缩宫素受体和平滑肌动蛋白在子宫肌层及子宫瘢痕组织中的表达

张小敏 魏长娜 袁军

近年来，随着“二孩”“三孩”生育政策的相继实施，瘢痕子宫、高龄妊娠产妇增加，在剖宫产术中占比较高，而其妊娠带来的并发症也多，甚至是致命的。其中，高龄和瘢痕是影响子宫收缩的关键因素，适当使用缩宫素可以预防剖宫产术中子宫收缩乏力，缩宫素受体（oxytocin receptor，OTR）和平滑肌动蛋白（smooth muscle actin，SMA）是参与产妇子宫肌层收缩的重要因子。关于OTR 和SMA 在子宫肌层和瘢痕组织中的表达情况报道较少，本研究拟通过免疫组化法检测子宫瘢痕和高龄患者OTR 和SMA 的表达水平，为临床治疗子宫收缩乏力患者提供参考。

1 对象和方法

1.1 对象 选取嘉兴市妇幼保健院2020年1月至2021年12月剖宫产手术患者标本60 例，其中非高龄（＜35 周岁）初产妇子宫肌层组织20 例（非高龄组），高龄（≥35 岁）初产妇子宫肌层组织20 例（高龄组），经产妇子宫瘢痕组织20 例（瘢痕组，其中非高龄和高龄各10 例，经预实验证实年龄对瘢痕组织OTR 和SMA表达影响无统计学意义，故瘢痕组不再细分组）。

1.2 标本收集 标本均在使用缩宫素前切取，其中非高龄组及高龄组初产妇子宫肌层组织选取剖宫产子宫切口上缘肌层组织，子宫瘢痕组织选取经产妇原剖宫产瘢痕增生明显处。收集到的组织样本固定在10%中性甲醛溶液中。

1.3 标本检测 3 组组织样本常规石蜡包埋，切片厚度均为3 μm，每个蜡块切片3 张，其中1 张用于常规HE 染色，显微镜下观察；另2 张进行免疫组化染色。免疫组化染色制片参照Dako 试剂盒（购自Dako 公司，批号：41386027）方法进行，使用全自动免疫组化染色仪染色，一抗OTR 抗体购自Proteintech 公司，SMA 抗体购自Abcam 公司，二抗试剂盒购自Dako 公司。

1.4 结果判读 免疫组化染色结果由2 位有经验的高年资病理科医师独立观察，每张切片随机选取10 个高倍视野，根据细胞的染色强度和阳性细胞数进行综合评分[1]。染色强度评分：无染色为0 分；浅棕色为1分；棕色无背景着色或深棕色伴有背景着色为2 分；深棕色不伴背景着色为3 分。阳性细胞数评分：无染色细胞得0 分；染色细胞数≤25%得1 分；25%＜染色细胞数≤50%得2 分；染色细胞数＞50%得3 分。两者相乘即为最终评分，＜3 分为阴性，≥3 分为阳性。

1.5 统计学处理 采用SPSS 19.0 统计软件。计量资料以表示，组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用配对t 检验。计数资料以频数和构成比表示，组间比较采用χ2检验或Fisher 确切概率法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3 组产妇一般情况分析 比较3 组产妇，除年龄外，其他一般情况比较，差异均无统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 3 组产妇一般情况比较

2.2 3 组组织样本OTR和SMA的表达情况 OTR在平滑肌细胞核、细胞质中表达，SMA在细胞质中表达。综合评分结果显示，3 组标本均有OTR 表达，但非高龄组颜色较高龄组和瘢痕组较要深，呈棕黄色或棕褐色，染色强度大，阳性细胞数量多。非高龄组全部样本OTR均检测到阳性表达，高于高龄组（70.0%）和瘢痕组（50.0%），差异有统计学意义（P＜0.05），但高龄组和瘢痕组间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。3 组标本SMA 均有表达，非高龄组和高龄组阳性表达率分别为100.0%和95.0%，两组比较差异无统计学意义；但两组均高于瘢痕组（60.0%），差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表2。

表2 3 组组织样本中OTR 和SMA 表达的比较[例（%）]

2.3 3 组组织样本病理检查结果比较 非高龄组子宫肌层结构清楚，肌间胶原罕见，见图1A，平滑肌细胞的胞质和胞核有呈棕黄色的OTR表达，见图1B，平滑肌细胞的胞质有呈棕黄色的SMA表达，但胞核无表达，见图1C。相比非高龄组，高龄组子宫肌层量减少，见图2A，平滑肌细胞的胞质及胞核中OTR表达减少，见图2B，平滑肌细胞胞质内SMA 表达减少，见图2C。瘢痕组的子宫肌层被增生的胶原纤维替代，仅残留少量肌层结构，见图3A，残余的平滑肌细胞的胞质和胞核中可见棕黄色OTR表达，见图3B，残余的平滑肌细胞胞质内可见少量SMA 表达，见图3C。

