黄葵总黄酮对CYP450酶的抑制作用

许 瑶，彭 英，王广基，孙建国

（中国药科大学药物代谢动力学重点实验室，南京 210009）

黄蜀葵花（Abelmoschi Corolla）为锦葵科植物黄蜀葵［Abelmoschusmanihot（L.）Medicus］的干燥花冠，有清热利湿，消肿解毒的作用，主要化学成分有黄酮类［1］、有机酸类［2］、氨基酸和核苷类［3］、多糖［4］、挥发油［5］等。它的药理活性十分广泛，包括抗糖尿病肾病［6］、抗炎和抗氧化［7］、抗惊厥和抗抑郁［8］、抗病毒［9］、免疫调节［10］、抗肿瘤［11］、抗克罗恩病［12］等。黄葵胶囊（Huangkuicapsule，HKC）是一款由黄蜀葵花乙醇提取物开发得到的中成药，临床主要用于治疗肾病综合征、糖尿病肾病以及慢性肾炎等肾脏疾病，黄葵总黄酮（HKZ）的提取和纯化过程相当于对黄蜀葵花的有效成分进行富集，与黄葵胶囊相比，HKZ 的生物活性显著提高，药物摄入量下降，对阿霉素损伤的HK-2 细胞模型和脂多糖刺激的Raw 264.7 细胞模型的保护作用更强［13］。目前研究表明黄酮类成分是黄葵的主要活性成分，黄酮类成分中金丝桃苷、槲皮素、杨梅素、芦丁、异槲皮素，槲皮素-3′-O-β-D-葡萄糖苷、棉皮素-8-O-β-D-葡萄糖醛酸苷这7 种物质含量较高，是重点研究对象［14］。总的来说，黄葵总黄酮是一种具有良好前景的改善糖尿病肾病及慢性肾炎的药物，具有巨大临床意义。

细胞色素450 酶（CYP450 酶）是体内主要负责药物代谢的Ⅰ相酶，其中CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP3A4、CYP2D6、CYP2B6、CYP2C8 介导了90%的药物代谢［15］。FDA 规定在考察临床前药物相互作用时，应开展体外代谢试验评估代谢酶与在研药物之间相互作用的可能性，为临床使用提供依据。Liu 等［16］在探究黄蜀葵花醇提物对大鼠体内CYP 酶的影响时发现，临床等效剂量黄葵胶囊对CYP1A2、CYP2E1 和CYP3A4 无显著影响，高剂量组对CYP3A4有弱诱导作用，对CYP2E1有弱抑制作用；而针对黄葵的黄酮类成分的酶抑制研究局限在常见单体如槲皮素、杨梅素和橙皮苷等［17-18］，它们是潜在的生物活性化合物，对常见代谢酶如CYP1A2、CYP2C9、CYP3A4、CYP2D6 和UGT酶均存在不同程度抑制作用。黄葵总黄酮作为一种极具开发前景的治疗慢性肾脏疾病的药物，在其中一些成分已被报道对代谢酶有影响的前提下，药物相互作用研究成为新药开发中必不可少的因素，体外相互作用研究是为了考察在研药物对于代谢酶的影响，以初步估计发生药动学相互作用的可能性及严重程度，为临床DDI研究提供依据。药物药物相互作用的存在会增加不良反应的频率和严重程度，或导致治疗效率降低，而依据体外和体内研究的结果可以科学的制定临床合并用药的策略或进行药物剂量的调整以降低临床用药的安全性风险，因此研究总黄酮与CYP450 酶之间可能的相互作用具有重要意义。临床在使用可能会抑制或诱导CYP 酶的药物时，尤其是存在时间依赖性抑制（time-dependent inhibition，TDI）的情况下，一定要密切监测联用药物血药浓度的变化，TDI是指化合物与酶预孵育后，对CYP450酶活性的抑制增加，在使用此种抑制剂后，体内酶功能需要几天或一周才能恢复。鸡尾酒法，也称“N-in-One Cocktail”探针底物法，是近年来开发的一种高通量的体外代谢相互作用的筛选工具。与单底物孵育相比，鸡尾酒法具有明显的优势，如准确度高，重现性好，原料用量少，筛选速度快，因此受到越来越广泛的应用［19］。本研究通过“N-in-One Cocktail”探针底物法评估了黄 葵 总 黄 酮 对CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4 和CYP2E1 的影响，并探究其抑制机制和酶抑制动力学，同时对受抑制作用最明显的CYP2C9酶在大鼠体内进行了验证，探究HKZ与CYP2C9特征底物之间可能存在的相互作用。

