麝香壮骨膏质量标准的探究

蔡亚婷，雷王啸，于金燕

（东阿阿华医疗科技有限公司，山东 聊城 252000）

0 引言

麝香壮骨膏能够起到活血、止痛和消炎的作用。早期，该药物的质量标准主要被收录在卫健委所颁布的药品标准中。2006 年，食品药品监管局颁布了全新标准，新标准对原处方进行了调整，同时新增了包括薄层检查在内的内容。考虑到新标准仍存在一定的缺陷，有关人员决定对该药品的质量标准进行更加系统且深入的探究，希望能够使质量标准得到完善，为药品功效与质量提供保障。

1 研究背景

作为以当归、白芷和苍术为原药材，加入樟脑、冰片等药物所制备橡胶贴膏，麝香壮骨膏具有消炎和镇痛的效果，可用来缓解扭伤、挫伤和关节痛，还有其他原因引起的肌肉酸痛[1]。关于该药物的标准主要有两个，一个是由卫健委所颁布的药品标准，另一个是由食品药品监管局所颁布的药品标准。其中，前者只写明了药物性状鉴别依据、贴膏剂检查项目，后者在此基础上新增了薄层检查、气相色谱鉴别和成分含量测定等内容。在本项目中，研究人员计划通过TLC 鉴别苍术、白芷还有当归，通过GC 测定冰片及樟脑含量，通过HPLC 确定盐酸苯海拉明浓度。

2 实验方案

2.1 前期准备

2.1.1 实验仪器研究开始前，先要准备以下仪器：梅特勒公司生产的电子天平、气相色谱仪、对流烘干箱、超纯水仪。

2.1.2 实验试剂

本项目需要用到以下试剂：白芷药材、苍术素对照品、当归药材、欧前胡素、萘、冰片、樟脑、盐酸苯海拉明、色谱纯的甲醇和乙酸乙酯、超纯水、由不同供货商所提供麝香壮骨膏10 份。

2.2 鉴别TLC

2.2.1 TLC 介绍

TLC 要求先将固定相均匀涂抹在塑料、铝基片或是玻璃板的表面，等到固定相点样并展开，再对不同物质的比移植进行分析，从而确定药物成分和杂质含量[2]。作为能够快速分离成分并进行定量分析的技术，TLC已在药物测定等领域得到广泛运用，其优点主要体现在以下方面：首先，操作难度低，可快速显色。其次，展开速度快，通常能够在15～20min 内完成展开。最后，分辨率高，既能够分离0.01μg 左右的样品，又可以分离500mg 以上的样品。当然，该方法也存在着明显的不足，即无法被用来分离生物高分子，这点需要有所了解。

2.2.2 鉴别方法

（1）白芷。

实验开始前，需要制备供试品溶液，做法如下：取2片样品，将盖衬去除并剪成小块，将样品放入50mL 的甲醇溶液中，进行1h 的水浴回流，过滤并蒸干滤液，向盛有残渣的容器内倒入1mL 甲醇溶液，残渣完全溶解后备用。取适量对照品，加入甲醇溶液，获得对照品溶液，保证溶液所含对照品浓度为0.5mg/mL[3]。再取1g 白芷对照药材，并将其转移到提前准备好的容器内，向容器中倒入20mL 甲醇溶液，进行30min 的超声处理，随后，过滤并蒸干滤液，加入1mL 的甲醇溶液，确保残渣完全溶解。最后一步，对照处方制备阴性溶液及样品。利用薄层色谱法测定样品，吸取提前制备的3 种溶液，将溶液滴加到硅胶G 板表面，加入由乙酸乙酯和正己烷所制备的展开剂（二者质量比为1:3），待其完全展开，尽快取出并晾干，通过365nm 的紫外光灯进行检视，发现供试品所出现荧光斑点的颜色、位置和对照药材、对照品完全相同，另外，阴性对照未受到干扰。

（2）苍术。

先制备供试品溶液，再取适量苍术素对照品并加入甲醇溶液，获得浓度为1mg/mL 的对照品溶液，随后，严格按照处方要求制备阴性溶液及样品，通过薄层色谱法进行测定，晾干样品后，在其表面均匀喷10%浓度的硫酸乙醇，均匀加热样品，直至样品表面出现清晰的斑点，再利用紫外光灯观察样品。检视发现，供试品荧光斑点颜色、位置和对照品完全相同，且阴性对照未受到干扰。

