利格列汀片的制备及体外释放研究

张磊，郭建鹏，姜庆伟

(1.延边大学 药学院，吉林 延吉 133002；2.北京天衡药物研究院有限公司，北京 100000)

0 引言

经济迅速发展伴随着居民生活改善，也使糖尿病等代谢性疾病在中国盛行。其中2 型糖尿病是一种持续高血糖状态的慢性代谢疾病、进展性疾病，在发现疾病后，若得不到及时有效治疗与控制，将出现各种并发症。在临床治疗中，主要治疗方式为胰岛素治疗，但仍有治疗空间，通过选择DPP-4 抑制剂利格列汀片，可以改善血糖，恢复胰岛B 细胞功能，缓解胰岛素抵抗症状[1-4]。由于仿制药与原研药品具有相同的质量和疗效，且开发技术难度相对较低和不需要长期的临床试验，因此可大幅降低药企的开发成本和市售价格，并对提高国家医疗卫生服务水平和挽救人民生命具有重要意义[5-7]。

利格列汀片原研厂家为Boehringer Ingelheim，2011 年5 月2 日首次在美国上市，同年先后在欧盟、日本上市。2013 年在国内进口，商品名为欧唐宁(TradjentaTM)，规格为5 mg[8]。目前，国内已有多家药企(如：石药集团欧意药业有限公司、四川科伦药业股份有限公司等)对该药品进行了仿制和应用，但未见将该药品的仿制药与原研药进行对比有关报道。溶出度试验模拟了药物在体外释放行为，溶出度不符合要求将影响药品的生物利用度。处方和工艺变量均会影响溶出度。在处方和工艺开发的整个过程中，都需要对该关键质量属性进行研究[9-13]。为此，文章采用不同处方及生产工艺制备利格列汀片，考察自制品在四条溶出介质中的溶出曲线，采用相似因子法与原研品溶出曲线进行对比，补充了利格列汀片的处方工艺及体外释放研究数据，增加了利格列汀片仿制药与参比制剂人体生物等效试验等效的概率。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器

1260II 高效液相色谱仪(Agilent)；FADT-800RC自动溶出仪(上海富科思分析仪器)；SQP 电子天平(北京赛多利斯科学仪器)；PHSJ-3F 实验室pH 计(上海仪电科学仪器)；KQ-500DE 数控超声波清洗器(昆山市超声)。

1.1.2 药品

仿制药：自制药品，规格为5 mg，批号为20220501、20220502、20220503、20220504、20220505、20220506、20220507、20220508、20 220509；原研药：勃林格殷格翰销售的一批欧唐宁，规格为5 mg，批号为AB4040A，效期2024 年2 月，且运输和贮存过程均符合要求。

1.1.3 试剂

乙腈(色谱级，CINC)，甲醇(色谱级，CINC)，磷酸(分析级，国药集团化学试剂有限公司)，磷酸二氢铵(分析级，国药集团化学试剂有限公司)，盐酸(分析级，国药集团化学试剂有限公司)、冰醋酸(分析级，国药集团化学试剂有限公司)、醋酸钠(分析级，国药集团化学试剂有限公司)、磷酸二氢钾(分析级，国药集团化学试剂有限公司)、氢氧化钠(分析级，国药集团化学试剂有限公司)、超纯水(北京天衡药物研究院有限公司)，利格列汀对照品(中国食品药品检定研究院)，利格列汀(山东新时代药业有限公司，含量99.3%)，甘露醇(青岛明月海藻集团有限公司)，预胶化淀粉(湖州展望药业有限公司)，共聚维酮VA64Fine(BASF SE)，硬脂酸镁(安徽山河药用辅料股份有限公司)，微晶纤维素PH-102(德国瑞登梅尔父子公司)，二氧化硅(湖州展望药业有限公司)，胃溶型薄膜包衣预混剂(上海卡乐康包衣技术有限公司)，交联聚维酮CL(BASF SE)，玉米淀粉(安徽山河药用辅料股份有限公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 湿法制粒技术制备利格列汀片