1 材 料

1.1 试 剂

黄葵总黄酮粉末由江苏苏中药业提供；咪达唑仑马来酸盐（MDZ，中国药品生物制品检定所）；睾酮（GT）、奥美拉唑（OP）、右美沙芬（DM）、非那西丁（PN）、氯唑沙宗（CZ）、甲苯磺丁脲（TB）、乙酰氨基酚（ACE）、右啡烷（DMT）、6-羟基氯唑沙宗（6-OH-CZ）、4-羟基甲苯磺丁脲（4-OH-TB）、5-羟基奥美拉唑（5-OH-OP）、6β-羟基睾酮（6β-OH-GT）、4-羟基咪达唑仑（4'-OH-MDZ）、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）、6-磷酸葡萄糖（G-6-P）、6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G-6-PDH）购自美国Sigma-Aidrich 公司；坦洛新（江苏恒瑞医药股份有限公司）；乙酸（南京化学试剂股份有限公司）；乙酸铵（上海阿拉丁科技股份有限公司）；甲醇、乙腈（色谱纯，德国默克公司）；混合人肝微粒体（HLM，产品编号：LM-R-02M，批号：SUBK）购自上海瑞德肝脏疾病研究有限公司，其余试剂均为市售分析纯。

1.2 仪 器

高效液相色谱－三重四极杆串联质谱仪（含日本岛津高效液相色谱系统（LC-20A）、美国Sciex质谱系统（API4000）、电喷雾离子源、及Analyst 1.5.1 工作站）；Thermo Sorwall Biofuge Stratos 台式低温高速离心机（美国赛默飞世尔公司）；Eppendorf Mix-Mate 混匀小精灵、Eppendorf Minispin AG22331 台式离心机（德国艾本德公司）；Milli-Q Gradient A1 超纯水机（美国密理博公司）；Vortex Mixer XW- 80A 涡旋混合器（海门市其林贝尔仪器制造有限公司）。

1.3 动 物

健康SD 大鼠，SPF 级，雄性，体重（200 ± 20）g，购自浙江维通利华实验动物技术有限公司，生产许可证号SCXK（浙）2019-0001，动物饲养于中国药科大学动物实验中心恒温恒湿的环境中，动物适应1 周后开始做实验。本实验已获得中国药科大学实验动物伦理委员会批准。

2 方 法

2.1 体外孵育体系

孵育体系组成：总体系200 μL，PBS 缓冲液（pH ≈ 7.4，超纯水配制，含2.68 mmol/L KCl，68.4 mmol/L NaCl，5.8 mmol/L Na2HPO4，1.6 mmol/L KH2PO4），HLM（终质量浓度为0.2 mg/mL），MgCl2.6H2O（终浓度为10 mmol/L），NADPH 能量系统（PBS 缓冲液配制，含G-6-P 10 mmol/L，NADP+1 mmol/L， G6PDH 1 Unit/mL），混合底物（终浓度分别为TB 50 μmol/L，CZ 50 μmol/L，OP 20 μmol/L，MDZ 10 μmol/L，GT 30 μmol/L，PN 500 μmol/L、DM 10 μmol/L），控制体系中有机溶剂的体积分数低于1%。

