免疫功能检查在卵巢功能早衰患者针灸治疗中的意义

华德兴 邱林果 胡春梅 肖风金

（汕头大学医学院附属粤北人民医院 广东韶关 512026）

随着社会快节奏地发展，女性在生活和工作方面的压力也逐步增加，因此卵巢功能早衰发病率呈逐年上升，且有低年龄发展趋势。由于患者常有持续性闭经、阴道干涩、性交痛、失眠盗汗、心情烦躁、情绪低落、不孕不育等特征，给患者心理、夫妻生活、家庭和睦带来极大不良反应[1]。房 恭（房氏）调经促孕针是在其临床实践经验基础上依据中医基础理论开发而来，针对卵巢功能早衰的治疗，目前已经广泛推广应用于临床，有满意的临床效果[2]。

本研究计划从CD4+T 淋巴细胞、CD8+T 淋巴细胞和B 淋巴细胞分泌的免疫球蛋白（IgA、IgM、IgG）角度来探讨卵巢功能早衰患者经房氏调经促孕针治疗后免疫功能变化，以期为其疗效的应用价值提供理论依据。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取2019 年2 月至2022 年5 月在粤北人民医院经房氏调经促孕针治疗卵巢功能早衰患者22 例为观察组，另选同期在粤北人民医院体检人群符合卵巢早衰人员22 例为对照组。观察组经规范房氏调经促孕针治疗3 个疗程，对照组做空白等待，试验结束后继续做针灸或其他方法治疗，等待时间同观察组等针灸治疗时间。

卵巢功能早衰诊断标准：西医诊断参照第9 版《妇产科学》，中医诊断参照《中医妇科学》中卵巢功能早衰的诊断标准：①年龄≤40 岁；②闭经时间≥4个月；③血清促卵泡激素（FSH）＆gt;40IU/L（检查2 次,间隔时间1 个月以上）；④兼有以下多项或单项症状：腰膝酸软，畏寒肢冷，舌淡苔白滑，面色黧黑或苍白，脉沉弱，宫寒不孕，五更泄泻或大便久泻。患者年龄22～39 岁，平均（34.77±4.47）岁。

1.2 纳入标准与排除标准

纳入标准：（1）符合卵巢功能早衰诊断标准者。（2）年龄≥18 岁者。（3）知情同意，并且签署知情同意书者。排除标准：（1）卵巢局部手术引起者。（2）肿瘤患者，放化疗引起卵巢功能减退者。（3）服用激素、免疫抑制剂等药物引起的卵巢功能减退者。（4）合并心血管、肝、肾和造血系统等严重原发疾病者。

1.3 治疗方法

1.3.1 医疗器材及针具。 重庆蜀水仪器厂生产的特定电磁波治疗器、英迪牌电子针疗仪（型号KWD-8081）及东邦牌一次性使用无菌针灸针（规格：0.25×25 毫米、0.30×40 毫米、0.3×75 毫米）。

1.4.针灸方法

1.4.1 取穴。分为两个穴位组，穴位一组包括双本神、百会、神庭、双肓俞、关元、双大赫、双卵巢、双足三里、三阴交、双太溪、双太冲十一个穴位，穴位二组包括双肾俞、双次 两个穴位。

1.4.2 操作。穴位一组操作顺序从头部、腹部、下肢的穴位顺序。具体操作方法：肓俞双、关元、大赫双、卵巢双、足三里双、肾俞双的穴位直刺1～1.5 寸；三阴交双、太溪双、太冲双的穴位直刺0.5～1 寸；百会、本神双、神庭的穴位向后平刺0.5～l 寸；次 双的穴位向正中线斜下刺入第二骶后孔中2～2.5 寸。所有腧穴均要求得气，留针30 分钟，留针期间每隔10 分钟以捻转平补平泻法行针1 次，每穴行针15 秒；穴位二组连接电针，疏密波，疏密交替持续1.5 秒，以患者耐受为度。隔天治疗1 次，穴位一组与穴位二组交替使用，12 次为1 个疗程，治疗3 个疗程共计3 个月。

1.5 性激素和免疫功能检测

1.5.1 性激素FSH、E2的检测。治疗前和治疗后分别抽静脉血3 毫升于肝素锂抗凝试管中，静止30分钟至1 小时3500 转速/分钟离心10 分钟分离血浆，通过罗氏cobas800 电化学发光仪及配套试剂用电化学发光法进行检测。

1.5.2CD4+、CD8+T 细胞检测。治疗前和治疗后分别抽静脉血2 毫升于EDTA-K2 抗凝采血管中，5000 转速/分钟离心30 分钟，取上层薄膜中间层的单细胞悬液悬液100 微升（含1×106个细胞），分别加入单克隆抗体CD3、CD4、CD8，置于4℃冰箱避光染色30 分钟,用PBS 洗涤细胞2 次后，置于2500 转速/分钟离心5 分钟,弃去上清液，于沉淀细胞内加500 微升PBS，混匀，上流式细胞仪（贝克曼库尔特及配套试剂）以CD3 为设门，将CD4+T 细胞和CD8+T细胞百分比，并计算CD4+/CD8+T 细胞比例。

1.5.3IgA、lgM、lgG 免疫球蛋白的检测。治疗前和治疗后分别抽静脉血5 毫升于干试管中，静止30分钟至1 小时3500 转/ 分钟离心5 分钟分离血清，通过全自动生化分析仪（仪器迈瑞BS-2000M，试剂美康生物科技股份有限公司）用免疫比浊法进行检测。