称取3 000 片处方量的利格列汀、甘露醇(粉碎后过80 目筛)、预胶化淀粉/交联聚维酮于Mini-CG 型湿法混合制粒机，混合15min，搅拌速度为200 r/min，剪切速度为200 r/min，混合均匀；在搅拌剪切作用下将共聚维酮VA64Fine 水溶液喷入干物料中制软搅拌速度为200 r/min，剪切速度为800 r/min，制软材时间5～6 min；将湿颗粒放入YK-60 摇摆颗粒机制粒，筛网目数为尼龙筛40 目；将制好的湿颗粒放入WBFIIG 型流化床进行干燥，进风温度为55～60 ℃，风量为50～60 m3/h，干燥时间30～40 min，水分≤3.0%；将干燥好的颗粒放入YZLJ 型高速整粒机进行整粒，筛网为φ01.0 mm；将制备好的颗粒计算收率，加入到SYH-10 型三维运动混合机再加入硬脂酸镁进行总混，总混时间5 min，混合频率30 Hz；将总混颗粒使用ZPW23 压片机压片，φ8.0 mm；将片芯使用BG1-5高效包衣机进行包薄膜衣，包衣增重2%～4%，即得利格列汀片，处方组成如表1 所示。

表1 湿法制粒处方组成列表

1.2.2 粉末直压技术制备利格列汀片

称取3000 片处方量的利格列汀、直压甘露醇、玉米淀粉、预胶化淀粉、交联聚维酮于SYH-10 型三维运动混合机预混，混合时间20 min，混合频率：30 Hz；再加入硬脂酸镁进行总混，总混时间5 min，混合频率30 Hz；将总混颗粒使用ZPW23 压片机压片，φ8.0 mm；将片芯使用BG1-5 高效包衣机进行包薄膜衣，包衣增重2%～4%，即得利格列汀片，处方组成如表2 所示。

表2 粉末压片处方组成列表

1.2.3 干法制粒技术制备利格列汀片

称取3 000 片处方量的利格列汀、甘露醇(粉碎过80 目筛)、微晶纤维素PH-102、预胶化淀粉、交联聚维酮CL、二氧化硅于SYH-10 型三维运动混合机预混，混合时间20 min，混合频率：30 Hz；将混合好的粉末加入到RCG100-25L 型干法制粒机进行干法制粒，进料速度：10 r/min、压辊速度：10 r/min、设定压力：16 MPa，即得颗粒；将制备好的颗粒加入到SYH-10 型三维运动中，再加入硬脂酸镁进行总混，总混时间5 min，混合频率30 Hz；将总混颗粒使用ZPW23压片机压片，φ8.0 mm；将片芯使用BG1-5 高效包衣机进行包薄膜衣，包衣增重2%～4%，即得利格列汀片，处方组成如表3 所示。

表3 干法制粒处方组成列表

1.2.4 溶出曲线的测定

(1) 色谱条件：色谱柱为辛烷基硅烷键为填充剂；流动相为磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢铵2.6，加水1 000 mL 使溶解，并用磷酸调节pH 值至3.0±0.1)-乙腈(78∶22)；流速为1.0 mL/min；柱温为50 ℃；检测波长为295 nm；进样体积10 μL。

(2)系统适用性：重复进利格列汀对照品溶液5 次，利格列汀峰面积的RSD 应不大于2.0%，拖尾因子不得过2.5。

(3)溶出条件：照溶出度测定法(中国药典2020 版第一法)，溶出介质分别为0.1mol/L 盐酸、水、pH 值6.8 磷酸盐缓冲液、pH 值4.5 醋酸盐缓冲液，溶出体积900 mL，转速为50 r/min，经5、10、15、30、45 min时取样。

(4)测定方法：分别取不同时间点的溶出液，过滤，弃去初滤液1 mL 以上，取续滤液作为供试品；另精密称取利格列汀对照品约14 mg，置50 mL 干燥的棕色量瓶中，加甲醇5 mL 使溶解，加入溶出介质35 mL，超声20 min 使利格列汀对照品溶解，用溶出介质稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液5 mL，置250 mL 棕色量瓶中，加溶出介质稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密量溶出介质、对照品溶液、供试品溶液，分别注入液相色谱仪，计算溶出曲线。