2.2 IC50测定

将终浓度为0（空白对照），0.5，1，5，25，50，100 μg/mL 等7 个质量浓度的HKZ 溶液按照“2.1”项下方法加入混合探针底物1 μL，加入微粒体后轻微混匀，于37 ℃恒温水浴锅中水浴5 min，后加入能量体系开始反应，在37 ℃中温孵20 min，取出后冰浴终止反应，加入含坦洛新（终浓度为5 ng/mL）的乙腈溶液600 μL 直接沉淀，充分振荡5 min，两次离心后（18 000 r/min，5 min）转移上清液80 μL进样分析。每个浓度平行制备3 份同时测定。按照实验室之前建立的UPLC-MS/MS 共检测方法在适应现有仪器状态的改良后对各底物代谢生成的特征代谢物（ACE，DMT，6-OH-CZ，4-OH-TB，5-OH-OP，6β-OH-GT，4'-OH-MDZ）进行测定［20］。

2.3 HKZ对CYP450酶活性的作用特征及机制

2.3.1 时间依赖性抑制 实验分为两组，第1 组为在HLM 中预先加入能量体系和HKZ（终质量浓度分别为0.5，1，5，25，50，100 μg/mL）在37 ℃预孵30 min后分别加入特征性底物（底物终质量浓度同上述“2.1”）启动反应。第2 组为不存在能量体系的情况下，在HLM 中加入HKZ 及特征性底物（浓度同第1 组）预孵育30 min 后，加入能量体系启动反应。上述体系于37 ℃反应20 min，取出后冰浴终止反应，按照“2.2”项下方法处理进样。

2.3.2 可逆性抑制与酶抑制动力学 黄葵总黄酮对CYP450 酶各亚型的可逆性抑制是在不同浓度的HKZ 和特征底物下进行的。根据黄葵总黄酮对各底物的IC50确定HKZ 浓度，选取底物浓度为Km、2Km、4Km，设定针对CYP2C9 亚型，TB 浓度为50、100、200 μmol/L，HKZ 为0、0.5、2、4、8 μg/mL；针对CYP2E1，CZ 浓度为50、100、200 μmol/L，HKZ质量浓度为0、2.5、5、10、20 μg/mL；针对CYP3A4亚型，MDZ 浓度为5、10、20 μmol/L，GT 浓度为30、60、120 μmol/L，HKZ 质量为0、10、20、30、40 μg/mL；针对其他亚型，DM 浓度为10、20、40 μmol/L，PN 浓度为0.5、1、2 mmol/L，OP 浓度为20、40、80 μmol/L，HKZ 质量浓度为0，5、10、20、40 μg/mL。孵育及样品处理操作同上述“2.2”。

2.4 HKZ 对SD 大鼠CYP2C11 探针底物药代动力学的影响

选择20 只健康雄性SD 大鼠，随机分为4 组：单次灌胃CMC-Na 组、单次灌胃HKZ 组、多次灌胃CMC-Na 组、多次灌胃HKZ 组（n= 5），分别在单次以及连续7 d 灌胃HKZ（200 mg/kg）溶液30 min 后口服给予甲苯磺丁脲溶液0.5 mg/kg，溶剂组口服等体积的CMC-Na 溶液。实验前所有大鼠禁食12 h。分别收集给予甲苯磺丁脲后10 min、20 min、30 min、1 h、1.5 h、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、24 h、36 h的眼眶静脉血200 μL，置于含有肝素钠的洁净EP管中，8 000 r/min离心5 min，转移上清液至洁净EP管中并保存于−80 ℃。

2.5 质谱及色谱条件

2.5.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenox Luna C18柱（2.0 mm×150 mm，5 μm），柱温：40 ℃；流速：0.5 mL/min；分析时间：10.0 min；水相（A）：含5 mmol/L乙酸铵和0.1%乙酸水；有机相（B）：甲醇-乙腈（1∶1）；洗脱梯度：0 ～ 0.5 min（2% B）、 0.5 ～ 4.0 min（2% ～ 45% B）、4.0 ～ 6.5 min（45% ～ 60% B）、6.5 ～ 6.8 min（60% ～ 80% B）、6.8 ～ 7.2 min（80%B）、7.2 ～ 7.5 min（80% ～ 2% B）、7.5 ～ 10.0 min（2% B）。