1.6 统计学分析

数据处理在SPSS 22.0 软件上统计分析，其中计量资料用（）表示，组间比较应用均数t 检验，组内比较应用配对t 检验，检验标准以P＆lt;0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 性激素FSH、E2 检测水平的比较

两组在治疗前FSH、E2水平差异无统计学意义，P＆gt;0.05；3 个疗程治疗后水平差异有统计学意义，P＆lt;0.05。观察组治疗后与治疗前与比较，FSH 水平下降，E2水平上升，差异有统计学意义，P＆lt;0.05。

而对照组空白治疗前后比较，FSH、E2变化不明显，差异无统计学意义，P＆gt;0.05。见表1。

表1 两组性激素FSH 和E2 检测情况（）

表1 两组性激素FSH 和E2 检测情况（）

注：与本组治疗前比较，aP＆lt;0.05；与本组治疗前比较，bP＆gt;0.05。

时间组别例数FSH（IU/L）E2（pg/mL）治疗前观察组2247.17±4.2131.77±4.83对照组2245.54±3.9232.09±3.09 t 值1.3290.256 P 值0.1910.799治疗后观察组2236.93±3.67a37.96±5.05a对照组2246.17±4.70b33.05±3.40b t 值7.2573.782 P 值0.0010.001

2.2 两组CD4+、CD8+T 细胞检测水平比较

两组在治疗前CD4+、CD8+、CD4+／CD8+T 细胞水平差异无统计学意义，P＆gt;0.05；3 个月后观察组指标均有明显改善，CD4+、CD4+／CD8+T 细胞水平上升，CD8+T 细胞水平下降；对照组无变化，差异无统计学意义，P＆gt;0.05。观察组治疗后CD4+、CD4+／CD8+T 细胞水平高于对照组，CD8+T 细胞水平低于对照组，差异有统计学意义，P＆lt;0.05。见表2。

表2 两组CD4+、CD8+T 细胞检测情况（）

表2 两组CD4+、CD8+T 细胞检测情况（）

注：与本组治疗前比较，aP＆lt;0.05；与本组治疗前比较，bP＆gt;0.05。

时间组别例数CD4+（%）CD8+（%）CD4+/CD8+治疗前观察组2231.97±3.5037.48±4.280.86±0.11对照组2230.73±2.7135.30±4.560.88±0.13 t 值1.3211.630.605 P 值0.1940.1110.548治疗后观察组2235.01±3.84a31.13±4.23a1.14±0.15a对照组2230.62±2.27b35.36±4.72b0.88±0.12b t 值4.623.1276.408 P 值0.0010.0030.001

2.3 两组免疫球蛋白水平比较

治疗前观察组和对照组免疫球蛋白水平比较差异均无统计学意义，P＆gt;0.05。3 个月疗程结束后，观察组与对照组比较IgA、IgM、IgG 水平差异有统计学意义，P＆lt;0.05；观察组IgA、IgM、IgG 水平与治疗前比较均出现不同程度升高，差异均有统计学意义，P＆lt;0.05，但对照组免疫蛋白变化不明显，差异无统计学意义，P＆gt;0.05。见表3。

表3 两组免疫球蛋白检测情况（）

表3 两组免疫球蛋白检测情况（）

注：与本组治疗前比较，aP＆lt;0.05；与本组治疗前比较，bP＆gt;0.05。

时间组别例数IgA（g/L）IgM（g/L）IgG（g/L）治疗前观察组222.07±0.711.59±0.5313.54±2.69对照组222.14±0.771.68±0.6713.89±2.74 t 值0.2930.4850.313 P 值0.7710.630.756治疗后观察组222.71±0.75a2.22±0.54a15.56±2.33a对照组222.10±0.75b1.63±0.61b13.72±2.60b t 值2.7293.4262.469 P 值0.0090.0010.018

3 讨论

房 恭教授首先应用调经促孕针在早发性卵巢功能不全（POI）患者的对照研究以来[2]，而后续较多POI 患者临床研究报道，发现POI 患者经治疗后，性激素FSH、LH、FSH/LH 水平下调，E2、AMH 水平及AFC 数目上调，且能调整患者月经周期，使子宫内膜厚度增加，改善卵巢功能和低雌激素症状，调节负性情绪，提高卵子质量[3]。继而推广到POF 患者，临床研究也表明，经房氏调经促孕针治疗后POF 患者与POI 患者疗效相当，同样能改善血清激素水平，促进患者月经周期恢复，达到改善卵巢的功能，缓解临床症状[4]。

本研究发现，卵巢功能早衰患者经房氏调经促孕针针刺治疗后，激素FSH、E2水平有所改善，说明达到了一定的治疗效果，同时CD4+T 细胞、CD4+/CD8+T 细胞检测水平上升，CD8+T 细胞检测下降，IgG、IgM、IgA 检测水平有不同程度上升。以上结果表明，经针灸治疗后，患者的细胞免疫和体液免疫均有所改善。由于房氏调经促孕针是组合性针灸穴位治疗，具有多方面的功效。根据文献报道，本研究推测，可能在针灸足三里、肾俞、天枢、三阴交等穴位起了免疫调节作用。

综上所述，卵巢功能早衰患者经房氏调经促孕针治疗后除了激素水平有改善外，免疫功能也有明显改善。因此，本研究认为免疫功能检查可为房氏调经促孕针治疗效果评价提供一定的参考。