图1 非高龄组病理检查结果（A：HE 染色，×50；B：OTR 免疫组化染色；C：SMA 免疫组化染色；×200）

图2 高龄组病理检查结果（A：HE 染色，×50，箭头示肌层组织相对疏松；B：OTR 免疫组化染色；C：SMA 免疫组化染色；×200）

图3 瘢痕组病理检查结果（A：HE 染色，×50，箭头示胶原纤维增生；B：OTR 免疫组化染色；C：SMA 免疫组化染色；×200）

3 讨论

OTR 是G 蛋白偶联受体（G protein coupled receptor，GPCR）超家族成员之一，由388 个氨基酸组成，分子量约为42 kb[2]。缩宫素是预防和治疗子宫收缩乏力性产后出血的常规药物，通过与子宫OTR 结合发挥作用[3]。在子宫收缩的过程中，缩宫素与OTR 的相互关系决定了子宫活动的总体平衡，OTR 数目减少会引起子宫收缩下降，导致产后出血增多[4-5]。为减少产后出血，需较多的缩宫素来增强宫缩。即子宫对缩宫素的敏感程度与OTR 的数量密切相关[6]。对预防第一次剖宫产因素[7]、第二产程延长的相关因素[8]以及剖宫产围生期并发症产生因素[9]的研究发现，不同个体对缩宫素的响应不同，临床处理剖宫产时面临极大挑战。

人类子宫肌层、子宫内膜和卵巢的OTR 由4.4 kb的mRNA 编码。有研究证实，子宫中的OTR 存在于平滑肌细胞中[10]，可能在分娩期间支持子宫收缩中起重要作用。子宫肌层对缩宫素的敏感性似乎与OTR 的诱导有关，女性妊娠13～17 周时，子宫OTR 相比非妊娠时增加了约6 倍，妊娠32 周时子宫肌层OTR 的mRNA 水平是非妊娠子宫的100 倍，至分娩时进一步增加，达到300 倍[11-12]。

本研究3 组标本中OTR 均有阳性表达，但阳性表达率不同，其中高龄组和瘢痕组表达率低于非高龄组。瘢痕组OTR 阳性表达率偏低可能与瘢痕组织中肌层组织被胶原组织破坏有关。高龄组阳性率偏低，可能是因为高龄组子宫肌层OTR 表达下降，子宫肌层对缩宫素敏感程度下降所致，这与Patel 等[13]研究结果一致，相比低龄小鼠，高龄小鼠子宫肌层OTR 和连接蛋白-43 mRNA 表达下降；可见随着年龄增大，子宫肌层功能出现下降趋势。

肌动蛋白是平滑肌细胞收缩域和细胞骨架域的主要成分[14]。SMA 是参与子宫肌细胞收缩的重要组成部分，实时荧光定量PCR和免疫组化染色均显示在子宫收缩时，子宫肌层SMA表达上调，同时伴随着子宫肌层OTR mRNA 表达上调[15-16]。在缩宫素和循环应力作用下，SMA 表达进一步上调，进一步支持邻近组织功能，促使每个单独的基质细胞都可以稳定收缩[17]。

本研究显示，SMA 在3组标本的平滑肌细胞质中均有表达，高龄组和非高龄组间SMA 表达阳性率无统计学差异。Sweeney 等[18]研究了年龄对子宫肌细胞数量和细胞核容积的影响，结果发现高龄对子宫平滑肌细胞数量无影响，对子宫肌细胞SMA表达无影响，与本研究结果一致。瘢痕组SMA阳性率低于非高龄组和高龄组，差异有统计学意义，原因可能是瘢痕修复过程中，胶原组织替代肌纤维组织进行瘢痕修复，造成平滑肌细胞减少，从而导致SMA 的阳性率降低。既往研究发现，子宫瘢痕组织纤维排列紊乱，部分子宫肌层被胶原纤维破坏，肌层结构仅部分残留[19]。Wu等[20]测定了SMA和Ⅰ型胶原，发现瘢痕子宫产妇的平滑肌体积密度比低于非瘢痕子宫产妇，与本研究结果一致。可见剖宫产术后瘢痕组织形成可能从组织结构上影响了子宫肌层肌动蛋白的整体功能。

综上所述，高龄组和瘢痕组OTR表达水平低于非高龄组，瘢痕组SMA表达水平低于非高龄组和高龄组；子宫瘢痕和高龄对OTR和SMA表达有影响，高龄因素只导致子宫肌层OTR表达下降，但不影响SMA的表达；瘢痕因素导致OTR和SMA的表达均下降，是产妇肌层收缩功能减退的主要原因，如何减少瘢痕因素对产妇子宫肌层收缩功能的潜在影响值得更进一步研究。