2.5.2 质谱条件 选用电喷雾离子源（ESI），设定源参数分别为：喷雾电压（IS）5 000 V/−4 500 V，辅助气1（N2）65 Arb（1 Arb = 175 kPa），辅助气2（N2）70 Arb，辅助气加热温度550 ℃，气帘气30 Arb，碰撞气10 Pa。CYP450s 特征代谢产物的MRM参数列于表1。

Table 1 MRM parameters of characteristic metabolites of CYP450 enzyme

2.6 数据处理

用探针底物代谢物生成量与空白对照组的比值反映CYP450 酶剩余活性（%），利用GraphPad Prism 8.0 软件求算HKZ 对CYP450 酶各亚型的IC50及Ki；采 用WinNonlin 8.0 软 件 中 非 房 室 模 型（NCA）拟合计算甲苯磺丁脲大鼠体内的药代动力学参数。

3 结果和分析

3.1 HKZ对人肝微粒体中各CYP酶的抑制效应

HKZ对CYP450酶各亚型的抑制曲线结果如图1所示，IC50见表2。结果表明HKZ对于CYP酶各亚型都有抑制作用，其中对CYP2C9 和CYP2E1 有较强抑制作用，其IC50分别为3.22 和8.64 μg/mL，对CYP1A2、CYP2C19 和CYP2D6 也存在中等抑制作用，IC50分别为20.43、24.96和29.81 μg/mL。同时它对CYP3A4 介导的各个底物的代谢反应都表现出抑制作用，对睾酮-6β-羟基化和咪达唑仑-4′-羟基化反应的IC50分别为21.59 和25.34 μg/mL。整体来说较低的IC50反映了黄葵总黄酮对HLM 中CYP酶较强的抑制作用。

3.2 HKZ对各CYP450酶活性的作用机制

3.2.1 时间依赖性抑制 如果抑制剂对酶存在TDI 作用就会产生IC50偏移，IC50偏移［（−）NADPH情况下的IC50除以（+）NADPH 的IC50］大于1，表示左移，小于1 时，表示右移，IC50偏移大于1.5 时即存在时间依赖性作用。HKZ 对各CYP450 酶亚型的抑制机制结果见图2，加入NADPH 预孵育30 min 后，黄葵总黄酮对CYP酶各亚型的IC50偏移值均小于1.5，证明无明显偏移。

Figure 2 IC50 shift curves of HKZ to CYP450 enzymes in human liver microsomes （ ± s, n = 3)A: CYP1A2; B: CYP2D6; C: CYP3A4 mediated midazolam-4-hydroxylation reaction; D: CYP3A4 mediated testosterone-6β-hydroxylation reaction;E: CYP2C19; F: CYP2C9; G: CYP2E1

Figure 1 Inhibition curves of total flavonoids from Abelmoschus Manihot (HKZ) on CYP450 enzymes in human liver microsomes ( ± s, n = 3)A: CYP1A2; B: CYP2D6; C: CYP3A4 mediated midazolam-4-hydroxylation reaction; D: CYP3A4 mediated testosterone-6β-hydroxylation reaction;E: CYP2C19; F: CYP2C9; G: CYP2E1

Table 2 IC50 values and inhibitory effects of HKZ on CYP450 enzymes in human liver microsomes (n = 3)