（3）当归。

先制备供试品溶液，再取1g 对照药材，将药材浸入20mL 的甲醇溶液中，进行30min 的加热回流，随后，过滤并蒸干滤液，用1mL 的甲醇溶液溶解残渣，获得对照溶液。严格按照处方要求制备阴性溶液及样品。通过薄层色谱法对当归含量进行测定，具体测定步骤如下：①吸取提前制备的3 种溶液，保证每种溶液的吸取量均为5μL。②将不同溶液滴到同一块硅胶G 板的表面。③加入由甲酸、乙醚和石油醚所制备的展开剂（三者质量比为0.1:1:5），待其展开尽快取出并晾干。④利用紫外光灯进行检视。检视结果表明，供试品所出现荧光斑点的颜色、位置和对照药材完全一致，同时阴性对照没有受到干扰，测定结果具有实际意义。

2.3 测定含量

2.3.1 GC 介绍

GC 法是指以气体为移动相对指定物质进行测定的方法，按照固定相可将其分成气液色谱法、气固色谱法。该方法的优势和不足均十分明显，优势为分离及分析速度快，可将分析样品的时长控制在20min 以内。仅需要用到少量样品，便能够得出相应的结论，且测定灵敏性良好。具有理想的分离性与选择性。适用范围广，既能够分析挥发有机物、气体，还可以分析固体和沸点较高的物质。其不足则体现为在定性分析过程中，通常需要先对比已知数据和色谱峰，才能得出相应的结论。定量分析期间，往往要校正测定所输出信号，才能确保最终结果与实际情况相符。

在本项目中，研究人员决定通过GC 法测定产品所含冰片及樟脑的浓度。其中，色谱柱为毛细管柱，进样温度始终维持在220℃左右，23min 内，柱温可控制在150℃左右，流速能够达到1mL/min 以上。检测器选用FID，运行温度为250℃。除特殊情况外，进样量均为2μL，对应分流比则为15:1[4]。

2.3.2 制备不同溶液

（1）内标溶液。

称取适量萘，加入一定量乙酸乙酯，确保所制备溶液的萘浓度为5mg/mL。

（2）供试品溶液。

称取170cm2产品，将盖衬去除并剪成长条，将条状样品转移到烧瓶内（烧瓶容量为250mL），向烧瓶内倒入100mL 洁净水，利用挥发油测定法进行测定，测定期间向测定器内匀速倾倒洁净水，待溶液溢流到烧瓶内，尽快加入2mL 甲苯，随后，进行为期3h 的加热回流，溶液彻底冷却后，再将测定器内溶液转移到提前准备好的分液漏斗内，确保有机溶剂层完全分离。向容量为25mL 的量瓶内倒入5mL 预制内标溶液，使用乙酸乙酯充分冲洗测定器、分液漏斗还有冷凝管，将洗涤液统一转移到量瓶内并加入适量乙酸乙酯进行定容，量瓶内溶液达到25mL 后，将其充分摇匀即可。

（3）对照品贮备液。

称取适量冰片和樟脑，将对照品放入乙酸乙酯中，确保其能够完全溶解，且所得到混合液的浓度分别是5.27mg/mL 及5.47mg/mL。

2.3.3 开展相关实验

（1）适用性。

称取适量内标溶液、对照品贮备液，向溶液内加入一定量的乙酸乙酯，确保稀释后溶液浓度满足研究要求。随后，吸取适量供试品溶液、稀释后溶液并进样，如实记录样品色谱。分析色谱图能够发现，样品所含冰片等成分均满足基线分离的要求，同时各成分的分离度都能够达到1.5 以上，由此可见，上述方法具备良好的适用性，利用该方法进行检测所得出结果与实际情况相符。

（2）精密性。

随机取1 组对照品溶液并进行6 次进样处理，记录每次进样后的内标峰、其他峰面积，计算其比值。结果表明，本项目所采取研究方法具有良好的精密性。

（3）稳定性。

先确定测定所用供试品溶液，在12h 时间内，每隔2h 进行一次进样，如实记录每次进样后的峰面积。结果表明，12h 内供试品溶液具有良好的稳定性。

（4）重复性。

取3 份样品，制备供试品溶液并完成进样测定，对内标峰、其他峰面积的比值进行计算。

（5）回收性。

取3 份平行样品，每份样品均为90cm2，将盖衬去除并剪成长条，随后，将条状样品转移到烧瓶内（烧瓶容量为250mL），确保所制备溶液的冰片、樟脑浓度分别是10.85mg/mL 以及8.95mg/mL。待上述工作告一段落，尽快对供试品溶液进行制备并测定不同成分含量，具体做法如下：取2 份平行样品，按照上述方法对实验所需供试品溶液进行制备，计算样品冰片和樟脑的含量，并根据测定结果确定回收率。

