杭州市育龄女性亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性分析

蔡宇庭，任付佳

杭州市育龄女性亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性分析

蔡宇庭，任付佳

杭州市妇产科医院药剂科，浙江杭州 310008

了解杭州市育龄女性亚甲基四氢叶酸还原酶（methylene tetrahydrofolate reductase，MTHFR）的基因多态性，为育龄女性个体化补充叶酸提供依据。选择2022年1～6月于杭州市妇产科医院进行叶酸基因多态性检测的育龄女性为研究对象，使用荧光原位杂交法检测MTHFR C677T位点的基因多态性，并比较不同地域人群MTHFR C677T基因型分布差异。杭州市育龄女性的MTHFR C677T基因检测结果显示，野生型（CC）、杂合突变型（CT）及纯合突变型（TT）分别占33.45%、50.12%和16.43%，677T等位基因频率为41.49%。杭州市育龄女性的MTHFR C677T基因型分布情况与中国其他城市相比有明显差异（<0.05）。MTHFR C677T基因型分布存在明显的地区差异，育龄女性应尽早开展叶酸基因检测，及时给予个体化的叶酸补充，以降低出生缺陷的发生率。

育龄女性；亚甲基四氢叶酸还原酶；基因多态性；地域性

叶酸是一种水溶性维生素，为人体细胞生长和繁殖所必需，尤其是妊娠期女性对叶酸的需求更大[1]。妊娠早期如果母亲体内叶酸水平不足，可引起胎儿神经管闭合障碍，导致胎儿神经管缺陷[2]。叶酸缺乏主要因叶酸摄入不足或代谢能力障碍所致。亚甲基四氢叶酸还原酶（methylene tetrahydrofolate reductase，MTHFR）是叶酸代谢途径中的关键酶之一，MTHFR C677T位点是最常见的基因多态性位点，其基因突变可引起代谢酶活性降低，造成叶酸代谢障碍，同型半胱氨酸水平升高，导致出生缺陷的发生[3]。本研究拟探讨杭州市育龄女性叶酸代谢酶MTHFR C677T位点的基因多态性分布，为临床医生指导育龄女性个体化补充叶酸提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

回顾性分析2022年1～6月于杭州市妇产科医院进行叶酸基因多态性检测的育龄女性，年龄15～49岁，排除合并恶性肿瘤、严重肝肾疾病、严重血液系统疾病和免疫系统疾病者。本研究经杭州市妇产科医院伦理委员会审核批准[伦理审批号：（2022）医伦审K第（10）号-06]。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂与仪器 测序反应通用试剂盒（济南广音医疗科技有限公司），实时荧光定量聚合酶链反应仪（TL988，西安天隆科技有限公司）。

1.2.2 基因检测步骤 所有患者均采集口腔黏膜上皮细胞进行检测。检测方法：在采样拭子中加入1000μl样本萃取液，振荡20s，倒入离心管中静置10min；高速离心机以3000转/min离心1min，得到白色细胞沉淀；吸尽上清液后加入100μl细胞保存液，振荡混匀；取1.5μl混悬液样本加入测序试剂中，离心15s后上机检测，获得不同样本的基因分型。

1.3 统计学方法

对纳入研究的样本进行Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验。采用SPSSAU软件进行统计分析，计数资料以例数（百分率）[（%）]表示，组间比较采用2检验。<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Hardy-Weinberg遗传平衡定律检验

本研究共检测840名女性，年龄17～49岁，平均（29.57±2.87）岁。MTHFR C677T基因共检测出3种基因型，分别为野生型（CC）、杂合突变型（CT）及纯合突变型（TT）。基因型频率符合Hardy- Weinberg遗传平衡，表明研究对象具有区域群体代表性，见表1。

2.2 杭州市育龄女性MTHFR C677T基因型频率分布及与中国其他地区比较

研究结果显示，杭州市育龄女性CC型、CT型、TT型的基因型频率分别为33.45%、50.12%和16.43%。677C和677T等位基因在该样本中的分布频率分别为58.51%和41.49%。杭州市育龄女性的MTHFR C677T基因型分布情况与台州市、中国南方城市（云南、海南、广东、江苏、湖北、四川）、北方城市（山东、天津、河南、山西）相比，差异均有统计学意义（<0.05），见表2。

3 讨论

叶酸在人体内不能自主合成，只能通过外源性摄入补充。妊娠期女性对叶酸的需求显著增加，天然食物中含有的叶酸加热易分解，生物利用率低[6]，仅靠膳食补充叶酸可能难以满足胎儿的生长发育，故需要额外补充人工合成叶酸。合成的叶酸吸收进入人体后，需经过MTHFR代谢为5-甲基四氢叶酸才能发挥作用。MTHFR C677T突变则导致MTHFR活性降低，其中杂合型酶活性降至野生型的65%，纯合型降至30%[7]，致使5-甲基四氢叶酸含量减少，血浆同型半胱氨酸含量升高，从而影响胎儿的生长发育。