3.2.2 HKZ 对人肝微粒体中CYP450 酶的抑制动力学分析 在排除黄葵总黄酮对CYP450 酶各亚型不存在时间依赖性抑制作用后，通过酶抑制动力学实验来计算抑制表观动力学参数Ki。HKZ对CYP1A2/CYP2D6/CYP3A4/CYP2C9/CYP2C19/CYP2E1的酶动力学曲线见图3，通过Graphpad Prism 软件作得Lineweaver-Burk Plot，再用Lineweaver-Burk Plot 中各直线斜率对HKZ 浓度进行二次作图得Slope 图。HKZ 对CYP2E1 的Lineweaver-Burk 图 交点位于纵轴正向，呈现出竞争性抑制的特点，Ki为3.84 μg/mL，HKZ 对CYP2C9 也表现为竞争性抑制，Ki为6.33 μg/mL。根据Lineweaver-Burk 图交点的位置在横轴负向，判断HKZ 对CYP3A4 催化的睾酮-6β-羟基化和咪达唑仑-4′-羟基化的作用为非竞争性抑制，Ki分别为7.37 和3.32 μg/mL。同样HKZ 对CYP1A2、CYP2D6 和CYP2C19 的作用也为非竞争性抑制，Ki分别为8.66、11.49 和21.94 μg/mL。

Figure 3 Kinetics curves of HKZ on CYP450 enzyme (n = 3)A: CYP1A2; B: CYP2D6; C: CYP3A4 mediated midazolam-4-hydroxylation reaction; D: CYP3A4 mediated testosterone-6β-hydroxylation reaction;E: CYP2C19; F: CYP2C9; G: CYP2E1; H: CYP1A2, I: CYP2D6; J: CYP3A4 mediated midazolam-4-hydroxylation reaction; K: CYP3A4 mediated testosterone-6β-hydroxylation reaction; L: CYP2C19; M: CYP2C9; N: CYP2E1

3.3 黄葵总黄酮对大鼠体内甲苯磺丁脲的药-时曲线和药动学参数的影响

单次及多次灌胃黄葵总黄酮后，测得甲苯磺丁脲及代谢物4-羟基甲苯磺丁脲的血浆药物浓度-时间曲线如图4 所示，随后采用WinNonlin 8.0 软件中非房室模型（NCA）拟合计算甲苯磺丁脲及4-羟基甲苯磺丁脲在大鼠体内的药代动力学参数，见表3 和表4，HKZ 组甲苯磺丁脲的各参数在单次和多次给药后与空白溶剂组均没有显著差异，但对于4-羟基甲苯磺丁脲，单次HKZ 处理组与溶剂组相比AUC（0-t）下降了20.3%，在多次口服HKZ 后AUC（0-t）和cmax的下降趋势更为显著，同时伴随t1/2延长。说明给予大鼠HKZ 后影响了4-羟基甲苯磺丁脲在大鼠体内的药动学行为，提示它对于大鼠体内的CYP2C11具有一定的抑制作用。

Figure 4 Mean plasma concentration over time curves in rats ( ± s, n = 5)A: Tolubutamide after single dose of HKZ; B: 4-Hydroxytolubutamide after single dose of HKZ; C: Tolubutamide after after multiple dose of HKZ; D: 4-Hydroxytolubutamide after multiple dose of HKZ

Table 3 Pharmacokinetic parameters of tolubutamide after single or multiple oral dose of HKZ in rat plasma ( ± s, n = 3)

Table 3 Pharmacokinetic parameters of tolubutamide after single or multiple oral dose of HKZ in rat plasma ( ± s, n = 3)

*P ＜ 0.05, **P ＜ 0.01 vs CMC-Na group

Parameter AUC0-∞/（ng/mL·h)AUC0-t/（ng/mL·h)cmax/(ng/mL)Vz/F/(L/kg)Clz/F/(mL/(h·kg)）MRTlast/h tmax/h t1/2/h Single CMC-Na 25 334.63 ± 2 094.46 22 381.74 ± 1 102.84 1 818.00 ± 328.51 0.30 ± 0.04 19.85 ± 1.66 10.75 ± 0.65 0.47 ± 0.32 10.70 ± 2.13 HKZ 22 744.16 ± 2 181.62 19 470.32 ± 934.13 1 718.00 ± 608.58 0.41 ± 0.05 22.15 ± 2.12 11.12 ± 0.92 1.60 ± 0.42**12.98 ± 2.74 Multiple CMC-Na 31 159.04 ± 6 229.90 26 567.41 ± 4 439.68 2 112.00 ± 426.58 0.31 ± 0.06 16.69 ± 3.76 11.52 ± 1.65 1.00 ± 0.35 13.34 ± 4.56 HKZ 29 049.51 ± 4 407.84 24 428.97 ± 3 508.56 1 950.00 ± 215.06 0.37 ± 0.09 17.51 ± 2.47 11.42 ± 1.48 1.2 ± 0.57 14.75 ± 2.61