3 结果讨论

3.1 鉴别TLC

市面上常见的苍术主要分为北苍术、茅苍术两类，虽然两种苍术均含有苍术酮以及苍术素，但苍术素浓度偏低，极易出现检测结果为零的情况。分析薄层色谱可知，本次抽检样品中，共有7 组样品有明显的苍术素斑点，而剩余样品并没有出现斑点，为解决该问题，研究人员决定调整点样量，将点样量增加到10μL，对比经过调整的样品和苍术样品能够发现，增加点样量后，仍有2 组样品没有出现斑点，剩余1 组样品则出现了和伪品苍术相同的苍术素斑点，由此可见，苍术素斑点颜色主要取决于投料量、饮片质量和生产工艺[5]。

分析白芷薄层可知，仅有1 组样品没有出现和对照组相同的斑点，剩余样品均有黄色斑点，这表示本次抽检样品中有9 组样品满足生产要求。在这9 组样品中，有1 组样品和其他样品存在明显区别，还有2 组样品存在斑点颜色偏浅的情况，导致该情况出现的原因是不同供货商的原料质量、投料标准以及所采用生产工艺均有所不同。

3.2 测定含量

3.2.1 盐酸苯海拉明

麝香壮骨膏产品所含盐酸苯海拉明能够抑制患者的过敏反应[6]。本项目中，研究人员选择按照法定标准，对不同样品所含该物质浓度进行测定，测定所用方法为HPLC，即将液体作为流动相，通过输液系统将不同流动相注入对应色谱柱，待柱内成分完全分离，再利用检测器完成后续检测。该方法具有一广四高的特点，一广是指适用范围广，四高则是指效能高、灵敏性高、高压以及高速。结果表明，研究所抽取样品该成分的浓度均在0.0013～0.101mg/cm2，平均浓度是0.051mg/cm2。由此可见，不同供货商所提供产品的盐酸苯拉海明浓度均有所不同，少数供货商所提供产品成分并不符合处方要求。考虑到该物质极易受到外界因素影响，长期处在热、光和湿的环境下，有较大概率发生氧化降解反应，进而析出二苯酮，在生产期间，供货商应严格控制该成分的用量，除特殊情况外，其浓度均处在0.048～0.07mg/cm2。本次抽检样品中，共有6 组样品不符合该要求。

3.2.2 挥发成分

麝香壮骨膏含有多种挥发油类成分，既包括本文所讨论的冰片、樟脑，同时还有水杨酸甲酯和薄荷脑，上述成分均能够起到消炎、镇痛的作用。本文所提出方法可同时测定不同挥发成分浓度，其中，样品冰片浓度处于0.091～0.334mg/cm2，平均浓度是0.193mg/cm2，样品樟脑浓度则处在0.075～0.307mg/cm2，对应平均值是0.166mg/cm2。

由此可见，不同供货商所提供产品的挥发成分含量不尽相同，产品功效和质量也存在明显差别。生产期间，应对投料量严格控制，根据实际情况调整生产工艺，尽量避免挥发成分由于加热而随着溶媒蒸发。如果条件允许，应加大对挥发成分加以控制的力度，在改善产品质量的同时，使各供货商所提供产品所表现出稳定性及均一性达到预期[7]。法定标准明确指出，樟脑含量不得低于0.12mg/cm2，其含量限度值能够达到投料的40%左右，对应冰片含量同样应当达到0.12mg/cm2或以上。本次抽检样品中，共有2 组样品的樟脑含量不符合要求，1 组样品的冰片含量不符合要求。

4 结语

麝香壮骨膏所采取检验标准相对简单，既无法达到检验要求，又无法起到控制产品质量的作用。鉴于此，研究人员决定参考现行检验标准，对产品所含苍术、盐酸苯拉海明等成分进行鉴定，结果表明，该方法能够有效控制产品质量，确保产品发挥出应有功效，可以大范围推广。