2015年的一项关于MTHFR C677T位点与神经管缺陷研究显示，亚洲人群母亲的基因型与子代神经管缺陷风险之间存在显著相关性[8]。中国人群的Meta分析得到相似的结论，母亲为TT基因型的子代患神经管缺陷的风险为母亲为CC基因型的子代的1.94倍[9]。另外，MTHFR C677T位点的基因多态性还可能与子代的先天性心脏病、唇腭裂等疾病有关[10]。因此，检测MTHFR C677T基因型对预防新生儿出生缺陷很有必要。

表1 MTHFR C677T基因的Hardy-Weinberg遗传平衡情况[n（%）]

表2 不同地区育龄女性MTHFR C677T位点基因型分布比较[n（%）]

中国人群的MTHFR C677T基因的多态性在不同地区存在明显差异。南方人群纯合突变基因型（TT）频率明显低于北方，且南北方饮食差异明显，导致北方人群体内叶酸水平较低[11]。这也可能是我国神经管缺陷发生率北方高于南方的原因之一。本研究纳入的样本数据有限，且未对民族和籍贯进行区分，研究结果可能存在一定的局限性。因此，需要更多样本、更多层面的进一步研究。

根据《中国出生缺陷防治报告（2012）》[12]，我国自2009年开始在全国农村地区实施增补叶酸预防神经管缺陷项目，神经管缺陷发生率明显下降，农村下降幅度达72.7%。研究显示，服用叶酸0.4mg/d，北方地区胎儿神经管缺陷预防率可达85%，南方地区为41%[13]。虽然0.4mg/d叶酸补充即能明显降低神经管缺陷的发生，但我国人口基数大，每年仍有1.8万例的神经管缺陷新增患儿，可能的原因是叶酸摄入量不足、叶酸服用依从性低、叶酸代谢能力障碍等。张函舒等[14]研究显示，妊娠早期女性不合理补充叶酸的总比例高达67.9%，主要表现为叶酸补充剂量不足，该现象在MTHFR C677T基因突变的妊娠女性中尤为突出。而Yang等[15]发现，根据叶酸代谢酶基因型个体化增补叶酸可降低不良妊娠结局和新生儿缺陷的发生率。另外Li等[16]研究显示，个体化补充叶酸可减少妊娠并发症的发生，尤其是妊娠期糖尿病和妊娠期高血压。因此，个体化补充叶酸对预防出生缺陷、提高出生人口素质具有重要意义。

综上所述，MTHFR C677T的基因型存在明显的地区差异，个体化的补充叶酸有利于降低新生儿出生缺陷的发生率。育龄女性尽早开展叶酸基因检测，既可提高育龄女性补充叶酸的依从性，也可用于指导叶酸的个体化用药。

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Polymorphism analysis of methylene tetrahydrofolate reductase gene in women of childbearing age in Hangzhou

Department of Pharmacy, Hangzhou Women’s Hospital, Hangzhou 310008, Zhejiang, China

To investigate the polymorphism of methylene tetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene in women of childbearing age in Hangzhou, and to provide evidence for individualized folic acid supplementation in women of childbearing age.Women of childbearing age who underwent folic acid gene polymorphism detection in Hangzhou Women’s Hospital from January to June 2022 were enrolled in this study. Fluorescence in situ hybridization was used to detect the polymorphism of MTHFR C677T gene, and the distribution of MTHFR C677T genotype was compared among different regions.The MTHFR C677T gene detection results of women of childbearing age in Hangzhou showed that wild-type (CC), heterozygous mutant (CT) and homozygous mutant (TT) accounted for 33.45%, 50.12% and 16.43%, respectively. The frequency of T allele was 41.49%. The distribution of MTHFR C677T in women of childbearing age in Hangzhou was significantly different from that in other cities in China (<0.05).There are significant regional differences in the genotype distribution of MTHFR C677T. For women of childbearing age, early detection of folate gene and individualized folate supplementation are helpful to reduce the incidence of birth defects.

Women of childbearing age; Methylene tetrahydrofolate reductase; Genetic polymorphism; Geographically specific

R173

A

10.3969/j.issn.1673-9701.2023.07.007

杭州市医药卫生科技项目（20211231Y069）

任付佳，电子信箱：HF190711@163.com

（2022–09–07）

（2023–01–27）