Table 4 Pharmacokinetic parameters of 4-hydroxytolubutamide after single or multiple oral dose of HKZ in rat plasma ( ± s, n = 5)

Table 4 Pharmacokinetic parameters of 4-hydroxytolubutamide after single or multiple oral dose of HKZ in rat plasma ( ± s, n = 5)

*P ＜ 0.05, **P ＜ 0.01 vs CMC-Na group

Parameters AUC(0-∞)/(ng/mL·h)AUC(0-t)/(ng/(mL·h)cmax/(ng/mL)MRTlast/h tmax/h t1/2/h Single Multiple HKZ 149.83 ± 30.08*127.69 ± 30.87**11.20 ± 2.92*11.77 ± 1.38 0.90 ± 0.55 14.23 ± 2.12 CMC-Na 220.76 ± 33.84 193.25 ± 24.65 15.56 ± 4.01 11.14 ± 0.52 1.70 ± 0.45 11.42 ± 3.07 HKZ 176.02 ± 29.75 137.99 ± 32.99*10.93 ± 4.60 12.36 ± 1.57 2.40 ± 1.52 16.91 ± 4.86 CMC-Na 205.48 ± 31.05 183.22 ± 28.43 20.38 ± 6.83 10.85 ± 1.09 1.33 ± 0.56 11.10 ± 2.90

4 讨 论

黄葵黄酮类成分中的杨梅素在体外能通过非竞争和竞争性的方式分别抑制CYP3A4、CYP2C9、CYP2D6 和CYP2B1［21］；槲皮素在人肝微粒体中以竞争性方 式抑制CYP3A4、CYP2C9、CYP2D6 和CYP2C19，以非竞争性方式抑制CYP1A2［22］。文献证明［23］，槲皮素和杨梅素等苷元的抑制效应会随着与葡萄糖或葡糖糖醛酸的结合而大幅减弱，例如槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷和异槲皮素等，对CYP 酶的抑制IC50基本大于80 μg/mL。这与本课题组在体外肝微粒体中得到的结果一致（未发表）。本研究发现总黄酮对6 种CYP 酶均表现出较小的IC50，一般认为提取物的IC50＜ 20 μg/mL即表示存在显著抑制作用［24］，HKZ 对CYP2E1 和CYP2C9 的IC50小于10 μg/mL，对CYP3A4 的IC50为21～26 μg/mL；它 以 竞 争 性 方 式 抑 制CYP2E1 和CYP2C9，而对CYP1A2 和CYP2D6 均表现出非竞争性抑制。黄葵总黄酮对CYP 酶的抑制效应来源于所含黄酮类化合物的协同或相加作用，槲皮素和杨梅素可能是总黄酮中抑制CYP3A4和CYP2C9活性的主要成分［25-26］，而金丝桃苷和芦丁可能是抑制CYP2E1 的主要成分［27］。TDI 通常会导致联用药物的清除率降低和全身生物利用度增高，从而导致严重的不良反应［28］。文献中较少报道相关黄酮类成分引起机制性抑制的现象［29］，本实验认为黄葵总黄酮不是CYP450酶的时间依赖性性抑剂。