2 结果和分析

2.1 方法学考察结果

2.1.1 线性与范围

通过绘制标准曲线求出利格列汀的线性回归方程为y=116.7x-2.863 4，R2为0.999 8，利格列汀在0.56～7.84 μg/mL 呈良好的线性关系。

2.1.2 精密度

取线性100% 的溶液按照溶出曲线的测定色谱条件重复进样6 次，计算6 次的精密度，RSD 为0.3%，表明测定溶出曲线的仪器精密度良好(表4)。

2.1.3 准确度

称取对照品适量配制成相当于检测浓度10%、20%、40%、80%、100%、120%的溶液；平行配样3 份。按照溶出曲线的测定色谱条件注入液相色谱仪，结果为利格列汀的平均加样回收率为100.0%，RSD 为0.88%，表明利用该方法测定溶出曲线的准确度较好(表5)。

表5 利格列汀片溶出曲线测定回收率试验结果

2.1.4 溶液稳定性

在不同时间(0、2、4、6、8、12、24 h) 分别测定供试样品中利格列汀的峰面积，结果显示RSD 为0.1%，说明供试样品溶液在24 h 内稳定(表6)。

表6 溶液稳定性试验检查结果

2.2 自制品溶出曲线测定结果

测定结果如表7～表10 以及图2 ～图5 所示。

表7 在0.1 mol/L 盐酸的溶出曲线

表8 在水的溶出曲线

表9 在pH=6.8 磷酸盐的溶出曲线

表10 在pH=4.5 醋酸盐的溶出曲线

图2 在0.1mol/L 盐酸中溶出曲线

图3 在水中溶出曲线

图4 在pH=6.8 磷酸盐中溶出曲线

3 结语

由于利格列汀具有低溶解、高渗透的特点，因此制剂的溶出情况对人体的吸收至关重要。某种程度上来说，口服固体制剂的溶出曲线能真实反映在体内活性成分从该制剂溶出的速率与程度。文章采用HPLC法测定了自制样品和一批原研药的溶出曲线，以相似因子f2 评价不同制备处方工艺样品与原研品的溶出曲线相似性。采用湿法制粒技术，可改善物料的流动性及可压性，制备的样品溶出行为主要受崩解剂加入量以及粘合剂的浓度以及制粒时间的影响，交联聚维酮发挥毛细管作用导致片剂迅速崩解，玉米淀粉、预胶化淀粉自身具有很强的吸水膨胀性，从而瓦解片剂的结合力，膨胀率越大，崩解效率越显著，进而影响溶出行为。粘合剂主要影响制备颗粒的粉体学性质松密度、粒度分布情况进而影响自制品的溶出。粉末直压技术通过选择直压的填充剂，可以改善物料的流动性及可压性，进而可以保证混粉混合均匀性良好及进而压制成片，由于无制粒过程，溶出行为主要受崩解剂用量影响，自制品溶出行为较快[14]。干法制粒技术是在无外加液体粘合剂的情况下，经干法制粒机上下两只辊轮将松散的粉末压缩团聚成片状，然后将压实的粉末粉碎、整粒形成颗粒，从而使粉未的流动性得到改善的工艺过程。溶出行为主要受崩解剂用量及颗粒粉体学性质影响。通过调整处方组成用量以及制备工艺，最终采用湿法制粒技术制备的20220503 批样品在四条溶出介质的溶出曲线相似因子f2 均＞50，与原研品溶出曲线相似性较好，表明两个制剂溶出相似[15]。

口服固体制剂进入人体内经过胃肠道及各种酶的复杂环境最终润湿、崩解成细小颗粒，API 溶解后通过各种渗透膜最终被吸收入血，所以单纯通过体外溶出曲线预测体内生物等效情况是有局限的，仍需药学研究者继续开发出体内外相关性更强的评价方法。