，且与其他pH处理有极显著差异。

表2 不同pH培养基上灵芝JXLZ-3菌株菌丝长速

图3 不同pH培养基上灵芝JXLZ-3菌株菌落形态（培养7 d）

综合菌丝长速和长势，pH 4～6的培养基上菌丝生长最好，最适pH为5。

2.3 供试碳源对灵芝JXLZ-3 菌株菌丝生长的影响

由表3、图4可知，灵芝JXLZ-3菌株菌丝在以果糖、蔗糖、葡萄糖为碳源的培养基上长速较快，且三者间无显著性差异，菌丝洁白浓密、菌落边缘整齐，长势良好；在以淀粉或麦芽糖为碳源的培养基上菌丝长速次之，菌丝浓密与整齐程度稍差，二者间无极显著差异；在以乳糖为碳源的培养基上菌丝长速较慢，与其他碳源处理有显著差异，菌丝较稀疏、细弱，长势较弱。

表3 不同碳源培养基上灵芝JXLZ-3菌株菌丝长速

图4 供试碳源培养基上灵芝JXLZ-3菌株菌落形态（培养7 d）

综合灵芝JXLZ-3 菌株菌丝长速、长势，培养基最适碳源为果糖。

2.4 供试氮源对灵芝JXLZ-3菌株菌丝生长的影响

由表4、图5 可知，在以尿素为氮源的培养基上灵芝JXLZ-3 菌株菌丝不萌发，在其他氮源培养基上菌丝均能够正常生长，菌丝长速排序：酵母粉>硝酸铵>硫酸铵>牛肉膏>硝酸钾>蛋白胨。在以酵母粉、硝酸铵、硫酸铵为氮源的培养基上菌丝生长较快，且三者间无显著差异，但在以酵母粉、硝酸铵为氮源的培养基上菌丝更洁白浓密；在以牛肉膏、硝酸钾为氮源的培养基上菌丝长速次之，二者间无极显著差异；在以蛋白胨为氮源的培养基上菌丝长速较慢，与其他氮源培养基上的菌丝长速存在极显著差异。

表4 供试氮源培养基上灵芝JXLZ-3菌株菌丝长速

图5 供试氮源培养基上灵芝JXLZ-3菌株菌落形态（培养7 d）

3 小结与讨论

灵芝JXLZ-3 菌株菌丝在15～30 ℃均能生长，最适温度为30 ℃，与钱坤等[8]、兰玉菲等[9]和刘冬梅等[10]的研究结果基本一致，但与雷萍等[11]报道的野生灵芝菌株菌丝生长适宜温度为26～28 ℃有些差异。灵芝菌丝生长适宜温度的差异是否与来自不同地理位置有关，有待进一步研究确认。

在pH 4～11 的培养基上，灵芝JXLZ-3 菌株菌丝均能生长，最适pH 为5，与白肉灵芝[12]、灵芝南GL11[13]、四川灵芝[8]的生长最适培养基pH 分别为3、6、7 不同。说明不同灵芝菌株菌丝的最适生长pH有一定的差异。

在以果糖或蔗糖为碳源培养基上灵芝JXLZ-3菌株菌丝长速较快、长势强，最适碳源为果糖，与刘冬梅等[10]、雷萍等[11]报道的最适碳源为可溶性淀粉、葡萄糖、蔗糖不同，说明不同灵芝菌株菌丝生长对碳源需求有差异。在以酵母粉、硝酸铵、硫酸铵为氮源的培养基上灵芝JXLZ-3 菌株菌丝生长良好，最适氮源为酵母粉，该结果与刘冬梅等[10]、雷萍等[11]报道的最适氮源为酵母粉一致；而与钱坤等[8]研究的四川灵芝最适氮源为牛肉膏不同，与陈旭等[13]研究的灵芝南GL11 最适氮源为蛋白胨也有差异，可能与基础培养基不同有关。

近年来广西灵芝产业发展迅速，但目前推广栽培的灵芝品种较少且部分因常年使用出现退化现象。研究结果为广西灵芝选育更新换代奠定一定基础。