体外肝微粒体实验并不能完全模拟体内的生理情况，HKZ 的体内浓度是决定是否会发生CYP450 抑制及抑制程度的关键因素，体外孵育结果显示，HKZ 对CYP2C9 的影响最为显著，因此选用大鼠来验证黄葵总黄酮对CYP2C9 的强抑制效应。在大鼠中形成的与人类CYP2C9 功能对应的CYP2C 亚 型 包 括CYP2C6 和CYP2C11，其 中CYP2C11 与人类体内的CYP2C9 具有77%的同源性，被认为是人类CYP2C9 的功能对应物［30］，而甲苯磺丁脲-4-羟基化反应已被广泛用作为CYP2C9（人）和CYP2C11（大鼠）的指标反应［31］。Cui 等［25］在大鼠体内考察篷子菜总黄酮对CYP2C11 的影响发现，高剂量组能显著升高甲苯磺丁脲的AUC0-t，AUC0-∞，MRT0-t，MRT0-∞和t1/2。另外，Guo 等［32］在考察杨梅素对大鼠体内CYP2C9的影响时，发现多剂量服用杨梅素后，相较于对照组，给药组甲苯磺丁脲的cmax增大1.15 倍，AUC（0-∞）增大1.4 倍。考虑到患者服药时可能会摄入一些食源性黄酮类成分而导致潜在的相互作用可能性，本实验中使用的HKZ 浓度为200 mg/kg，根据HKZ 中主要的黄酮类成分在黄葵胶囊和黄葵总黄酮中的含量对比，得到约是黄葵胶囊临床剂量的3 倍，剂量设置参考Liu 等［33］对黄葵胶囊不同批次的主要成分金丝桃苷、异槲皮苷、棉皮素-8-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、槲皮素-3′-O-葡萄糖苷和槲皮素五种成分的含量测定及另一篇文献中提到的每日在大鼠体内灌胃黄葵胶囊2 g/kg 发现黄葵胶囊对CYP3A4 有弱诱导作用，对CYP2E1有弱抑制作用［16］。甲苯磺丁脲的剂量选择相对较低的0.5 mg/kg，这可使探针底物对大鼠的生理状况影响降至较低水平。但本研究发现单次或多次给药后，HKZ 均未对大鼠体内的甲苯磺丁脲的药动学行为产生影响。分析此结果产生的原因可能有：（1）黄酮类成分生物利用度较低，血浆药物浓度未必能达到抑制CYP 酶的有效值；（2）体内与体外的环境不一样，体内环境更为复杂，需要考虑到药物在不同个体内可能产生的差异；（3）HKZ 作为混合物，每种成分的吸收程度和吸收速率都有差异，可能导致最终作用于CYP酶的成分与体外实验时不同。HKZ 在单次和多次给药后显著降低了4-羟基甲苯磺丁脲的AUC0-t和cmax（P＜ 0.05），提示HKZ 在一定程度上影响了CYP2C11。但文献研究静注甲苯磺丁脲后同时测定原型及4-羟基甲苯磺丁脲结果表明，CYP2C11介导的甲苯磺丁脲-4-羟基化在甲苯磺丁脲的整体代谢中占比较低，约为2.1%［34］，而经灌胃给药后，这个比例会进一步降低，由于甲苯磺丁脲的暴露量非常高，导致HKZ 对它的影响不足以体现在浓度水平变化，导致甲苯磺丁脲的参数与溶剂组相比没有显著变化，只对代谢物的药动学参数有一定影响。

本研究选择对具有广阔应用前景的黄葵黄酮提取物进行相互作用研究，结果表明在体外黄葵总黄酮对CYP450 酶亚型表现出不同程度的抑制作用，但排除时间依赖性抑制的可能，它通过不同的抑制机制以不同的Ki抑制CYP2C9、CYP2E1、CYP3A4、CYP2D6、CYP2C19 和CYP1A2。但现有结果并不能完全排除黄葵黄酮与经CYP 酶尤其是CYP2C9 酶代谢药物相互作用的可能性，需要更加系统和深入的研究来全面评估黄葵总黄酮的安全性从而为临床合理用药提供佐证。